UNIVERSIDAD NACIONAL DE

CHIMBORAZO
Carrera: Laboratorio Clínico e Histopatológico
Asignatura: Técnicas Histológicas
Docente: Lic. Iván Peñafiel Méndez
Tema:
• Fijadores
• Fijadores con y sin formol
 FIJACIÓN
Los objetivos de la fijación son:
 Mantener las estructuras en el
estado más parecido al que
poseían en vivo.
 Evitar la autólisis celular y la
proliferación bacteriana
 Dar cierta solidez o dureza al
tejido o material.
La fijación detiene los procesos
vitales pero en ciertas condiciones
mantiene las actividades de algunos
componentes moleculares, por
ejemplo la actividad de algunas
enzimas
 CARACTERÍSTICAS DE UN
FIJADOR IDEAL
 Capacidad de bloquear la
autolisis inmediatamente
(Destrucción celular)
 Poseer efecto microbicida,
impidiendo la acción bacteriana, la
cual provoca la degradación del
tejido
 No provocar retracciones o
distorsiones las cuales pueden
alterar sus arquitectura
 Cuidar la textura y
composición tisular que favorezca
la inclusión, el corte y la
coloración del materia
histológico
FIJADORES QUÍMICOS

• Fijadores por deshidratación tisular

• Fijadores que actúan por cambios en el
estado coloidal de las proteínas
• Fijadores por formación de sales con
los tejidos
 FIJADORES POR DESHIDRATACIÓN TISULAR

Son sustancias altamente higroscópicas Alcohol etílico

es decir absorben agua actúan
eliminando tanto el agua libre como el
agua ligada a las proteínas de forma
que estas últimas precipitan y
disminuyen su solubilidad. Acetona
 Como fijador único se utiliza
ALCOHOL ETÍLICO alcohol a una concentración
entre el 70 y 90%

• Líquido claro
Tiempo de fijación: pieza de
• Transparente o incoloro
5mm de espesor es dos a
• Volátil
cuatro horas renovando unas
• Inflamable
3 veces el líquido.
• Olor agradable

Es un fijador que preserva el Se obtiene:

glucógeno y la actividad de 70-90 ml de
ciertas enzimas titulares, fija los alcohol puro y se
pigmentos y se emplea en las lleva hasta 100 con
extensiones citológicas. agua destilada.
 ACETONA

• Líquido transparente
• Inflamable
• Muy volátil Tiempo de fijación:
• Olor dulzor. nunca excederá de dos
horas y en piezas
delgadas son
recomendables 20
Deshidrata rápidamente minutos

Conserva muy bien la

estructura antigénica y la
actividad enzimática
 FIJADORES QUE ACTÚAN POR CAMBIOS EN EL
ESTADO COLOIDAL DE LAS PROTEÍNAS

Ácido acético:

Son de carácter ácido y se

emplean formando parte de
mezclas fijadores. Poseen Ácido sulfosalicílico:
además una gran velocidad d
penetración en los tejidos y
algún poder de descalificación.
Ácido tricloroacético:

Ácido crómico:
 Ácido acético:

• Líquido transparente Olor Se utiliza diluido en

avinagrado fuerte concentraciones entre el 1 y 5 %
• Sus vapores son muy formando parte de mezclas
inflamables en estado puro se fijadores o de soluciones
denomina: ác. Acético glacial. decalcificantes

Ácido tricloroacético:

• Son cristales incoloros cáusticos,

Nunca se lavan el tejido después
solubles en agua en solución al 5 %
de usar éste ácido porque el
fija los nervios de 8 a 20 horas.
edema que produce es excesivo
• Al 2.5 % se usa mezclado con otras
y de lugar a muchos artefactos.
sustancias
 Ácido sulfosalicílico:

• Se usa al 5% es buen fijador porque

permite casi todas las coloraciones Tiempo de fijación: 6 a 24 horas
• Endurece óptimamente los en la oscuridad
tejidos pero no los contrae después
hay que lavar el tejido con agua

Ácido crómico:

Se emplea en disoluciones al 2% Excelente fijador estructural y

formando parte de mezclas actúa como mordiente en
fijadoras tinciones que emplean colorantes
básicos
 FIJADORES POR FORMACIÓN DE SALES
CON LOS TEJIDOS

Cloruro de mercurio o sublimado:

• Es un polvo cristalino blanco y
venenoso y hay que usarlo bajo
campana se usa en soluciones del 5-6%

Dicromato Potásico:
• Es un polvo anaranjado que reacciona
con las proteínas para formar cromatos
• Se utiliza en disolución acuosa al 1-2%,
fija las proteínas
• Después de la fijación del dicromato
deben lavarse abundantemente con
agua.
 Ácido Pícrico:
• Actúa coagulando las proteínas a
través de la formación de picratos que
las confieren gran apetencia por
colorantes ácidos.
• Se utiliza en solución saturada al 2%, es
un excelente fijador estructural que
conserva adecuadamente la composición
proteica de los tejidos.

Acetato de uranilo:
• Es una sal soluble en agua
• Cristalizado de color verde
• Se descompone con la luz, no
endurece los tejidos
• Se usa en soluciones al 2-3%
normalmente mezclado con OsO3 y
después de la fijación hay que lavar el
tejido abundantemente con agua.
FIJADORES CON FORMOL
 Líquido de Bouin
Solución muy usada como
alternativa a la formalina cuando
queremos fijar ciertos tejidos
como: piel, órganos endocrinos,
testículos y tejido embrionario
en general.

PREPARACIÓN

SOLUCIÓN ACUOSA DE ÁC. PÍCRICO…………………...750.0 ml

FORMALINA CONCENTRADA……………………….…...250.0 ml ÁC.
ACÉTICO GLACIAL………………………………...….50.0 ml PH.
FINAL……………………………………..…………….…2.2 TIEMPO DE
FIJACIÓN………………………………..……..2 a 24 horas
 Fijador de Bouin-Hollander:
• Variante del líquido de Bouin especialmente
indicado para la fijación de los cilindros de
biopsia de médula ósea cuando no es
posible controlar el tiempo de fijación de la
muestra en éste líquido
• La conservación, puede incluso conservar las
48 horas sin que se produzca excesivo
endurecimiento.

PREPARACIÓN:

ACETATO NEUTRO DE COBRE………….……………2.5 gr. ÁC.

PÍCRICO……………………………………………..4.0 gr. FORMALINA
CONCENTRADA……………………....10.0 ml. ÁC. ACÉTICO
GLACIAL……………………….……….1.5 ml. AGUA
DESTILADA…………………………………..100.0 ml.

Para preparar la solución se disuelve primero la sal de cobre en el agua destilada

luego se añade el ácido pícrico y tras filtrarlos el formol y el ácido acético glacial.
 Bouin alcohólico (Fijador de
Dubosq-Brasil)
• Es una alternativa de líquido de Bouin
cuando la pieza que se debe fijar es
relativamente voluminosa porque posee
una velocidad de penetración mucho más
elevada.
• Se utiliza también cuando se precisa una
fijación específica de sustancias
hidrosolubles como el glucógeno ya
que evita su disolución.

PREPARACIÓN:

ALCOHOL ETILICO 80%...............................................75.0 ml.

ÁC. PÍCRICO………………………………………………0.5 gr.
FORMALINA CONCENTRADA………………...……..30.0 ml.
ÁC. ACÉTICO GLACIAL……………………………..….7.5 ml.

Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijación para fragmentos con un espesor
en torno a 5 milímetros es de 2 a 3 horas
 Fijador de Müller

Es la disolución acuosa de un fijador

simple de dicromato potásico con la
adición de sulfato sódico

PREPARACIÓN:

DICROMATO POTASICO…………………………………2.5gr.
SULFATO SÓDICO………………………………………..1.0 gr.
AGUA DESTILADA ……………………………………100.0 ml.
Tiempo de fijación 4 y 8 horas. Tras la fijación es necesario lavar
abundantemente en agua corriente durante unas horas.
 Fijador de Orth

Se emplea exclusivamente en
ciertas técnicas de fijación de
tejido nervios.

PREPARACIÓN:

Idéntica a la composición del fijador de Müller.

SOLUCIÓN STOCK………………………………..90.0 ml.

FORMULINA CONCENTRADA………………….10.0 ml.
El tiempo de fijación de tejido nervioso es de 48 horas y tras el proceso de
fijación los tejidos han de ser lavados abundantemente en agua y almacenados
en alcohol etílico al 70%.
 Líquido de Karnovsky

Técnica para el uso del líquido

Se utiliza especialmente para la de Karnovsky:
• Añadir 10 ml de glutaraldehido al
fijación de muestras 50%
destinadas al estudio con • Verter a la solución, hasta
microscopio electrónico alcanzar los 100 ml con tampón
fosfato 0,1 M y pH 7.2

El fijador se lleva al campo en

nevera portátil para asegurarnos PREPARACIÓN:
que no sobrepasen los 4ºC. FORMALDEHÍDO AL 10%…………………………….....20 ml
El tiempo de fijación en esta GLUTARALDEHÍDO AL 50%………………………….. 10 ml
mezcla nunca debe ser inferior a CACODILATO DE SODIO 0.2M………………………..70 ml

12 horas
 Líquido de Gendre
• Variante de la mezcla de Bouin y
se la emplea con muy buenos
resultados para la fijación de
Glucógeno.
• Tras fijar, las muestras se deben
lavar con varios baños de etanol
al 70º

PREPARACIÓN:

ACIDO PÍCRICO………………………………......80 ml (Solución

etanólica saturada)
FORMALDEHÍDO PURO…………………...…….15 ml
ÁCIDO ACÉTICO GLACIAL………………………5 ml
 Líquido de Lewitsky

Se lo utiliza para la preservación de

tejidos embrionarios con muy buenos
resultados de fijación.

PREPARACIÓN:

ACIDO CRÓMICO AL 1%…………………………….....50 ml

FORMOL AL 10%……………………………………...... 50 ml
Líquido Anatech Ltd. o Formol-zinc

• Excelente fijador para

inmunohistoquímica.
• La solución tamponada se prepara
agregando 1.6 gr de cloruro de zinc a
1000 ml de Formol-PBS pH 7,2.

PREPARACIÓN:

FORMALDEHÍDO………………………………......100 ml
CLORURO DE SODIO……………………………...4.5 gr
SULFATO DE ZINC………………………………...1.6 gr
AGUA DESTILADA………………………………...900 ml
 Líquido de Nelly (Solución de B-5 y
Zenker-Formol )
• La mayor utilidad de estos
fijadores es que mejoran
La denominación B5 corresponde en
considerablemente la tinción
realidad a una modificación de la de
nuclear,
Zenker. La solución de Zenker-
• Este liquido es imprescindible
formol contiene dicromato potásico
para el diagnóstico morfológico
y sulfato sódico.
en las patologías del sistema
linfoide y hematopoyético.

Estas soluciones B5 zenker

formol son los fijadores de
elección para el riñón,
PREPARACIÓN:

hígado, fibras de tejido SOLUCIÓN STOCK DE B5…………………………………20.0 ml.

FORMALINA CONCENTRADA …………………….…2.0 ml.
conectivo y para fibrina
FIJADORES SIN FORMOL
 Líquido de Zenker
Su empleo ha quedado
Trata de combinar los efectos
prácticamente restringido al proceso
favorables del sublimado y del
de refinación decalcificación a que
dicromato potásico. En la
son sometidas las biopsias de médula
práctica habitual ha sido
ósea cuando se realiza una fijación
sustituido por B5.
inicial con B5.

PREPARACIÓN:

SOLUCIÓN STOCK DE ZENKER…………………………95.0 ml.

ÁC. ACÉTICO GLACIAL………………………………..… 5.0 ml
 Líquido de Carnoy
Es el mejor fijador conocido
para el glucógeno y en general,
para los hidratos de carbono Acción fijadora es
simples y para proteínas fibrilares y extremadamente rápida
sobre todo miofibrillas, su acción deshidratando el tejido al
fijadora es extremadamente rápida mismo tiempo
deshidratando el tejido al mismo
tiempo

PREPARACIÓN:

ETANOL ABOSLUTO………………………………..60.0 ml.

CLOROFORMO……………………………………….30.0 ml.
ÁC. ACÉTICO GLACIAL……………………………..10.0 ml.
El tiempo de fijación puede ser acortado hasta 3 horas. Las muestras
deben cambiarse directamente a alcohol etílico absoluto
LINKOGRAFÍA:
 SlideShare. (08 de junio de 2016). Obtenido de Fijadores
Histológicos:
https://es.slideshare.net/Marcorojas78441/clasificacin-
defijadoresconformolysinformol-grupo-6
 C., J. (2015). Scribd. Obtenido de Fijadores con formol:
https://es.scribd.com/doc/315382527/Diapositivas-de-Fijadores-
con-Formol
 Euita. (2013). Obtenido de Fijadores Químicos:
http://www.euita.upv.es/varios/biologia/tecnicas_de_histologia_v
egetal/Documentos/Fijadores_quimicos.htm
 Tomasi, V. (26 de Noviembre de 2008). Mezclas Fijadoras.
Obtenido de
http://educacionhistotecnologiamezclasfijado.blogspot.com/