Historia de la Cromatografia.

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En 1906, Martin Tswett publico
un articulo sobre la
Cromatografia. Tswett separ los
componentes de la Clorofila
utilizando Carbonato de Calcio
como Absorbente y Eter de
Petrleo como eluyente.

En 1931, Kuhn y sus

colaboradores aislaron y
carotenos de la zanahoria,
empleando el mismo mtodo de
Tsweet.
Historia de la Cromatografia.-
Por los aos de 1940, Martin y
Synge trabajaron en las bases
Tericas de la Cromatografia, lo
cual hizo posible definir Mtodos
que habilitan la eficiencia de la
separacin cromatografica. Ello
hizo posible que la Cromatografia
tuviera una amplia aceptacin.
En la decada de 1950, el mtodo
cromatografico fue aplicado a la
Cromatografia de Gases.
En 1957, Golay propuso el uso de
Columnas Capilares para la
Cromatografia de Gases.
Historia de la Cromatografia.-

En la decada de 1960, naci la

Cromatografia Lquida.
En 1975, En la decada de 1950,
Small y sus colaboradores
propusieron la Cromatografia de
Intercambio Ionico de Alta
Performance.
En 1979, Gierde y sus
colaboradores desarrollaron el
sistema de Cromatografia de
iones sin supresores.
Introduccin a la Cromatografia

Que es la Cromatografia?

La Cromatografia es una
Tcnica de separacin (al
igual que la destilacin).
El proposito de la
Cromatografia es Separar
y Cuantificar analitos en
mezcla (por lo general en
matrices complejas).
Ventajas de la Cromatografia:
1. Anlisis Simultaneos.
2. Alta Resolucin.
3. Alta Sensibilidad (niveles
de ppm - ppb)

4. Pequeos Volumenes
de Inyeccin (de 1 a 100
uL).
Tipos de Cromatografia:
1. Cromatografia de Capa Fina
(Thin-layer Chromatography - CC?
TLC).
TLC? SFC? GC?
2. Cromatografia de Columna
(Column Chromatography). HPLC? CE?
3. Cromatografia de Gases (Gas
Chromatography - GC).
4. Cromatografia Lquida de Alta
Performance (High performance
liquid Chromatography - HPLC).
5. Cromatografia de Fluido
Supercrtico (Supercritical Fluid
Chromatography - SFC).
6. Electroforesis Capilar (Capillary
electrophoresis - CE).
Como es que ocurre la separacin en Cromatografia?
La separacin ocurre por
migracin de los analitos en
mezcla a diferentes velocidades
a lo largo del sistema
cromatogrfico.
La velocidad de migracin esta
gobernada por diferentes
interacciones entre la muestra
(conducida por un lquido o gas
en movimiento) y el Absorbente
(slido o lquido).
Definimos as a la Fase Mvil
y la Fase Estacionaria.
 Como es que ocurre la separacin en Cromatografia?

Como se ha podido
observar, la separacin se
ha realizado como
resultado de una
diferencia entre la
interaccin entre los
analitos y la fase
estacionaria.
 Que es un Cromatograma?
Un Cromatograma es el registro de los componentes de una mezcla (en forma
de un Pico y en funcin del tiempo). Los componentes (separados por la
columna), pasan a travs de un detector, el cual registra la seal de cada
componente en forma de un pico.

tR2
tR1 Compuesto 1
Intensidad
de la Seal Compuesto 2

Inyeccin de t (min)
la muestra
 Que caractersticas presenta un Cromatograma?

Para obtener Picos bien

Un Cromatograma debe de definidos deben de controlarse
presentar Picos de forma una serie de factores, en caso
simtrica y bien definidos. contrario ocurrirn los
Debe de presentar alturas de ensanchamientos de bandas.
Pico dentro de la escala de
registro.
Debe de tener una lnea base
consistente.
No debe de presentar bandas
anchas.
 Que informacin me da un Cromatograma?
Un Cromatograma nos da dos tipos de informacin:

1. Informacin Cualitativa: El Tiempo de

Retencin casi siempre es constante bajo las
mismas condiciones cromatogrficas. Esto nos
sirve como un parametro de identificacin de
sustancias.
2. Informacin Cuantitativa: El Area del Pico de
cada componente es proporcional a la
concentracin del componente en la mezcla, y este
valor es utilizado para realizar clculos de
concentracin.
 Que informacin me da un Cromatograma?
Un Cromatograma tambien puede utilizarse para evaluar la
eficiencia de separacin y la performance de la columna.

Los Principales Parametros de evaluacin son:

Factor de Capacidad: k.
Selectividad:
Nmero de Platos Tericos: N
Platos Tericos Equivalentes: HETP
Resolucin: Rs
Factor de Capacidad (k)
Que es el Factor de Capacidad?
El Factor de Capacidad es un valor nmerico que nos indica el
grado de separacin que puede tener una columna en funcin del
volumen retenido de un analito y el volumen retenido del solvente.
El factor de capacidad se expresa en funcin del volumen por
que:
El tiempo de retencin depende de la razn de flujo y las
dimensiones de la columna, por ello no es un valor apropiado
para la comparacin de Cromatogramas.
El Factor de Capacidad es independiente de la razn de flujo
y de las dimensiones de la columna.
El valor de el Factor de Capacidad utilizando razones de
Volumen por lo general debe de oscilar entre 1 a 5
(preferentemente).
Factor de Capacidad (k)

Vr - V0
k'= Vr
V0

Vr = Volumen de Retencin del

Pico de un Soluto. V0
V0 = Volumen del Solvente (Pico
no retenido)

Injeccin
El tiempo de Retencin
puede utilizarse para fijar el
Volumen de Retencin.
Vo 12 3 4
k = 0
Factor de Capacidad (k)
10 min (t1)
2 min (t0)
k' = 4

6.0 mm ID x 150 mm L. (1 mL/min)

12 min (t1)
4 min (t0)
k' = 2

4.6 mm ID x 250 mm L. (0.6 mL/min)

El nmero de Platos Tericos (N)
Que es el Nmero de Platos Tericos?
El Nmero de Platos Tericos es un indice nmerico que nos
indica el grado de eficiencia de la columna cromatogrfica.

N = 15000

N = 2500

Columna con buena eficiencia, Columna con pobre eficiencia,

alto valor de N bajo valor de N
 El nmero de Platos Tericos (N)
Que es el Nmero de Platos Tericos?
Cromatograficamente, el nmero de Platos Tericos es la
relacin entre el tiempo de retencin del soluto y el
ancho de la banda del mismo (el incremento del ancho
del pico del analito).

Consideraciones:
Los picos de los analitos deben de ser simtricos y de bandas
delgadas.
Los Picos de los analitos que presenten bandas anchas y que
adems se encuentren muy cercanos entre si no podrn ser
resueltos y sern coeluidos.
El nmero de Platos Tericos (N)
Matematicamente y en funcin de los siguientes parametros
cromatograficos:

t El nmero de Platos Teoricos se

expresa como:
r
Ecuacin Original:
Area
N = 16 (tr / W )2
H
Ecuacin Modificada para las
W1/2 mediciones actuales:
H1/2
N = 5.54 ( tr / W1/2 )2
W
Altura Equivalente a un Plato Terico (HETP)
Que es una HETP?
Una altura Equivalente a un Plato Terico es otro indice nmerico
que nos indica el grado de eficiencia de la columna
cromatogrfica.
Matematicamente se expresa como:

HETP = L / N
L = Longitud de la Columna
N = Nmero de Platos Tericos

El valor de una HETP se traduce como el Plato Terico mas corto

que puede colocarse dentro de la longitud de columna. Esto
significa que mientras mas pequeo sea una HETP, podemos
colocar mas HETP y la eficiencia de la columna sera mayor.