Secuenciación Del Adn

Integrantes:
♂ Hagi Medina ♀ Noelia Salazar
♀ Anapaula Rodríguez ♂ Anthony Villegas
¿ Que es la Secuenciación del ADN ?

• Es un conjunto de métodos y técnicas bioquímicas cuya finalidad es la

determinación del orden de los nucleótidos (A, C, G y T) en
un oligonucleótido de ADN.

• La secuencia de ADN constituye la información genética heredable que

forma la base de los programas de desarrollo de los seres vivos.

• Así pues, determinar la secuencia de ADN y asi es útil en el estudio de

la investigación básica de los procesos biológicos fundamentales.

• El desarrollo de la secuenciación del ADN ha acelerado

significativamente la investigación y los descubrimientos en biología.
Las técnicas actuales permiten realizar esta secuenciación a gran
velocidad, lo cual ha sido de gran importancia para proyectos de
secuenciación a gran escala como el Proyecto Genoma Humano
► Inicios

El primer método diseñado para secuenciar el ADN fue

desarrollado por Allan Maxam y Walter Gilbert en 1977.
Es un método químico que somete la molécula de DNA a
distintos métodos de ruptura.
Cada método escinde la molécula allí donde haya un nucleótido
específico.

El Método de Sanger fue diseñado por Fred Sanger en 1977.

También se conoce como método didesoxi o secuenciación por
terminación de la cadena.
Es un método enzimático que permite determinar la secuencia
del molde a medida que se sintetiza su hebra complementaria.
► Secuenciación de sanger

Rutinariamente se
secuencian
regiones de ADN
de hasta 900 pares
de bases con un
método
llamado secuencia
ción de
Sanger o método
por terminación de
cadena.

En el Proyecto Aunque actualmente

Genoma Humano, los genomas se
se utilizó la secuencian con otros
secuenciación de métodos que son
Sanger para más rápidos y menos
determinar las costosos, la
secuencias de secuenciación de
muchos Sanger todavía se
fragmentos usa ampliamente
relativamente para secuenciar
pequeños de ADN piezas individuales
humano. de ADN
 ► Secuenciación de sanger
Ingredientes para la secuenciación de Sanger:

La secuenciación de Sanger consiste en hacer muchas copias de una región

blanco de ADN. Sus ingredientes son similares a los necesarios para la
replicación del ADN en un organismo o para la reacción en cadena de la
polimerasa (PCR), que copia el ADN in vitro. Los ingredientes son:
• Una enzima ADN polimerasa
• Un cebador, que es un fragmento pequeño de ADN
monocatenario que se une al molde de ADN y actúa como un
"iniciador" de la polimerasa.
• Los cuatro nucleótidos del ADN (dATP, dTTP, dCTP, dGTP).
• El molde de ADN que será secuenciado.

Sin embargo, una reacción de secuenciación de Sanger también contiene un

ingrediente único:
• Versiones didesoxi, o terminadores de la cadena, de los cuatro
nucleótidos (ddATP, ddTTP, ddCTP, ddGTP), cada uno marcado
con pigmentos de colores.
• Una vez que se añade a la cadena un nucleótido didesoxi, ya no
hay un hidroxilo sobre el que se puedan agregar más nucleótidos.
► Secuenciación de sanger

¿Se marcaran
todos los
fragmentos?
MÉTODO DE SECUENCIACIÓN DE No, no todos. La
¿Dónde se coloca SANGER incorporación de
el pigmento? nucleótidos
La muestra de ADN que se secuenciará
La molécula del se combina en un tubo con el cebador, didesoxi es una
pigmento en un la ADN polimerasa y los nucleótidos del cuestión de azar
nucleótido didesoxi ADN (dATP, dTTP, dGTP y dCTP). en cada reacción
se une a la base de polimerización
nitrogenada. También se añaden los cuatro particular.
nucleótidos didesoxi terminadores de la
cadena, marcados con su pigmento,
pero en cantidades mucho más
pequeñas que los nucleótidos
normales.
Primero se calienta la mezcla para
desnaturalizar el molde de ADN
(separar las cadenas) y luego se enfría
para que el cebador pueda unirse al
molde de cadena sencilla.
► Secuenciación de sanger
► Secuenciación de Nueva Generación
Hay una variedad de técnicas de secuenciación de nueva generación que utilizan
diferentes tecnologías.
Altamente Longitudes
Microescalas Rápidas Bajo Costo
Paralelas Cortas

Conceptualmente, la secuenciación de nueva generación es como hacer un número

muy grande de pequeñas reacciones de secuenciación de Sanger en paralelo
Gracias a esta paralelización y a la pequeña escala, los métodos de última
generación permiten secuenciar grandes cantidades de ADN de forma mucho más
rápida y barata con que con la secuenciación de Sanger.

¿Por qué es importante que la secuenciación sea rápida y barata?

La capacidad de secuenciar genomas de forma rutinaria abre nuevas posibilidades en
la investigación biológica y en aplicaciones biomédicas. Por ejemplo, la secuenciación
de bajo costo es un paso hacia la medicina personalizada
► Otros Métodos de Secuenciación

Otros métodos de secuenciación por ADN podían tener

ventajas en términos de eficiencia o exactitud.
•Al igual que la secuenciación por terminador marcado por
tinción, están limitadas a la secuenciación de fragmentos
únicos aislados.
•La “secuenciación por hibridación" es un método no
enzimático que usa un chip de ADN.
En este método, un único reservorio de ADN se marca
mediante fluorescencia y se híbrida con un colección de
secuencias conocidas.
Si el ADN desconocido se híbrida fuertemente en un punto
dado de entre las secuencias, haciéndole que "luzca",
entonces se infiere que esa secuencia existe dentro de los
ADN desconocidos que son secuenciados.
GRACIAS