UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

ABSORCIN MOLECULAR UV-VISIBLE

ANLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO

Dr. MARIO CARHUAPOMA YANCE

Distribucin de la luz en el
espectrofotmetro
Interaccin de cido morn-5- sulfnico
(MSA) y el cido quercetn-5-sulfnico
(QSA) con agentes surfactantes de
diferente carga
Sistema de
lentes
Sistema de
lentes
ESPECTROFOTOMETRA
Es la medida de la
cantidad de energa
radiante absorbida por
las molculas a
longitudes de onda
especficas.

La espectrofotometra
es el mtodo de
anlisis ptico ms
usado en las
investigaciones
qumico-
farmacuticas.
 INSTRUMENTOS PARA EL ANALISIS
3 FUNCIONES BASICAS DE UN INSTRUMENTO PARA
ESPECTROSCOPIA

La produccin de radiacin de frecuencia

apropiada.
Proporcionar un examen espectral de esta
radiacin Anlisis cualitativo.
Poder efectuar mediciones de la
intensidad de las radiaciones a las
frecuencias seleccionadas Anlisis
cuantitativo.
 ESPECTROFOTMETRO
Es un instrumento usado en la fsica
ptica que permite comparar la
radiacin absorbida o transmitida
por una solucin que contiene una
cantidad desconocida de soluto, y
una que contiene una cantidad
conocida de la misma sustancia en
funcin de la longitud de onda
 LOS COMPONENTES ESENCIALES DE UN
ESPECTROFOTMETRO SON:
Una FUENTE de luz ilumina la muestra. Las condiciones son:
estabilidad, direccionabilidad, distribucin de energa espectral
continua y larga vida.
Un SISTEMA DE LENTES, ESPEJOS Y ABERTURAS (Slits ), que
definan, colimen (hagan paralelo) y enfoquen el haz de radiacin y
un monocromador que separe la radiacin de bandas estrechas de
longitud de onda.
Un COMPONENTE TRANSPARENTE a la radiacin que contenga la
muestra
Un DETECTOR de radiacin o transductor que recibe la seal de
radiacin electromagntica y la convierte en una seal elctrica de
magnitud proporcional a la intensidad de la radiacin recibida.
Un SISTEMA AMPLIFICADOR que produzca o genere una seal
elctrica mucho mayor a la seal recibida
Un SISTEMA DE LECTURA tal como: Una escala de aguja, un
registrador, un sistema de dgitos o una computadora, que
transforme la seal elctrica en una seal que el operador pueda
interpretar.
 ESPECTROFOTMETRO

obturador

Lente
Lmpara de
muestra tungsteno
>325 nm
Lente
Lmpara de
ranura
deuterio
<325 nm
red

1024 detectores de Si
200<<1100 nm

Diagrama ptico de un espectrofotmetro

 INSTRUMENTOS (1)
FUENTES:

Lmparas Filamento de Tungsteno

Es una fuente excelente de radiacin
continua visible y de IR prximo.
Produce un espectro continuo en la
region UV por la excitacin del D2 a baja
presin con una descarga elctrica.

Lmparas de H2 D2
Se utilizan en la zona del ultravioleta.
En stas, una descarga elctrica hace que el
H2 o el D2 se disocie emitiendo una radiacin
ultravioleta.
Proporciona un espectro continuo til en la
regin que va de 160 a 375 nm.
Radiaciones uniformes y estables
 INSTRUMENTOS (2)
SELECCION DE : MONOCROMADORES:
Se necesita dispersar la radiacin
policromtica en bandas que
abarquen un intervalo de valores
restringido de
La forma ms comn producir estas
bandas es por medio del
monocromador.
LUZ POLICROMTICA LUZ
MONOCROMTICA.
Los monocromadores para la
radiacin UV-Vis o IR, son todas
semejantes entre s en cuanto a su
construccin metlica en el sentido
que en ellos se emplean ranuras,
lentes, espejos, ventanas,
prismas o redes de difraccin.
 INSTRUMENTOS (3)
SELECCION DE : MONOCROMADORES:

Todos los monocromadores

poseen una ranura de entrada.
Una LENTE O ESPEJO
COLIMADOR para producir un haz Lampara
de radiacin paralela.
Un PRISMA o red de difraccin
como elemento dispersor
Un elemento de enfoque que
proyecta una serie de imgenes
rectangulares de la ranura de computadora
entrada sobre una superficie plana
(el plano focal)
VENTANAS, la mayora de
monocromadores tienen ventanas
de entrada y salida que se colocan Detector
para proteger los componentes del Celda
polvo y los vapores corrosivos del Selector
laboratorio.
 INSTRUMENTOS (4)
CELDAS
Cuarzo
Las celdas o cubetas para
muestras deben estar
construidas de un material que
permita el pasaje de la radiacin Vidrios de silicato
de la regin espectral que
interesa
Plstico
 INSTRUMENTOS (5)
DETECTORES:
Se utilizan para convertir la seal luminosa en seal elctrica,
y as transmitir informaciones al procesador de seal.
TRANSFORMA LA ENERGA LUMINOSA EN ENERGA
ELCTRICA

Los instrumentos de la generacin actual emplean

generalmente detectores de estado slido, tipo fotodiodo de
silicio, que dan un resultado mejor que el detector
convencional.
Las propiedades ideales de un detector son:
Alta sensibilidad
Respuesta constante
Tiempo de respuesta rapido
Minima seal en ausencia de radiacin. Normalmente en ausencia de la
radiacin se produce una pequea seal llamada potencial oscuro.
La seal electrica producida debe ser proporcional a la seal que llega
al detector.
 INSTRUMENTOS (5)
DETECTORES:
CELDAS FOTOVOLTAICAS: se usa principalmente para detectar y
medir radiacin de la regin visible.
FOTOTUBOS: Consta de un ctodo semicilndrico y un nodo de
alambre encerrado en un recipiente transparente al vaco.
TUBOS FOTOMULTIPLICADORES: La superficie del ctodo es de
composicin similar a la de un fototubo, y emite electrones se
expone a la radiacin.

Detectores (fotnicos) para espectroscopia

Tipo intervalo de longitud de onda, nm

Celdas fotovoltaicas 380 780

Fototuvo 150 1000
Tubos fotomultiplicadores 150 1000
 Ley de Beer: A=cl A: Absorbancia

Permite cuantificar la
concentracin de una muestra
por UV - vis.
: coeficiente de extincin
(caracterstico de cada sustancia)
c: concentracin (moles/l)
l: diametro del paso de la cuba (cm)

La zona de longitudes de onda que se registra en

un espectro UV-Vis es entre 200 y 800 nm

En esta zona no absorben dobles ni triples enlaces aislados

Slo van a absorber enlaces conjugados y heterotomos

con pares de electrones no compartidos (O, N)

Grupos que absorben luz = CROMFOROS

 ABSORBANCIA
EXTINCIN
Densidad Optica

A = E = D.O.

A = Log (Io/It)

Ley de la absorcin A = 2 Log T%

 La intensidad de luz
(monocromtica)
transmitida por un
cuerpo homogeneo es
proporcional a la
Io Ia intensidad de luz
incidente.

La intensidad de luz
(monocromtica)
Io Ib transmitida disminuye
exponencialmente con el
aumento de la espesura
de la capa del cuerpo
homogneo.

Ley de Lambert
Mayor
concentracin
Menor transmitancia,
Entonces
MAYOR ABSORBANCIA

A mayor concentracin,
mayor absorbancia,
directamente proporcional
Menor
concentracin
MAYOR transmitancia,
Entonces
menor ABSORBANCIA

Ley de Beer
 Solucin de
Ley de Beer
concentracin
conocida: A
Estndar

Concentracin
 Utilidad de la Ley de Beer
MUESTRAS A
PROBLEMA

Concentracin

CONCETRACIN DE MP
Desviacin de
la ley de Beer
CURVA DE RINGBOWN
CURVA DE RINGBOWN
 Absorbancia y Transmitancia
Io I
Lmpara Selector Celda de
muestra
Absorbancia Transmitancia

A = Log Io/I T = I / Io
Absorbancia y transmitancia
A = Log 1/T
Absorbancia y transmitancia
A = - Log T
 Absorbancia

A = - Log (%T/100)
transmitancia

%T = (100) (AntiLog A)

1) A= - log T

2) A= ecl
Ley de Beer
 CURVA DE RINGBOWN

Y Sustancia Estndar.
A
Logitud de Onda Optima.
B
S
Solvente Adecuado.
O
R Instrumento Calibrado.
T
A
N
Nos muestra:
C
I Concentraciones de trabajo.
Concentracin Optima.
A

Sirve para:
X Trazado de la Curva de Calibracin
Log. CONCENTRACIN
 CURVA DE RINGBOWN

Y Sustancia Estndar.
A
Logitud de Onda Optima.
B
S
Solvente Adecuado.
O
R Instrumento Calibrado.
T
A
N
Nos muestra:
C
I Concentraciones de trabajo.
Concentracin Optima.
A

Sirve para:
X Trazado de la Curva de Calibracin
Log. CONCENTRACIN
 CURVA DE RINGBOWN

Y Sustancia Estndar.
A
Logitud de Onda Optima.
B
S
Solvente Adecuado.
O
R Instrumento Calibrado.
T
A
N
Nos muestra:
C
I Concentraciones de trabajo.
Concentracin Optima.
A

Sirve para:
X Trazado de la Curva de Calibracin
Log. CONCENTRACIN
 CURVA DE RINGBOWN

Y Sustancia Estndar.
A
Logitud de Onda Optima.
B
S
Solvente Adecuado.
O
R Instrumento Calibrado.
T
A
N
Nos muestra:
C
I Concentraciones de trabajo.
Concentracin Optima.
A

Sirve para:
X Trazado de la Curva de Calibracin
Log. CONCENTRACIN
 CURVA DE RINGBOWN

Y Sustancia Estndar.
A
Logitud de Onda Optima.
B
S
Solvente Adecuado.
O
R Instrumento Calibrado.
T O
A
N
Nos muestra:
C
I Concentraciones de trabajo.
Concentracin Optima.
A

Sirve para:
X Trazado de la Curva de Calibracin
Log. CONCENTRACIN
 CURVA DE RINGBOWN

Y Sustancia Estndar.
A
Logitud de Onda Optima.
B
S
Solvente Adecuado.
O
R Instrumento Calibrado.
T O
A
N
Nos muestra:
C
I Concentraciones de trabajo.
Concentracin Optima.
A

Sirve para:
X Trazado de la Curva de Calibracin
Log. CONCENTRACIN

Zona de trabajo
 CURVA DE CALIBRACIN

Y
Sustancia Estndar.
A
B
Logitud de Onda Optima.
2.0
S Solvente Adecuando.
O
R
1.5 Instrumento Calibrado.
B
A 1.0
N
Y = aX + b
C 0.5 a = pendiente.
I
A
b = punto de corte.(0)
0.0 X
CONCENTRACIN r = regresin lneal(1)
 CURVA DE CALIBRACIN
A
b
s
o
r
A b
a
n
c
i
a

Concentracin
 CURVA PATRN

0.6

0.5

A
Absorbancia del problema
B 0.4
S
0
R 0.3

B
A
0.2
N
C
Interpolacin
I
0.1
A

0
0 2 4 6 8 10 12

Concentracin mg/lt
ABSORBANCIAS
CURVA DE CALIBRACIN DEL ETANOL

0.15

0.1
(nm)

Y = 0,0398X + 0,0012
B = 0,218

0.05

0 1.9

0.5 1 1.5 2 2.5 3

CONCENTRACIONES (mg/mL)
 Absorbancia y Transmitancia
Io I
Lmpara Selector Celda de
muestra
Absorbancia Transmitancia

A = Log Io/I T = I / Io
Absorbancia y transmitancia
A = Log 1/T
Absorbancia y transmitancia
A = - Log T
 Absorbancia

A = - Log (%T/100)
transmitancia

%T = (100) (AntiLog A)
ABSORBANCIA
Ejercicio 1
0.3
2
%T = 56 50
%TRANSMITANCIA
0
0 100
A=? 0.251
 Absorbancia

Io I

Lmpara Selector
Celda de muestra

1) A= - log T

2) A= ecl
Ley de Beer
 Absorbancia
Io I

En funcin de la naturaleza y de
la concentracin de la muestra
A= Absorbancia e
Ley de Lambert- Beer =coeficiente de extincin C=
A= ecl concentracin molar
celda (cm)
l= longitud de

POR EJEMPLO. Cul es la A de una

sustancia al 2,5 X 10-5 M , con un e = 7,500 M-1cm-1 y longitud de
celda 0,96 cm?. A= 0,18
 Problema Patrn

Conc. Prob = (A Prob/A Patrn)(Conc. Patrn)

A Problema = 0,458
A Patrn = 0,765
Patrn= 145mg% Conc.
Problema= ?

Conc. Problema = (0,458/0,765)(145mg%)

Conc. Problema= 86,8 mg%

La luz visible es
una mezcla de
longitudes de
energa