INHIBIDORES DE LA INTEGRASA

MECANISMO DE ACCIN
RALTEGRAVIR Estado Slido

Frmula qumica C20H21FN6O5

Peso 444.416 Da
Log P Menos 0.68
Log D MENOS 1.56
Pka 8.08
Superficie polar 1502
Nmero de 11
aceptores de
hidrgeno
Nmero de 3
donantes de
hidrgeno
 INHIBIDORES DE LA PENETRACION
MECANISMO DE ACCIN
 MARAVIROC ENFUVIRTIDA

Primer agente anti-VIH que acta

en una diana molecular de la Polipeptido conformado por 36 aminoacidos que conincide
clula husped y no del virus con el extremo extremo C-terminal de la protena viral
gp41

Nuestra estrategia pretende
disear una molcula
heterodmero de ( 3TC y AZT)
que se hidroliza rpidamente
en fragmentos activos, los
cuales pueden actuar
sinrgicamente.
1.AZT H-fosfonato
2. 50-aminocarbonil
derivado fosfonato
3.3 TC H-fosfonato
4.50
derivado fosfonato -
aminocarbonil
5.O- (L-20.30-desoxi-
30-thai citidina-50-
il) -O- (30-azido-30
desoxitimidina-50-il)
fosfonato
aminocarbonilo, o
3TC-AZT
heterodmero
 MATERIALES Y METODOS
Cultivo de tejido humano ex vivo
Bloques de tejido Humanos se inocularon con el
VIH-1 ;27 bloques de tejido fueron infectados con
una prototpo Variante X4 del VIH-1 y despus
tratados con derivados de fosfonato
Cultivos de clulas MT-4
El MT-4 lnea de clulas T . Se inocularon clulas
(105 clulas) 4-FCS.MT con 10 lL disponible viral de
Variante X4
Las clulas y el VIH-1 se incubaron en un vial
durante 1 h 30 min a 37 C.
se transfirieron a placas de 12 pocillos, se mezcla
con 1 ml de medio que contiene el compuesto de
ensayo a una adecuada la dilucin, y se incubaron
adicionalmente a 37 C y se cultivaron durante 3
das
Ensayos antivirales
Se evalu la actividad antiviral del compuesto mediante la
medicin de inhibicin de la replicacin del VIH-1 en cultivos
de clulas MT-4y en los tejidos linfoides humanos
Citometra de Flujo
Para evaluar v la citotoxicidad se utilizo un marcador de
Fluorescencia de Anticuerpos anti-CD3-QD605, anti-CD4-
QD655, anti-CD8-QD705, anti-CD25-APC, anti-CD38-PE, anti-
HLA-DR-APC-Cy7, anti-CXCR4-
Violeta brillante 421, anti-CCR5-PR-Cy5 anti-CD45RA-FITC, y
anti-CCR7-PE-Cy7
Enumeracin de las celulas infectadas por VIH-1 se realizaron
con intracelular tincin por medio de anti-p24-PE
Se cuantifico la reduccin de clulas usando el control
volumtrico y el tejido de acuerdo a sus pesos por bloques.
 RESULTADOS
Sntesis heterodmero 3TC-AZT

Mediante la evaluacion de los

rendimientos del Producto
El TLC de Silica gel 60 sobre Placas
F254 permite la conclusin de los
rendimientos del heterodmero

Las Condiciones de separacin de

las mezclas de reaccin.
Mediante cromatografa el
AZT se elimino facilmente debido un
una gran diferencia en la movilidad
cromatogrfica
Preparamos cido cido fosfnico etoxicarbonilo tratado con dietil fosfonoformiato de
etilo con trimetilbromosilano en Temperatura ambiente.
La Interaccin del cido Resultante con 3TC en presencia de diciclohexilcarbodiimida
Llevado un3TC 50 fosfonato -etoxicarbonil.
Despus se trato con amonaco acuoso al 25% de una temperatura ambiente durante
18 h pra dar Como resultado la Formacin de 3TC-AZT heterodmero con un
rendimiento del 45%
En Presencia de cloruro de triisopropilbencenosulfonilo durante 72 h. Se confirmo la
estructura por medio de espectroscopia1H, 13 C
La evaluacin de la estabilidad qumica de
3TC-AZT heterodmero se ensay a
diferentes niveles de pH y puntos de tiempo.
(A) Los perfiles de elucin de heterodmero
(solucin en
DMSO) bajo diferentes condiciones de HPLC
(I, el modo de fase inversa) pH6,6 durante
72h y (modo II, pseudo-par inico) pH 8,6
durante 5 min. (B) Perfil de elucin tras la
incubacin a pH 5,15 durante 24 h bajo
condiciones (II,
se muestra pseudo-par inico modo) en el
panel B. En todos los casos los productos de
hidrlisis fueron los compuestos activos AZT,
3TC

inhibicin se calcul a partir de 7

experimentos independientes. Se estim la
concentracin del 50% de efectividad
(EC50) y el intervalo de confianza al 95%
ajustando los datos por regresin logstica.
 CONLUSION
Se encontr que el heterodmero 3TC-AZT suprime de manera
eficiente la replicacin del VIH-1 en tejidos de amgdalas con un EC 50
en un rango clnicamente aprobado.
Se confirm la baja toxicidad de los compuestos para las clulas del
tejido en cultivos de clulas MT-4,