CROMATOGRAFIA

DE
INTERCAMBIO IONICO

QUIM. NEPTALI ALE BORJA

 Los procesos de intercambio inico se basan
en los equilibrios de intercambio entre los iones
de una disolucin y los iones del mismo signo
que estn en la superficie de un solido de elevada
masa molecular y esencialmente insoluble
INTERCAMBIADOR IONICO

Ciertos materiales slidos son capaces de intercambiar Iones

del mismo signo con disoluciones inicas en contacto con
ellos.

Estos materiales pueden ser compuestos naturales:

(arcillas, silicatos, zeolitas, celulosa, Etc.) o polmeros
artificiales (resinas).

El intercambio inico se trata de un equilibrio qumico

heterogneo y reversible entre el cambiador y la disolucin
Los intercambiadores inicos son matrices slidas que
contienen sitios activos (tambin llamados grupos
ionognicos) con carga electroesttica, positiva o
negativa, neutralizada por un in de carga opuesta
(contrain).

En estos sitios activos tiene lugar la reaccin de

intercambio inico
 DIFUSION

La difusin depende:

- Tamao del in y carga

- Temperatura y concentracin
- Porosidad y tamao de poro

- Siempre existe un flujo de iones desde zonas mas

concentradas a menos concentradas (Equilibrio
Donnan)
CLASIFICACIN
Fuertemente cidos (sulfonato -SO3-). Intercambian
a todo pH.
Dbilmente cidos (carboxilato -CO2-).
Intercambian a pH superior al pKa.
Fuertemente bsicos (amonio cuaternario
CH2NR3+). Intercambian a todo pH.
Dbilmente bsicos (amonio terciario CH2NHR2+).
Intercambian a pH inferior al pKa
 CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO
INICO
Material de Relleno:
Intercambiardores anionicos: Grupo Iogenico debilmente acido (SAX o WAX): -
SO3H;
-COOH; PO3H2. Los intercambiadores cationicos, grupos ionogenicos
fuertemente o debilmente basicos (SCX o WCX); -NR3+; -NH3+
 La Fase Mvil:
Son soluciones aciuosas de pH y fuerza ionica controladas
por medio de un buffer y puede contener cantidades
moderadas (no mas de 30%= de un modificador organico:
MeOH o AcN.
El anion decrece en el orden:
Citrato < SO4=< Oxalato < I- < NO3- < CrO4= < Br- < SCN-
< Formiato < Acetato < OH- < F-
El cation decrece en el orden:

Ba++<Pb++<Sr++<Ca++<Ni++<Cd++<Cu++<Co++<Zn++<Mg++
< UO2++<Ti+<Ag+<C`+<Rb+<K+<NH4+<Na+<H+<Li+
 En general, los intercambiadores ionicos fijan
preferentemente los iones de mayor carga, menor
radio hidratado, y mayor polarizabilidad. Un orden
bastante general de selectividad frente a cationes
es el siguiente:
ELEGIR LA COLUMNA
Pensarque queremos separar, y segn esto elegir la
columna (aninica o catinica)
SOPORTES CROMATOGRAFICOS
Fosfato (PO4-3)
 CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO
INICO
- - + +

Si el pH en la fase movil es =7.2

Entonces las cargas de las proteinas seran: (-) (-) (+) (+)

++ +
++ -
++ +
- - -
-
+ +
++
-
+
++
+
+
+
Matriz con intercambiador anionico = + cargado
CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO
INICO
- - + +

+ + + Cl- +
- + Cl- +
+ + + Cl-
-
-
+ + + Cl-
+
+ Na+ + Cl-
Na+-
Na+ - Na+ Na+
Na+ - Na+ -
+ Na+ Cl- +
Na+ -

Incrementando la concentracion de Sal

INTERCAMBIO INICO

A baja concentracin A mayor concentracin

Protenas adsorbidas
de sal, se desprenden de sal se desprenden
al intercambiador
las protenas menos las protenas ms
inico
electronegativas electronegativas
PUNTO ISOELCTRICO

Hay que conocer el punto isoelctrico del

componente a separar y trabajar entre
0,751,5 unidades de pH:
Por enzima del punto isoelctrico en el caso
de que sea un intercambiador de aniones.
Por debajo del punto isoelctrico en el caso
de que sea un intercambiadores de cationes.
Elegir el Tampn
Tampones aninicos (acetato), para intercambio de
cationes.
Tampones catinicos (TRIS-HCl), para intercambiar
aniones.
Si fuera al revs, es decir usar un tampn aninico
para un intercambiador aninico, el tampn se
pegara a la resina y generara un gradiente de pH en
la columna.
CROMATOGRAFA

A: Un tampn, por ejemplo acetato

B: Un tampn, por ejemplo acetato con
ClNa (1M).

Inyectamos muestra y la pasamos por una

columna de intercambio de ines. La
muestra va en el tampn TRIS-HCl.
Tenemos un registrados para seguir la
absorbancia en el tiempo segn el aumento
de la concentracin de NaCl en el medio.
EN EL TIEMPO

Al principio se aplica la muestra con

0% de NaCl.
El componente P1 se pega a la
columna.
Otros componentes no se pegan
(P2,P3, P4...) y se observa un
aumento de la absorbancia debida a
las protenas que no se pegan y que
salen de la columna.
Hacemos un periodo corto de
lavado para que terminen de salir
los componentes que interaccionan
de forma ms dbil con la resina.
 ELUCION
Se sube la concentracin de NaCl hasta 1M
y se mantiene un cierto tiempo.

REGENERACIN
se baja la concentracin de la sal a 0M para
regenerar la columna y volverla a usar en
iguales condiciones que inicialmente.
PARMETROS DEL INTERCAMBIO

Capacidad: cantidad de iones que es capaz de intercambiar un

cambiador (resina) (equivalentes/gramo)
Depende de:
Grupo activo
Tamao
Tipo de iones cambiables
PH
Selectividad: Depende del coeficiente de selectividad (K)
 Figura 1. Comportamiento de la enzima polifenol oxidasa del ocumo durante la elucin paso a paso con buffer de fosfato
pH 6.2 desde una columna de DEAE-Celulosa.

El proceso final es el de elucin: Se crea un gradiente entre el tampn A y

el B para que aumente la concentracin de NaCl.
Llegar un momento que debido a la alta concentracin de NaCl, la
protena P1 se separe de la resina y salga de la columna.
Resina(+)_ Cl(-) + S(-) Resina(+)_S(-) + Cl(-)
Durante la aplicacin de la muestra se desplaza el equilibrio (S- =P1) a la
derecha, separndose (P2,P3,P4).
Si aumenta la concentracin de NaCl se desplaza a la izquierda y P1 se
despega.
APLICACIONES
Separacin de especies inicas de poco peso
molecular
Separacin de especies inorgnicas incluyendo
frmacos
Sistema orgnico y bioqumicos incluyendo
frmacos y sus metabolitos, Sueros,
conservantes de alimentos, mezclas de
vitaminas, azucares y preparaciones
farmaceuticas.