Transporte de solutos y agua

Curso ME 2012
Fisiologa Humana

Dra. Adriana Surez , MSc.

 Temas de la clase
Gua estudio: objetivo, lecturas, laboratorio, ATP
Importancia
La membrana celular, compartimentalizacin,
semipermeabilidad
Clasificacin de mecanismos de transporte
Difusin simple
Difusin facilitada
Transporte activo: primario, secundario
 Gua de estudio
Objetivo: Resolver problemas de transporte en los
organismos vivientes que incluyan: conceptos de
difusin simple y facilitada, smosis, transporte activo:
primario, secundario y terciario, as como los sistemas
de transporte masivo: endocitosis, exocitosis y arrastre
por solvente.
Lectura: Captulo 5: Transport of solutes and water en:
Boron W.F. & Boulpaep E.L. (2009). Medical
physiology. 2nd ed. Philadelphia: SAUNDERS.
Laboratorios: Difusin y Osmosis y Permeabilidad en
el eritrocito.
ATP: Problemas y casos
 Importancia
Cmo se mantiene el equilibrio osmtico
entre los compartimientos del LEC y del LIC?
Cmo se mantienen las concentracin de Na+
y K+ intracelular en un estado estacionario:
15 mM y 120 mM respectivamente?
Cmo se regula la fluidez de las secreciones
mucosas?
Cmo regulan las clulas su volumen?
Membranas estn compuestas por lpidos (fosfolpidos
principalmente) y protenas y pequea cantidad de carbohidratos.
Modelo del Mosaico fluido. Espesor 5-8nm. Son semipermeables.

Figure 3-4
Figure 5-4
Transporte pasivo no acoplado a travs de una membrana: soluto
se mueve siguiendo su gradiente electroqumico

Es pasiva. Utiliza la energa cintica de los

movimientos moleculares.
El flujo neto se da a favor de un gradiente
electroqumico.
Se da hasta llegar al equilibrio donde el flujo
neto es de cero.
Se da rpidamente en cortas distancias
Se relaciona en forma directa a la temperatura
Se relaciona en forma inversa al tamao
molecular y a la viscosidad del medio
El soluto (sin carga, hidrofbico) puede
atravesar la bicapa lipdica. La
membrana es permeable a ese soluto.
Ley de Fick simplificada (aplica para
partculas sin carga elctrica):
Jx (mol/cm2 . s) = Px ([X]o - [X]i)=
(cm/s)(mol/cm3)

Px (coeficiente de permeabilidad de X) incluye:

1. Coeficiente de particin: liposolubilidad

del soluto
2. Coeficiente de difusin del soluto (D):
tamao molecular (r),
temperatura (T), energa
trmica de la molcula, viscosidad del
medio ()
3. Grosor y rea de la membrana
 Transporte mediado
Protenas integrales de membrana median y regulan
transporte de solutos polares (no liposolubles): poros,
canales, acarreadores transportadores, bombas.
1/6 parte de los genes del genoma humano codifican
para protenas acarreadoras transportadoras.
Puede ser pasivo (difusin facilitada) o activo
(primario, secundario).
Transporte pasivo a travs de protenas integrales de
membrana: poros, canales inicos, acarreadores
Poros: Siempre estn abiertos.
Canales: Alternan entre un estado cerrado, abierto e
inactivo. Tienen compuertas (gating). Selectividad para
iones es variable.
Acarreadores: Compuertas nunca abiertas al mismo
tiempo. Transportan solutos como la glucosa y la urea
(difusin facilitada). Sustancia transportada queda
ocluida en algn momento dentro del acarreador.
Transporte se da a favor de gradiente electroqumico
 Ejemplos:
Poros
Porinas: en bacterias gram negativas
y en membrana externa de
mitocondria.
Perforinas: liberadas por linfocitos
T citotxicos. Se insertan en
membrana de la clula blanco.
Complejo de poros nucleares: en la
membrana nuclear. Formados por
hasta 30 diferentes proteinas.
Aquaporinas: En membranas
celulares de diferentes tipos de
clulas.
 Acuaporinas
Permeabilidad de las membranas al agua depende de la
densidad de acuaporinas.
Hay 11 diferentes descritas (2002)
Hay acuaporinas constitutivas (AQP1,AQP3, AQP4) y
reguladas (AQP2, tbulo colector, ADH).
Se dividen en:
1. Grupo de las acuaporinas: AQP1, 2, 4, 5, 6, 8.
2. Acuagliceroporinas: por ellas puede pasar agua,
glicerol, urea.
 Acuaporinas (AQPs)

AQP1: 28 kDa. Tetrmero. Cada monmero tiene 269 aa con 6 dominios TM. AQP
1: Poro mide 2.8 , Radio del agua 2.8 . Poro interacciona mediante enlaces de
hidrgeno con agua.
ADH y acuaporinas (AQP2) en membrana apical
del epitelio del tbulo colector
Difusin facilitada: Transporte pasivo mediado por
acarreador transportador. A favor de
gradiente electroqumico

Cambios
conformacionales
reversibles.
 Superfamilia de acarreadores de
solutos (SLC)
Incluye a todos los acarreadores que no hidrolizan
ATP directamente y no se relacionan con una
cadena de transporte de electrones.
Hay 43 familias
En cada familia hay entre (1 y 27) variantes con
diversos grados de homologa.
Difieren en mecanismo de transporte (difusin
facilitada, cotransportadores, intercambiadores),
cintica (afinidad y especificidad), mecanismos de
regulacin, localizacin, cuando se expresan en el
desarrollo.
Table 5-4. Some Families in the SLC Superfamily of Solute Carriers

Family Description Examples

SLC1 (7) Glutamate transporters EAAT1

SLC2 (14) Facilitated transport of GLUT1, GLUT4

hexoses

SLC3 (2) Heavy subunits of

heterodimeric amino acid
transporters (with SLC7)

SLC4 (10) AE1 (Cl-HCO3 exchanger)

bicarbonate exchangers NBCe1 (electrogenic Na/HCO3 cotransporter)
and cotransporters NBCn1 (electroneutral Na/HCO3 cotransporter)
NDCBE (Na+-driven Cl-HCO3 exchanger)

SLC5 (8) Na+/glucose cotransporters SGLT1 to 5 (glucose)

SLC6 (16) Na+- and Cl--coupled B0AT1 (Na+-coupled amino acid)

cotransport of GAT1-3, GBT1 (Na+- and Cl--coupled GABA)
"neurotransmitters" ATB0+ (Na+- and Cl--coupled amino acids)

SLC7 (14) Transporter subunits of

heterodimeric amino acid
transporters (with SLC3)

SLC8 (3) Na-Ca exchangers NCX1 to 3

SLC9 (9) Na-H exchangers NHE1 to 8

SLC10 (6) Na/bile salt cotransporters

SLC11 (2) H+-driven metal ion DMT1

cotransporters

SLC12 (9) Cation-coupled Cl- NKCC1, NKCC2 (Na/K/Cl cotransporter)

cotransporters NCC (Na/Cl cotransporter)
KCC1 (K/Cl cotransporter)

SLC13 (5) Na+-coupled sulfate and NaDC1 (mono-, di-, and tricarboxylates) NaSi (sulfate)
carboxylate cotransporters

SLC14 (2) Facilitated transport of urea UT

SLC15 (4) H+-driven oligopeptide PepT1

cotransporters
Table 5-4. Some Families in the SLC Superfamily of Solute Carriers

SLC16 (14) Monocarboxylate MCT1 (H+-coupled monocarboxylate cotransporter)

transporters TAT1 (facilitated diffusion of aromatic amino acids)

SLC17 (8) Type I Na/phosphate NaPi-I

cotransporters and vesicular
Glu transporters

SLC18 (3) Vesicular amine transporters

SLC19 (3) Folate/thiamine transporters

SLC20 (2) Type III Na/phosphate NaPi-III

cotransporters

SLC21 (11) Organic anion transporters OATP

PGT

SLC22 (18) Organic cations, anions, OCT1 to 3 (facilitated diffusion or organic cations)
zwitterions OAT1 to 5 (exchange or facilitated diffusion of organic anions)
URAT (urate exchanger)

SLC23 (4) Na/ascorbic acid

transporters

SLC26 (10) Multifunctional anion DRA (Cl-HCO3 exchanger)

exchangers Pendrin (exchanges
bicarbonate, Cl-, or I-)
CFEX (exchanges Cl-,
bicarbonate, oxalate, formate)

SLC28 (3) Na/nucleoside transporters

SLC34 (3) Type II Na/phosphate NaPi-IIa, NaPi-IIc

cotransporters

SLC36 (4) H+-coupled amino acid PAT1

cotransporters

SLC38 (6) Na+-driven neutral amino SNAT3 (cotransports amino acids with Na+ in exchange for H+)
acids (system A and N) System N (cotransports amino acids with Na+ in exchange for H+)
SNAT1, 2, 4 (system A cotransports amino acids with Na+)

SLC39 (14) Metal ion transporters ZIP1 (uptake of Zn2+)

SLC40 (1) Basolateral Fe transporter* Ferroportin (MTP1, Fe2+)

SLC42 (3) NH3 channels RhAG

No se satura
El flujo mximo (Jmax) se da cuando el sistema se
Tasa de transporte satura.
depende de [X]
Sistema es especfico
Sistema se puede inhibir: competitivo/no competitivo
Acarreador tiene Km (menor Km, mayor afinidad)
Clasificacin de los ms conocidos transportadores o acarreadores de
glucosa (GLUTs, SLC2). Son selectivos, uniportadores

Transportador Localizacin Caractersticas

GLUT 1 Mayora de tejidos del Glucosa y otras hexosas
cuerpo: eritrocitos, glia, Constitutivo
endotelio, BHE
GLUT 2 Hgado y pncreas, Glucosa y otras hexosas
intestino y rin Alta Km (poca afinidad)
GLUT 3 Neuronas Glucosa y otras hexosas.
Baja Km (alta afinidad)
GLUT 4 Tejido adiposo y msculo Regulado por insulina. En
esqueltico membrana de vesculas.
GLUT 5 Intestino, espermatozoides, Transporta fructosa. Poca
Riones. afinidad para glucosa.
GLUT 6 Secuencia que no codifica
GLUT 7 Intestino delgado y colon. Transporta glucosa y
Testculos y prstata. fructosa.
Estructura propuesta para los GLUT

PM: 46 000
12 dominios
transmembrana
Transporte mediado por acarreadores puede ser
regulado: GluT4 e insulina
Transportadores de urea (SLC14 (2) UT)

Urea: O = C (NH2) 2, PM 60, radio 2 , polar, baja

solubilidad en lpidos, baja permeabilidad por bicapa
lipdica.
UT-B: glbulos rojos: Antgeno Kidd; vasos rectos
renales.
UT-A1: en epitelio tbulo colector medular.
Expresin regulada por ADH (mem. Apical)
UT-A2: DDAH (delgada descendente asa Henle)
Proteinas altamente reguladas: pueden fosforilarse:
PKA, PKC, TK, glicosilarse.
 Comparacin entre poros, canales
y acarreadores

Acarreadores, canales y poros tienen estructura fsica similar: tienen

dominios transmembrana que rodean zona por donde pasa el soluto.

Algunos acarreadores tambin tienen canales incorporados.

En algunos canales hay zonas de interaccin del soluto con el canal.
Pueden saturarse.
 Transporte Activo
Contra gradiente electroqumico, requiere de energa. (ATP
gradiente de concentracin).

Primario (directo): utiliza energa liberada al

hidrolizar el ATP. Se les llama bombas.
Secundario (indirecto): utiliza la energa
potencial de un gradiente. Se acopla el
movimiento de un soluto a favor de gradiente con
el movimiento de otro en contra de gradiente.
Crea estado de desequilibrio
Protena transportadora requiere energa para cambios de
conformacin.
Transporte activo primario (bombas):
ATPasas de transporte

P ATPasas (E1-E2): forman intermediarios

fosforilados estables que se pueden aislar. Ej.:
Na+ /K+ ATPasa; bombas Ca+2 Ca+2 ATPasas;
bombas H+-K+
V ATP asas: vacuolares: H+-ATPasas
F ATPasas: mitocondrias (F1-F0)
Adems los Transportadores tipo ABC
cotransporte activo primario
Ubicua. Na+K+ ATPasa (bomba de Na+-K+)
Electrognica.
P-ATPasa.
1alfa, 1 beta, 1 gamma
Subunidad alfa (4 isoformas): tiene
actividad cataltica
Subunidad beta (3 isoformas):
insercin de subunidad alfa a
membrana.
Subunidad : protena FXYD2:
modula afinidad por K+, Na+ y ATP
Generalmente en memb. basolateral
 E2: sitios de unin para iones abiertos hacia afuera de la
clula.

E2-P: Se bloquea con

glicsidos cardacos:
ouabaina, digoxina.
Hipocalemia potencia
toxicidad.

E1: sitios de unin de iones abiertos hacia el lado intracelular

H+K+ ATPasa (HKA): P2c-ATPasa Clulas parietales de
glndulas gstricas, rin, intestino. Estequiometra:
2H+:2K+:1ATP. Electroneutra. Tiene una subunidad alfa y una
beta (con similitud a subunidades de Na+ K + ATPasa). Inhibida
por omeprazole.
 Otras P-ATPasas: Ca+2 ATPasas
SERCA: S/ER Ca+2 ATPasa: ATPasa tipo P2A.
1ATP: 2 Ca+2: 2 H+ . Hay 3 isoformas: Musc. Esq.
Rpido: SERCA1; Musc. Esq. Lento y corazn:
SERCA 2a; Musc. Liso SERCA2b. Tapsigargina:
inhibidor especfico de las SERCA.
PMCA: Plasma membrane Ca+2 ATPasa. P2B. Por lo
menos 4 isoformas. 1H+/1Ca+2/1ATP. Funciona en
paralelo con el intercambiador NCX Es 10x ms lento
que el intercambiador. Tiene mayor afinidad por el
calcio que el intercambiador.
 Intercambiador
PMCA Na+/Ca+2

SERCA
 PMCA
Codificada por 4 genes:
PMCA 1-4.
1ATP: 1 Ca+2: 1 H+
Afinidad por calcio aumenta
al unirse con complejo Ca+2 -
CAM. Su Km disminuye.
PL: sitio de unin a
fosfolpidos
P: sitio de fosforilacin.
Aumenta actividad al
fosforilarse.
Se inhibe con lantano y
vanadato. SERCA no.
 SERCA
Con cuatro dominios citoplasmticos:
cuello, cuerda beta, unin del
nucletido, fosforilacin.

Hay 3 isoformas clonadas:

SERCA1: msc. Esqueltico rpido.
SERCA 2a: corazn, msc.
Esqueltico lento.
SERCA 2b: msc.Liso, tej. no musc.
Tapsigargina: inhibidor especfico.

Fosfolamban: regula SERCA en

msculos. Desfosforilado inhibe la
SERCA.
 ATPasas tipo V: H+ ATPasas: vesculas
(lisosomas, endosomas, ves secrecin), borde
apical epitelios: rin, intestino.
 Transportadores tipo ABC (ATP binding
cassette)
Tienen un motivo que liga nucletidos (NBD1 y NBD2).

Pueden actuar como bombas, canales reguladores de

canales y de acarreadores.

Son 7 subfamilias (ABCA-ABCG) con 49 miembros

Table 5-6. ABC Transporters

Subfamily* Alternative Subfamily Name Examples

ABCA (12) ABC1 ABCA1 (cholesterol transporter)

ABCB (11) MDR (multidrug resistance) ABCB1 (MDR1 or P-glycoprotein 1)

ABCB4 (MDR2/3)
ABCB11 (bile salt export pump, BSEP)

ABCC (13) MRP/CFTR ABCC2 (multidrug resistance-associated protein 2,

MRP2) ABCC7 (cystic fibrosis transmembrane regulator,
CFTR)
ABCC8 (sulfonylurea receptor, SUR1)
ABCC8 (SUR2)

ABCD (4) ALD ABCD1 (ALD, mediates uptake of fatty acids by peroxisomes)

ABCE (1) OABP ABCE1 (RNASELI, blocks RNase L)

ABCF (3) GCN20 ABCF1 (lacks transmembrane domains)

ABCG (5) White ABCG2 (transports sulfated steroids)

ABCG5/ABCG8 (heterodimer of "half" ABCs that transport
cholesterol)

*Number of genes in parentheses.

 Subfamilia ABCB (11): MDR
(multidrug resistance transporters)

Son ATPasas (transporte activo primario)

MDR1: es una glicoprotena: saca metabolitos catinicos
y drogas de las clulas.
Se ven en el hgado, rin y TGI.
Contribuye a que clulas cancerosas se hagan resistentes a
quimioterapia al sacar de la clula a stas drogas.
CFRT (ABCC): (cystic fibrosis transmembrane regulator)

Unin del ATP

controla la
apertura y cierre
del canal

Con sitios de
fosforilacin
por PKA y PKC
ABCC(13): ABCC7: CFRT (cystic
fibrosis transmembrane regulator)
Sufre mutacin en la fibrosis qustica.
Es una glicoprotena (170 kDa) en membrana
apical y basolateral de muchos epitelios
Es un canal de Cl- y un regulador de otros canales
Inicos (ej.: ENaC).
ATP regula el canal de dos formas: fosforilacin,
interacciones con NBD.
CFTR fosforilado se activa. Luego depende del
ATP para el gating: apertura o cierre del canal.
 Transporte activo secundario: mayora son
cotransportadores (sinporter), intercambiadores
(antiporter):

NO utiliza ATP directamente. Lo ms frecuente es aprovechar el gradiente del Na+ para

transportar otros solutos en contra de gradiente electroqumico.
Transporte activo secundario y la
Na+- K+ ATPasa
Bomba mantiene el gradiente de
sodio.
El gradiente de sodio se utiliza
en formar un gradiente de otro
soluto.
 Cotransportadores
Ambos solutos se mueven en la misma direccin.
Na+ dependiente: El sodio puede ser cotransportado con
muchos solutos: glucosa (SLC5), aa (SLC6 y
SLC38), mono,di,tricarboxilatos (SLC13), aniones
inorgnicos (fosfatos NaPi,sulfatos, bicarbonato
NBC), iones: (Na+/K+/2Cl- NKCC; Na+/Cl NCC; K+/Cl-
KCC)

H+ dependiente: Acoplado a gradiente de H+:

H+/oligopptidos (SLC15), H+/monocarboxilato
(SLC16), H+/cationes divalentes (SLC11) (hierro,
Cd++,Pb++)
 SGLUT (SLC5 (8))
Na+ y D-glucosa galactosa se
unen al transportador desde el
mismo lado de la membrana
Se ven en epitelio intestinal y
renal
SGLT2 y SGLT3: 1 Na+ : 1
glucosa
SGLT1: 2 Na+ : 1 glucosa
Es electrognico, es saturable
Tienen 14 TM
 Capacidad de concentracin para la glucosa con el
SGLT2: 1 Na+: 1 glucosa

[glucosa]i/ [glucosa]o= [Na+]o/ [Na+]I x 10 Vm/(60mV)

Si afuera de la clula hay 10x ms sodio que adentro, y la clula tiene

un Vm de -60mv entonces:

10x101= 100 Esto quiere decir que la glucosa lograr estar hasta 100
x ms concentrada adentro que afuera.

ATP: Calcular lo mismo para el SGLT1: 2 Na+ : 1 glucosa

Na+/HCO3- cotransportador, NBC, familia
SLC4

En membrana basolateral de epitelios est

el NBC electrognico (NBCe1/e2).
Estequiometra 1Na+/3 HCO3- Se da salida
de HCO3- hacia el LEC.

En otras clulas puede funcionar 1Na+/2

HCO3- . Entra bicarbonato a la clula.

NBCn1/n2 electroneutro. Estequiometra:

1Na+/1 HCO3-
Transporte de Cl- acoplado a cationes:
SLC12 (9):
1. Variantes de NKCC:
NKCC1 (SLC12A2): en clulas no epiteliales y en
membrana basolateral de clulas epiteliales.

NKCC2 (SLC12A1): en membrana apical de clulas

de la RAGAH. Inhibido por furosemida y
bumetanida (diurticos de asa)

NCC: En membrana apical del tbulo contorneado

distal. Se bloquea por diurticos tiazidas.

KCC: Saca cloruro y potasio de la clula a favor de

gradientes electroqumicos.
 Intercambiadores (antiporters)
Solutos transportados van en direcciones
opuestas.
 Intercambiador Na+/Ca+2 (NCX, SLC8 (3))
Saca calcio usando gradiente del sodio.
Hay 3 isoformas: NCX 1-3.
NCX 1: En msculo cardaco. Con 9 TM.
Transporta
3 Na+/ 1Ca+2. Permite mantener el calcio 10 000 x
ms concentrado en LEC. Es electrognico.
Se puede regular por fosforilacin.
Intercambiador Na+/H+, NHE, SLC9(9)
Es un contratransporte.
Es no electrognico: 1 Na+/ 1 H+
Presente en casi todas las clulas. 9 isoformas.
Importante en la reg. del pH intracelular.
En riones es imp. en reabsorcin de sodio y
excrecin renal de H +
Los H+ intracelulares regulan el transportador en un
sitio diferente al usado para el transporte.
Puede hacer que el pH intracel. suba hasta 8.4
Normalmente pH intracel. est alrededor de 7.2
 Intercambiadores aninicos, AE1-AE3
(HCO3/ Cl-), SLC4 SLC 26
Importantes en eritrocitos (AE1)
No electrognico. Estequiometra 1:1
Importante en secrecin de bicarbonato y en
regulacin del pH intracelular y volumen
celular.
Bomba Na+-K+: Mantiene gradientes de sodio y potasio; contribuye con el
potencial de membrana de reposo; contribuye con la regulacin del volumen
celular; importante en la absorcin de nutrientes; mantiene excitabilidad de
clulas.
Calcio: adentro hay 10 000x menos que en el LEC. Su fuerza electromotriz es
muy grande hacia adentro de la clula. Puede entrar por canales voltaje dep. Es
sacado activamente por bombas. A concentraciones fisiolgicas sale por PMCA.
Cloruro: en mayora de clulas tiende a salir en forma pasiva. No se encuentra en
equilibrio ya que entra activamente por medio de NKCC y AE. Por medio del K+-
Cl- KCC1 (SLC12) tiende a salir.

Los H+ entran en forma pasiva a la clula y el HCO3- sale en forma pasiva de la

clula. No estn en equilibrio ya que los H+ son sacados por los NHE (SLC9) y el
bicarbonato es metido por el NDCBE (SLC4) (sodium driven Cl-bicarb. Exchanger).