Criterios para la validación de

MétodosCOFEPRIS-SSA
fisicoquímicos

Evaluación de materias primas para la producción de

medicamentos

Equipo 5
Objetivo
Definir los criterios mínimos para llevar a cabo actividades
de validación de métodos que involucren mediciones
fisicoquímicas y físicas, cuantitativas y cualitativas, para
confirmar que estos se pueden aplicar correctamente antes
de utilizarlos para los ensayos analíticos.
Alcance

Este documento debe ser

aplicado por el personal de
laboratorios de ensayo
aspirantes ante la Cofepris a
terceros autorizados para la
validación de sus métodos y
por los miembros del padrón
de evaluadores para el proceso
de evaluación a los laboratorios
de prueba.
Definiciones

• Analito
• Blanco de Reactivos
• Blanco de Muestra
• Criterios de Aceptación
• Matriz o Placebo
• Método Normalizado
• Método no Normalizado
• Repetibilidad
• Resultado de ensayo
• Robustez
• Selectividad
Documentos aplicables

AOAC: Directrices para la validación de un solo laboratorio de

métodos químicos para suplementos dietéticos y botánicos

CENAM: Guía para estimar la incertidumbre de la Medición

COLEGIO NACIONAL DE QUIMICOS FARMACEUTICOS BIOLOGOS:

Guía de validación de Métodos Analíticos

DIRECTIVA 96/23/CE: en cuanto al funcionamiento de los métodos

analíticos y la interpretación de los resultados
 CRITERIO N° 1
DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDAD

Clasificación del método como normalizado o no

normalizado conforme a lo siguiente:
Método Normalizado es aquel método publicado
como primera instancia en:

- Normas Oficiales Mexicanas (NOM)

- Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos
(FEUM)
- Normas Mexicanas (NMX)
En segunda instancia:

- Metodos oficiales del AOAC ( Asociación de

Comunidades Analíticas)
- Standard Methods
- Environmetal Protection Agency (EPA)
Método no normalizado es aquel:

- Desarrollado por el Laboratorio (método propio)

- Método obtenido de publicaciones científicas
(Journals, tesis, etc.)
- Método normalizado modificado, ampliado o
usado fuera de su alcance
CRITERIO N° 2

Parámetros de desempeño de acuerdo

al tipo de método
Los parámetros de desempeño a considerar para los métodos fisicoquímicos dependerá del tipo de prueba
que se trate
CRITERIO N° 3

Clasificación del método por tipo de

prueba
CRITERIO N° 4

Establecer los parámetros finales de

desempeño con base al tipo de
prueba
 CRITERIO 5

Seleccionar el tipo de matriz a evaluar conforme a:

1. La más solicitada.

2. La más compleja.

3. Para métodos generales que apliquen a diferentes matrices; FEUM,

Residuos orgánicos, metales contaminantes, etc.
Se debe seleccionar una matriz
representativa por grupo (alimentos,
principio activo, tipo de presentación, entre
otros)

a. Alimentos: lácteos, cárnicos, productos de

la pesca agua, cereales, frutas, vegetales,
productos de panificación, miel, productos
de confitería, especias, entre otros.

b. Medicamentos: cápsula, gragea, tableta,

suspensión, jarabe, ungüento, colirio,
espuma, gel, supositorio, parche, jalea, óvulo,
entre otros.
CRITERIO 6
Evaluar los parámetros
de desempeño
Parámetros
- Intervalo lineal
- Intervalo de trabajo
- Límite de Detección
- Límites de Detección y cuantificación
- Recuperación y sesgo
- Repetibilidad
- Reproducibilidad
- Sensibilidad
- Selectividad
- Robustez
- Incertidumbre
 Intervalo lineal
- Muestras
Blancos de muestra
Mínimo 5 niveles diferentes de concentración
- Repeticiones
Cada nivel por triplicado
- Calcular/Determinar
a) Graficar respuesta analítica (y) nivel de
concentración adicionado (x)
b) Confirmar visualmente la existencia de
linealidad del intervalo.
c) Elaborar gráfico de residuales.
d) Confirmar aleatoriedad de los residuales
alrededor de la recta
- Observaciones
a) Utilizar niveles establecidos en la
curva de calibración ó utilizar la
tabla guía contenida en el anexo A.
b) Los niveles de concentración
deben estar igualmente espaciados
en el intervalo de interés.
c) Considerar en el intervalo el valor
de la especificación y/o los valores
de aceptación y rechazo y estar en
la medida de lo posible al centro de
este.
d) Reportar el intervalo de
concentraciones obtenido en las
unidades establecidas por el
método.
Intervalo de trabajo

- Muestras c) Calcular la pendiente (m) y el

Blancos de muestra coeficiente de correlación (r ).
Mínimo 5 niveles diferentes de
concentración - Observaciones

- Repeticiones a) Utilizar los datos obtenidos en la

Cada nivel por triplicado estimación del intervalo lineal.
b) Reportar el intervalo de
- Calcular/Determinar concentraciones obtenido en las
a) Considerar los niveles que unidades establecidas por el
cumplen con los criterios de método
recuperación y repetibilidad
establecidos.
b) Graficar la concentración
obtenida (y) vs. la concentración
adicionada (x)
Límite de Detección
- Muestras
Blancos de muestra
Mínimo 5 niveles diferentes de
concentración
- Observaciones
Concentración mínima en la cual se
obtienen 10 resultados positivos

- Repeticiones
10 réplicas de cada nivel

- Calcular/Determinar

Elaborar tabla de respuesta de

resultados positivos y negativos
con respecto a la concentración
Límites de detección y cuantificación
- Muestras b) Estimar los límites con las
Blancos de muestra siguientes ecuaciones:
Mínimo 5 niveles diferentes de LD= 3.3 * SBo/m
concentración
LC= 10*SBo/m
- Repeticiones
Cada nivel por triplicado - Observaciones
a) Utilizar los datos obtenidos en la
estimación del intervalo de trabajo.
- Calcular/Determinar
b) Reportar los límites estimados
a) Calcular la pendiente (m) y la estadísticamente en las unidades
desviación estándar de la ordenada establecidas por el método.
al origen (sbo) de la respuesta c) Considerar como límite práctico
analítica (y) vs nivel de de cuantificación el nivel inferior
concentración estimado
adicionado (x)
en el intervalo de trabajo.
Recuperación y sesgo
- Muestras b) Para el sesgo, efectuar la resta
Blancos de muestra aritmética de la concentración
Mínimo 5 niveles diferentes de añadida menos la concentración
recuperada.
concentración
- Observaciones
- Repeticiones
Cada nivel por triplicado a) Utilizar los datos obtenidos en la
estimación del intervalo de trabajo

- Calcular/Determinar b) Reportar la recuperación como

intervalo en % y el sesgo como
a)Calcular la concentración intervalo en las unidades
recuperada para cada nivel de
establecidas por el método.
concentración adicionado.
Repetibilidad
- Muestras
Blancos de muestra (placebos) o
muestras adicionadas.
3 niveles diferentes de concentración
- Repeticiones
- como los datos para el día 1 (cada
Cada nivel por sextuplicado
- Calcular/ Determinar
a) Analizar las muestras por un
mismo analista (analista 1) en 2 días
diferentes (3 niveles/triplicado /día).
b) Calcular la media (x), desviación
estándar (sr) y el coeficiente de
variación (CVr) de los % de
recuperación obtenidos para cada
nivel adicionado.
c) Calcular el % de recuperación de
los 6 resultados para cada nivel
- Observaciones
a) Utilizar la información obtenida en
la estimación del intervalo de trabajo
nivel por triplicado por día).
b) Reportar la desviación estándar
(sr)o coeficiente de variación (CVr)
máximo obtenidos.
c) Si no se cuenta con dos analistas o
dos equipos para estimar la
reproducibilidad, estimar solo la
repetibilidad con el mismo analista
pero utilizando un tercer día.
Reproducibilidad

- Muestras c) Combinar estos resultados con

los datos obtenidos en la
Blancos de muestra (placebos) o estimación de la repetibilidad y
muestras adicionadas. calcular la media (x), desviación
3 niveles diferentes de estándar (sR) y el coeficiente de
concentración variación (CVR) de los % de
recobro para cada nivel.
- Repeticiones
- Observaciones
Cada nivel por sextuplicado
Reportar la desviación estándar
- Calcular/Determinar (sR) o coeficiente de variación
a) Analizar las muestras en 2 días (CVR) máximos obtenidos
diferentes (3 niveles/triplicado/día)
y por un analista diferente (analista
2)
b) Calcular el % de recuperación de
los 6 resultados para cada nivel
Sensibilidad

- Muestras - Observaciones
Blancos de muestra
Mínimo 5 niveles diferentes de a) Utilizar los datos obtenidos en la
concentración estimación del intervalo de trabajo
b) Reportar la relación entre el
- Repeticiones
cambio de respuesta analítica por
Cada nivel por triplicado
unidad de concentración.

- Calcular/Determinar

a) Graficar la respuesta analítica (y)

vs la concentración adicionada (x)
b) Calcular la pendiente de la recta
(m)
 Selectividad
- Muestras
Blancos de muestra o muestras adicionadas
con cantidades conocidas de interferencias,
productos de degradación o impurezas.
- Repeticiones
Por duplicado
- Calcular
Evaluar si la presencia de las interferencias,
impurezas o productos de degradación
inhiben o incrementan la detección del
analito.
- Observaciones
Pueden emplearse técnicas confirmatorias para
asegurar la identidad del analito como son la
utilización de detectores de espectrometría de
masas, arreglo de diodos o infrarrojo.
Cuando no se tienen estándares de
interferencias o impurezas se pueden aplicar las
siguientes condiciones de degradación:
a) Temperatura: 70-120 °C o 20 °C por debajo
de su punto de fusión, durante 2 a 4 semanas.
b) Luz UV, luz fluorescente y/o humedad relativa
por un tiempo apropiado.
c) pH 1 a 2 y/o 10 a 12 y someterlas a 60-80 °C
por un tiempo apropiado.
d) Para líquidos y semisólidos adicionar
peróxido de hidrógeno.
Robustez
- Muestras c) Analizar una muestra por duplicado
con cada serie de combinaciones
Blancos de muestra o muestras d) Calcular las diferencias de las
adicionadas Concentración equivalente
mediciones de los subgrupos.
al nivel medio estimado en el intervalo
e) Graficar en una línea los valores
de trabajo
de las diferencias de menor a
- Repeticiones mayor.
8 muestras por duplicado f) Calcular la desviación estándar
de las diferencias (sDi).
- Calcular/Determinar
a) Identificar de 4 a 7 factores que
- Observaciones
puedan tener un efecto significativo en
a) Reportar los factores que más
el desempeño del método y variar
ligeramente cada uno ellos. influyen en el resultado final.
b) Efectuar una serie de 8 b) Establecer si el método es
combinaciones de valores nominales robusto frente a las variaciones
con variaciones deliberadas establecidas.
Incertidumbre

- Repeticiones - Observaciones

Utilizar la información obtenida en Puede utilizarse como guía los

el proceso criterios establecidos en las
de validación. referencias 2, 12, 14, 16 y 18.

- Determinar/Calcular
a) Especificar el mensurando.
b) Identificar las fuentes de
incertidumbre
c) Cuantificar los componentes de
la
incertidumbre (u)
d) Calcular la incertidumbre
estándar combinada (uc)
e) Calcular la incertidumbre
expandida(Uexp)
CRITERIO 7

Criterios de aceptación
Parámetro Criterio de aceptación

a) Comportamiento lineal en la gráfica de concentración vs respuesta analítica.

Intervalo lineal b) Datos aleatorios en el gráfico de residuales

a) Pendiente: valor cercano a 1

Intervalo de trabajo b ) Coeficiente de correlación:
r ≥ 0.98 para cuantificación de residuos e impurezas
r ≥ 0.99 para cuantificación de contenido e ingrediente activo

Límite de cuantificación Nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo

práctico

Límite de cuantificación Menor o igual al nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo

estimado

Límite de detección Los establecidos en la referencia original del método. Si no se dispone de estos
Recuperación datos utilizar como guía las tablas contenidas en el anexo B.
Repetibilidad
Reproducibilidad

Si sDi < sR el conjunto de los factores no influye en el resultado y por tanto el

Robustez método es robusto.
CRITERIO 8
Protocolo de validación
Protocolo de validación
CRITERIO 9
Informe de resultados de
validación
 6.0 NOTIFICACIÓN DE VIGENCIA
• Se otorga un periodo de transición de 180 días contados a
partir de la fecha de publicación.

• Estos criterios se aplicarán en todos los procesos de

evaluación que se realicen a los 180 días naturales, a partir de
la fecha de publicación del documento en la página web de la
COFEPRIS.
Anexo A. Guía para considerar los
niveles del intervalo lineal
Anexo B.- Criterios de
aceptación
¡GRACIAS!