Qué es

El análisis de electroforesis de hemoglobina

mide los tipos de hemoglobina que se
encuentran en el torrente sanguíneo.
 Lahemoglobina, la proteína presente en los
glóbulos rojos que transporta oxígeno, tiene
varias formas moleculares, algunas normales
y otras anormales.
 Lahemoglobina normal transporta y libera
oxígeno de manera eficiente, mientras que la
anormal no.
 Algunos de los tipos más comunes de
hemoglobina normal son los siguientes:
 Hemoglobina F: el tipo normal que se
encuentra en el feto y en el recién nacido. Es
reemplazada por la hemoglobina A después
del nacimiento.
 Hemoglobina A: el tipo normal que se
encuentra con más frecuencia en niños y
adultos sanos.
 Hemoglobinas S, C, D, E, M y cientos de
tipos no muy comunes: los tipos de
hemoglobina anormal.
 Materiales:
 Centrifugadora
 Cámara de electroforesis
 Fuente de poder para la cámara de
electroforesis
 Imanes para sujetar las tiras de acetato de
celulosa
 Tiras de acetato de celulosa
 Cubetas plásticas para las soluciones de
ácido acético (3)
 Capilaresde vidrio
 Muestras de sangre AA y AS (ó SS)
 Solución amortiguadora (Buffer) de pH 8.6 -
9.16
 Solución salina fisiológica
 Cloroformo
 Tinte Ponceau's
 Ácido acético 5%
 PROCEDIMIENTO:
 PREPARACIÓN DE LA SANGRE:
 Centrifugar 5 mL de sangre por 5 minutos a
3000 r.p.m. (para remover el plasma).
 Lavar los eritrocitos con solución salina
fisiológica, tres veces. Para esto se
centrifuga cada vez por tres minutos a 3000
r.p.m.
 remover el sobrenadante después de cada
centrifugación.
 Agregar 0.4 mL de cloroformo y agitar
vigorosamente por 5 minutos.
 Centrifugar por 15 minutos a 3000 r.p.m.
 Separar el hemolizado del sobrenadante
PREPARACIÓN DE LA ELECTROFORESIS:
 Colocar una tira de acetato de celulosa
dentro de una cubeta conteniendo solución
buffer (pH 8.6 - 9.2); dejar allí por 5
minutos.
 Sacar la tira de la solución y eliminar el
exceso de buffer.
 Colocar la tira en la cámara de electroforesis
 Use un capilar para aplicar las muestras en la
tira de acetato de celulosa.
 Añada suficiente buffer dentro de la cámara
hasta que haga contacto con los extremos de
la tira.
 Corra la muestras por unos 30 minutos
 Saque la tira, una vez que se cumpla el
tiempo de corrida.
 Tiña la tira con el Ponceau's durante 10
minutos (no agite).
 Decolore la tira agitándola suavemente en un
baño de ácido acético al 5% hasta que el
fondo rojizo sea removido (se realizan tres
baños sucesivos).
 Secar la tira en un incubador por 10 minutos
a una temperatura entre 60 - 100º C.
 Observe la tira y aprecie las diferencias de
movilizaciones de las hemoglobinas
empleadas.