Metodologia en

bioquímica clínica

NEFELOMETRIA
Y
TURBIDIMETRIA
 Fundamento

Un haz de luz CHOCA con una partícula en

suspensión y parte de la luz:
Se dispersa
Es reflejada
Es absorbida
Es transmitida
 Fundamento

La dispersión de la luz depende de:

•Tamaño y peso molecular de la partícula
•Longitud de onda de la luz incidente
•La distancia del detector a la cubeta
•Concentración de las partículas
Estas relaciones obedecen a complejas fórmulas
matemáticas conocidas como LEY DE RAYLEIGH
 Fundamento

A) Cuando tenemos tamaño de la partícula

aprox.igual a la longitud de onda del haz de luz,
entonces la luz se dispersa hacia delante en
diferentes ángulos, que favorece las medidas
nefelométricas.

B) A < l de excitación , >sensibilidad en las

medidas
 Fundamento

C) La intensidad de la luz dispersada es

directamente proporcional al peso molecular de
las partículas y a su concentración en la
solución.

D) Cuánto más cerca este el detector de la cubeta

(mayor captación de la intensidad de luz
dispersada) , > sensibilidad.
 Turbidimetría

Es la medida de la disminución de la intensidad de

un haz de luz incidente
(causada por dispersión, reflexión y absorción de
luz)
Cuando pasa a través de una suspensión de
partículas.
 Turbidimetría

• La turbidimetria se mide a 0o del haz incidente

( en su misma dirección).
•La disminución de la intensidad se mide como
% de Transmitancia o Absorbancia
La SENSIBILIDAD se esta técnica dependerá
principalmente de la exactitud fotométrica y de
la sensibilidad del instrumento.
 Nefelometria

Es la medida de la luz dispersada en ángulos distintos

al de incidencia (usualmente de 15 a 90o) .
La nefelometría a diferencia de la turbidimetría,
requiere de aparatos diseñados exclusivamente para esta
técnica.
Generalmente tienen un ángulo fijo de lectura , pero
pueden cambiarse.
 Instrumental

Este sistema consta de :

 Fuente de energía radiante
 Colimador
 Selector de longitud de onda
 Cubeta
 Sistema de detección
 Instrumental

1. Fuente de energía radiante

Se emplean diferentes tipos de lámparas:
*De halógeno
*Xenón
*Filamento de tungsteno
*Láser
 Instrumental

2. Colimador
Su función es conseguir que el haz de luz que
incide sobre la muestra sea paralelo, no
divergente (si no es láser).

3. Selector de longitud de onda

Pueden ser filtros o monocromadores (si es láser
no se necesita)
 Instrumental

5. Sistema de detección
Se encuentra colocado normalmente en un ANGULO FIJO

Ø 0 o Turbidimetría

Ø 90o Nefelometría
En ambos la longitud de onda de detección es la misma que la del
haz de luz incidente
 Aspectos prácticos

SENSIBILIDAD

Nefelómetros:
Depende de la lectura del
blanco. Cuanto menor sea la
lectura del blanco de reacción
> será la sensibilidad de la
técnica
Turbidímetros:
Cuánta más capacidad tenga
el aparato para detectar
pequeños cambios en la
absorción de la solución >
sensibilidad
 Aspectos prácticos

Efectos de la matriz
Tanto en reactivos como en los sueros pueden existir partículas que
produzcan una dispersión de luz no deseada ,
P.ej. Las lipoproteínas y los quilomicrones
La suciedad tanto en las cubetas como en los reactivos

Longitud de onda
Se trabajan longitudes de onda de 320 a 380 nm y
De 500 a 600 nm
 Tipos de análisis

Reacción antígeno-anticuerpo
Existen 2 tipos básicos de medición de la dispersión luminosa
causada por esta reacción:

•Análisis a punto final

Requiere determinación del blanco, y debe transcurrir un tiempo
razonable para la medición final.

•Análisis de velocidad o cinético

Estudia el cambio de velocidad de la REACCIÓN y no requiere
blanco
 Variables posibles

Controlar cuidadosamente todas las

variables posibles:
•Reconstitución de reactivos
•Temperatura
•Tiempo
•Estabilidad