UNIVERSIDAD MICROBIOLOGÍA GENERAL II

NACIONAL LABORATORIO
AUTÓNOMA DE
MÉXICO Práctica No. 6
Fisiología de Levaduras
 Colarte Vergara Hortelia
FACULTAD DE  Espinosa Moya Viridiana Guadalupe
 González Zamora Dulce Gemma
ESTUDIOS
SUPERIORES
ZARAGOZA Equipo: 11 Grupo: 2752
OBJETIVOS
• Conocer las necesidades fisiológicas de las
levaduras.
• Comprender y realizar las técnicas de
Auxonograma y el Zimograma, para la
identificación de levaduras.
• Conocer la importancia clínica e industrial de
identificar levaduras.
 CARACTERÍSTICAS GENERALES

• Unicelulares.
• Con membrana y pared celular
• Pueden ser globosas, ovoides, elongadas, rectangulares,
cilíndricas, triangulares.
• Tamaño entre 3 y 6µm.
• Mesófilas
• Rango óptimo de pH entre 4.5 y 6.5
• Fuente básica de alimentación: glucosa, fructosa y sacarosa.
• Forman biopelículas o biofilms.
• Colonias cremosas.
 FORMAS DE REPRODUCCIÓN
Reproducción asexuada o
anamórfica
• Blastoconidios o gemaciones.
• Fisión transversal (binaria),
bipartición o esquizogénesis.
Reproducción sexual o
teleomórfica
• Mediante ascosporas.
• Basidiosporas.
LEVADURAS PATÓGENAS
Género Candida spp.

Morfología macroscopica Morfología microscópica

• Colonias cremosas, limitadas, planas, • Blastoconidias de diferente
opacas y en ocasiones rugosas o surcadas, tamaño, redondeadas u ovaladas,
de color blanco o blanco-amarillento. de pared delgada, de 4-6 µm de
diámetro con seudohifas y/o hifas
Género Cryptoccus spp.

Morfología macroscópica Morfología microscópica

• Forman colonias mucoides, • Blastoconidias redondeadas u
brillantes, limitadas, convexas, ovaladas, con gemación única,
blanco-amarillentas (rara vez rosas). inclusiones citoplasmáticas, pared y
refringentes, con un halo capsular
Malazzezia sp

• Morfología macroscópica • Morfología microscópica

• Colonias lisas, cremosas, de Abundantes blastoconidias
color amarillo a marrón. En redondeadas, de pared gruesa,
ocasiones pueden volverse organizadas en acúmulos.
secas, sin brillo. Fragmentos de hifas cortas, gruesa
Trichosporon sp

• Morfología macroscópica • Morfología microscópica

Masa de hifas hialinas septadas, Colonias levaduriformes húmedas,
artroconidias rectangulares u limitadas y de aspecto cerebriforme
ovales abundantes y ocasionales
blastoconidias
Geotrichum sp

• Morfología macroscópica • Morfología microscópica

Colonias blancas a beige, Hifas septadas, fragmentadas en
aterciopeladas, radiadas y artroconidias rectangulares dispuestas
una tras otra, que con el tiempo
plegadas.
redondean sus ángulos y semejan
levaduras ovales.
Rhodoturula sp

• Morfología macroscópica • Morfología microscópica

Colonias de color rojo coral- Blastoconidias capsuladas
naranja, cerebriformes, opacas ovaladas, gemantes, que no forman
seudohifas
 Saccharomyces pastorianus.
LEVADURAS BENEFICAS

Saccharomyces cerevisiae.
 PRODUCCIÓN DE PAN

S. cerevisiae,
Saccharomyces exiguus,
y Candida milleri.
SUPLEMENTOS ALIMENTICIOS Y PROBIÓTICOS
• Saccharomyces boulardii y S.
cerevisiae, se utilizan como
probióticos, restaurando la flora
intestinal.
• Evitan la infección por Clostridium
difficile.

Hanseniaspora guilliermondii, Candida zemplinina,

Candida silvae, Candida diversa, Saccharomyces
cerevisiae, Pichia membranaefaciens y Candida krusei.
PROCESOS DE BIORREMEDIACIÓN

• Yarrowia lipolytica (estado

teleomorfo de Candida lipolytica).
 NECESIDADES FISIOLÓGICAS DE LAS LEVADURAS

Respiración y Humedad y
Temperatura pH Vitaminas
nutrición osmolidad

Aerobicos
Anaerobios o
Desarrollo en medios
Aerobios facultativos: Humedad alta (mayor
neutro y ligeramente
Mesófilas: Fermentación que para mohos).
ácidos
Crecimiento de 30-
Requieren de
37°C Carbohidratos Sustrato que contiene
Rango óptimo: 4.5- vitaminas como
simples (glucosa y elevadas
6.6 Biotina o Tiamina
Termófilas: 48°C fructosa) concentraciones de
para su fermentación.
Kluyveromyces solutos
Por su metabolismo
maximus Disácaridos (carbohidratos y
llegan a acidificar
(sacarosa y Maltosa) cloruro de sodio)
más a su entorno
Complejo de Zimasa
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE CRITERIOS MORFOLÓGICOS
 AGAR SABOURAUD DEXTROSA.

La alta concentración de dextrosa y la acidez del pH hacen a

éste un medio selectivo para hongos. Candida albicans

Fórmula.
• Dextrosa 40.0g ( fuente de
energía )
• Peptona de Caseína 5.0g
(carbono y nitrógeno) Geotrichum candidum
• Digerido Pancreático de Tejido
Animal 5.0g Prototheca wickerhamii
• Agar Bacteriológico 15.0g
(agente solidificante)
• pH 5.6 ± 0.2

Rhodotorula rubra
AGAR PAPA DEXTROSA (PDA)
• Para cultivo, aislamiento y determinación del número de hongos y levaduras que atacan a las plantas
vivas o materia vegetal muerta en descomposición
• Composición:
*Pulpa de papa 250g
*Glucosa 20g
*Agar 20g
*Agua destilada 1000ml
pH final 5.6 +- 0.2.

Aspergillus niger
Saccharomyces
cerevisiae
 AGAR BIGGY
(BISMUTO GLUCOSA GLICINA LEVADURA)
COMPOSICIÓN:
 Medio selectivo y diferencial para el aislamiento Citrato de amonio y bismuto 5.0 g
e identificación de especies de Candida, a través Glicina 10.0 g
Sulfito de sodio 3.0 g
de un proceso de reducción del sustrato, Extracto de levadura 1.0 g Candida
reducen la sal de bismuto a bismuto y el sulfito Dextrosa 10.0 g albican
Agar 20.0 g
en sulfuro, estos se combinan, manifestándose Agua destilada 1000mL
en un precipitado negro o café que pigmenta a Cloranfenicol 5g
las colonias y que en ocasiones difunde en el pH 6.8 ± 0.2

medio.

EXTRACTO DE GLICINA CITRATO DE DEXTROSA AGAR

LEVADURA • Estimula el AMONIO Y • Fuente de carbono. • Agente Solidificante.
• Proporciona crecimiento. BISMUTO
nutrientes: • Inhibe grupos
• Inhibidor bacteriano.
Nitrógeno, vitaminas bacterianos.
y aminoácidos.
 AGAR HARINA DE MAÍZ
FUNDAMENTO:
• Se la agrega polisorbato 80 para reducir la tensión
superficial a fin de permitir el desarrollo de hifas y
blastoconidias.
• Se utiliza en el cultivo y diferenciación de especies
de Candida basándose en las características.
• Especialmente para Candida albicans.

COMPOSICIÓN
Harina de maíz 62.5g
Agua destilada 1500mL
Tween80 (polisorbato) 15mL (0.0.02%-1%)
Agar 20g
pH 6.0 ± 0.2
INTERPRETACIÓN
AGAR ALPISTE

Es utilizado para aislar Cryptococcus spp y Cryptococcus

neoformans. C. neoformans es el único que al metabolizar la
Guizotia abyssinica(alpiste)produce melanina originando un
color marrón oscuro.

Glucosa 20g
Creatinina 1g
KH2PO4 1g
MgSO4 0.5g
Cloranfenicol 1g
Difenilo 1g
Agar 15g
Extracto acuoso de Guizotia abyssinica 1000g
Cromagar para Candida Medium
Fórmula* por litro de agua purificada
• Es un medio selectivo y de diferenciación Cromopeptona 10,0 g
para el aislamiento de hongos. Con la Glucosa 20,0
inclusión de sustratos cromógenos en el Mezcla cromógena 2,0
medio, las colonias de C. albicans, C. Cloranfenicol 0,5
tropicalis y C. krusei producen colores Agar 15,0
diferentes, lo que permite la detección pH 6,0 ± 0,3
directa de estas especies de levaduras en
la placa de aislamiento
 AGAR NOBLE
Es un agente solidificador que está esencialmente libre
de impurezas. Se utiliza en procedimientos
electroforéticos y nutricionales y en la preparación de
medios de cultivo microbiológicos, debe utilizarse para
aplicaciones en las que se requiere claridad extrema y
alta pureza. Es adecuado para el conteo de esporas.
Ejemplo: En el medio Lodder y bastide, tiene una
variante es el medio de extracto de levaduras para
asimilación de azúcares, usado para identificar
levaduras, en la cual se agregan 20g de este agar.
 PRUEBA DEL TUBO GERMINAL O FILAMENTACIÓN PRECOZ

Es una extensión filamentosa de la

levadura, se induce el desarrollo de
una estructura tubular a partir del
blastoconidio, sin constricción en su
base, característica que lo diferencia
de una pseudohifa
La prueba es positiva Se inócula en:
si se visualizan -suero humano, de
tubos germinales conejo o ratón
Sólo C. albicans es -clara de huevo
capaz de producir -en solución
verdaderos tubos protéica
germinales Por un lapso de 2-
4 h a 37 °C.
 API - 20C AUX

FUNDAMENTO
•Se compone de 20 cúpulas con
sustratos deshidratados.
• La cúpulas se inoculan con
medio semisólido y las levaduras
se reproducen sólo si son
capaces de utilizarlo.
• Permite identificar 34 especies
diferentes como enterobacterias,
bacilos gram negativos,

UTILIDAD
Observar el crecimiento de
levaduras en comparación con la
cúpula del control negativo

INTERPRETACIÓN
Una cúpula más turbia que el
testigo indica reacción positiva
 UNI – YEAST - TEK
Fundamento:
Está constituido por una placa plástica con
múltiples compartimentos que contienen un
medio con agar para la asimilación diferencial de
siete hidratos de carbono. También incorpora
una cubeta central con agar harina de maíz-
Tween 80 para determinar el crecimiento
micelial y la producción de clamidosporas.
 FORMACIÓN DE HIFAS, BLASTOCONIDIAS, CLAMIDOSPORAS Y
ARTROSPORAS

La formación de hifas, blastoconidias,

clamidosporas o artrosporas por
parte de las levaduras constituye
una característica morfológica de
gran importancia para la
identificación de algunas especies
de levaduras
• Agar harina de maíz, Leche
diluida, Tinciones.
Si el desarrollo revela:

• la presencia de pseudohifas y
blastoconidias, pertenece al género
Candida.

• Verdaderas hifas y artroconidias, se

trata de especies de Trichosporon,
Geotrichum, Galactomyces o
Blastoschizomyces
TINTA CHINA
• Las partículas de carbón empleadas están cargadas negativamente y son repelidas
por la carga negativa de la pared y delimitan una silueta mayor que el tamaño real de
la bacteria
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE CRITERIOS BIOQUÍMICOS
 DETECCIÓN DE UREASA

Se basa en la capacidad de
producir la enzima ureasa, la
cual desdobla la urea en
dióxido de carbono y amonio,
incrementando el pH del
medio
 PRUEBA DE LA ENZIMA NITRATO-REDUCTASA

Es la capacidad que tienen algunas cepas de

levaduras de producir nitritos a partir de nitratos
por la presencia de la enzima nitrato-reductasa.
 PRUEBA DE LA FENOL-OXIDASA

C. neoformans produce fenol-

oxidasa, una enzima necesaria
para el metabolismo de la 3,4-
dihidroxifenilanina (DOPA) y otros
compuestos fenólicos en la
síntesis de la melanina.
 MÉTODO DEL AUXONOGRAMA
• FUNDAMENTO
Aplicación por separado de diversos
nutrientes, hidrocaronados o
nitrogenados sobre medio sintético base
para apreciar el crecimiento selectivo de
una levadura con los nutrientes
necesarios para su desarrollo
• Podemos identificar diferentes
tipos de levaduras como:
• Candida sp, Cryptococcus sp ,
Saccharomyces sp y Malassezia
sp
MEDIOS DE CULTIVO BASE
INTERPRETACIÓN
 ZIMOGRAMA
• Capacidad de fermentar uno o varios azucares.
• Se utilizan distintos azucares mas purpura de bromocresol.
• Degradación anaerobia con producción de ácido y gas.
• El género Cryptococcus no fermenta los azúcares y por
tanto el resultado es negativo.
OTROS SISTEMAS POR ASIMILACIÓN DE NUTRIENTES
• Auxacolor
• Uni-Yeast-Tek
• RapiD Yeast Plus Sistem
• Fongiscreen 4H
BIBLIOGRAFÍA
• Bonifaz Trujillo J. Alexandro, Micología Médica Básica, Mc Graw-Hill Interamericana editores S.A. de C.V.,
Quinta edición, impreso en China, 2010, págs. 92-105.
• Rippon J. Tratado de Micología Médica, Interamericana McGraw-Hill, primera edición México, 1990,pág.
274.
• Koneman Roberts, Micología Práctica de Laboratorio, Editorial Panamericana, tercera edición, Argentina,
1990.
• Identificación de levaduras. Revista Iberoamericana de Micologia. Capitulo 11. 2007.

• Andreoni S., Molinari G.L., Ruzza P., Dellera A. Evaluation of Chromogenic Candida Agar for isolation and
presumptive identification of yeasts. XLI AMCLI Italian Clinical Microbiologists Association Congress
Rimini, November 13-16, 2012.

• MacFaddin, J. D. 1985. Media for isolation – cultivation – identification - maintenance of medical

bacteria, vol. 1, p. 65-68. Williams & Wilkins, Baltimore, MD.