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Prof.Ms.Emerson L.B.Loureno.
Toxicologia Forense
Definio: Cincia que detecta e identifica a
presena de drogas e venenos em fludos
corpreos, tecidos e rgos.
Toxicologia Forense
Funes diversas;
Dificuldade de Separao....
A
N
L
I
S
E
S
Papel da Toxicologia analtica
BIOTRANSFORMAO DO BENZENO NO FGADO E MEDULA SSEA
FGADO
CytP450 CytP450
Benzeno fenol hidroquinona
[O] [O]
MEDULA SSEA
Prostaglandina sintetase
Hidroquinona radical fenoxil
(aplasia de medula )
Como determinar?
O que procurar nestas amostras?
CH3 OH CH3
CH2 CH N
CH2 CH N
CH3 H
CH3 H
metanfetamina efedrina
anfetamina
H
CH2 CH N
CH3 H
CH2CH2CN OH H
CH2 CH N CH CH N
CH3 H CH3 H
femproporex fenilpropanolamina
ESTERIDES ANABLICOS
OH OH
ANDROGNICOS
OH
HO
H O
O
1-Androstenodiol Boldenona Cl Clostebol
OH H5C2 OH
CH3 OH
C CH
H N
N
H O
O
Estanozolol Gestrinona Nandrolona
OH OH H5C2 OH
CH2CH3
THG
O O O
OH Oxabolona Trembolona
AGENTES ANABLICOS
1. Esterides anablicos andrognicos
Efeitos txicos
Baixas concentraes
DETECO
URINA
O desafio dos anabolizantes
Contedo da seringa
18-homo-pregna-4,9,11-trieno-17-ol-3-ona
4,9,11- trieno-3-one
Designer steroids
Esterides de desenho
Tetraidrogestrinona Concluses de Catlin et al.
R
Flunitrazepam (FNZ)
o FNZ ilcito GHB
h
y
p
n
o
l
WWW.DEA.GOV
GHB
Gama-hidroxibutirato (Ecstasy lquido, GBL).
GHB
Definio:
Depressor do SNC.
www.baladacerta.com.br surforeggae.ig.com.br
DOB - (Cpsula do vento)
(4-bromo-2,5-Dimetoxi-4-
bromoamfetamina
Derivado anfetamnico acrescido de um tomo de bromo (
responsvel por potencializar o efeito da droga e por aumentar o
tempo de ao).
Primeiramente sintetizada por Alexander Shulgin (EUA) in 1967.
Cpsula transparente com capacidade de 500 mg que contm cerca
de 1 a 1,5 mg da substncia.
CH3
N ster metil ecgonina
O
C O CH (15-35%)
3
OH
CH3
N
N
H Norcocana N
CH3
O
C O CH
3 O (2-6%) O
C O CH C
O 3 OH
O C
O
O C OH
Cocana
Ecgonina
(3%) N
CH3
(1-8%)
O
C OH
O Benzoilecgonina
O C
(15-50%)
Amostras
PRAGUICIDAS
Ex:Azinfs,etion,forato,malation,tiometon
Derivados do cido Fosfnico.
Ex:Triclorfon
Oral, respiratria e drmica.
Biotransformao
Oxidao
x
cido Carbmico
Aldicarb,Carbaril,Carbofuran
INSETICIDAS ORGANOCLORADOS
a) Hexaclodienos e anlogos.
b) DDT e anlogos.
c) Ciclodienos.
d) Dodecacloro e clordecone.
DDT
Aldrin Dieldrin
PIRETRIDES
TCNICAS DE PREPARAO DE
AMOSTRAS EM ANLISES
TOXICOLGICAS
CH3
O C5H11 CH3
CH3 O C5H11
CH3
Delta-9-
Tetraidrocanabinol O
(THC) C O cido glicurnico
OH
-Hidrlise
-Alcalina
-cida
-Enzimtica
HIDRLISE ALCALINA
-Exemplo
O
O
C O cido glicurnico
C OH
OH
60C OH
NaOH
CH3
CH3
O C5H11
CH3 O C5H11
CH3
Diazepam Benzofenona
HIDRLISE ENZIMTICA
Beta glucuronidase
Esterides 55C Esterides
Anablicos Anablicos
conjugados 1 hora
livres
HIDRLISE ENZIMTICA
-Vantagens:
-no degrada os analitos
- Desvantagens:
-custo mais alto
-maior tempo de reao
-controle mais rigoroso das condies
-enzimas podem ser inibidas por substncias
presentes nas amostras
-aconselhvel o uso de controle
OUTRAS AMOSTRAS
P. ex: cabelo
-Matriz complexa
-como retirar os analitos do cabelo?
-digesto da matriz (soluo de NaOH 1M e temperatura 70C
durante 20 minutos)
substncias estveis (THC, anfetaminas)
OUTRAS AMOSTRAS
P. ex: cabelo
CH3
-Incubao em soluo
N
cida ou metanol durante
O 18 horas a 50C
C O CH
3
O
O C
2) Remoo de interferentes
endgenos
A) Precipitao de protenas:
A remoo de protenas por desnaturao ou precipitao muitas
vezes necessria principalmente em amostras como sangue total ou
plasma. A principal razo de remover protenas que elas podem
precipitar em contato com a fase mvel, obstruindo a coluna de
HPLC.
Mtodos de precipitao:
a) com cidos ( p.ex. cido tricloroactico e cido
perclrico)
-formam sais insolveis com a forma catinica
das protenas em meio cido
Solvente
orgnico
urina
Drogas/
urina
metablitos
Agitao
OH Forma
O
C OH H+ no-
ionizada
CH3
O C5H11
OH CH3
O
CH3 C O
O C5H11
CH3 OH
Forma
cido 11-nor-delta -
OH- CH3
ionizada
9-THC-COOH O C5H11
CH3
EXTRAO
(lquido-lquido)
INFLUNCIA DO pH NA
HIDROSSOLUBILIDADE/LIPOSSOLUBILIDADE
substncias de carter bsico. Ex. anfetaminas
H H
+
CH2 CH N
H+ CH3
H
H Forma ionizada
CH2 CH N
CH3 H
H
Anfetamina CH2 CH N
OH- H
CH3
Forma no-ionizada
EXTRAO
(lquido-lquido)
= molcula de gua
EFEITO SALTING OUT
H
CH2 CH N
CH3 H
+ NaCl (cloreto de sdio)
H
CH2 CH N
Na+ Cl- CH3 H
EXTRAO
(fase slida)
2,5mL Amostra 3mL gua +3mL 2mL
2mL Metanol +
+ 2,5mL gua + HCl (0,1M), diclorometano/
2mL tampo PI + 2mL secagem (5min) isopropanol /
fosfato tampo fosfato + 9mL metanol NH3 (80:20:2)
BE
PI
Interf.
COC
1 2 3 4
Tipos de colunas (SPE)
C8
Octil Si
PH
Fenil Si
CH Si
Ciclo
hexil
Tipos de colunas (SPE)
CN Si C N
Cianopropil
H O
NH2 H
Si NH
Aminopropil
H O
2OH
Si O O H
Diol
OH H NH
Tipos de colunas (SPE)
O
CBA C
Si O- +
cido NH3 R
carboxlico
SCX
Si
cido
benzenosulfnico SO3- +
NH3
SAX
Trimetil Si N+(CH3)3 -
SO3 R
aminopropil
EXTRAO
H + CH3
N
Forma
CH3
H+ O
C OH
ionizada
N
O
O O C
C OH
O
O C
CH3
N
Benzoilecgonina
O
-
-metablito da C O
cocana OH- O C
O Forma
ionizada
EXTRAO
(fase slida)
H + CH3
SO3- N
O
C OH
O
O C
EXTRAO POR HEAD SPACE
DETERMINAO DE VOLTEIS
1 2 3 4 5 6
MICRO EXTRAO EM FASE SLIDA (SPME)
-Baseado na partio do analito entre a fibra de extrao e a matriz
(amostra)
MICRO EXTRAO EM FASE SLIDA (SPME)
-Fibras comercialmente disponveis:
-simplicidade
-prtico
-rpido
-extrao sem utilizao de solventes
-pode ser automatizado.
4) Aumento da seletividade e
sensibilidade
-Derivao
Objetivo:
-melhorar as condies cromatogrficas
(GC)
-aumentar a sensibilidade
-Derivao
Ex. opiceos
Aumento da volatilidade
(melhora das condies
cromatogrficas (GC)
N.CH3
N.CH3
H BSTFA
H
H 70C 20 H
min
CH3 CH3
CH3 Si O O O Si CH3
HO O OH
CH3 CH3
-Derivao
Ex. benzoilecgonina
Aumento da sensibilidade
para detectores ECD
CH3 CH3
N PFP/PFPA N
O
O 70C 20 C O CH2CF2CF3
C O H
min O
O O C
O C
MATRIZES BIOLGICAS
URINA
SANGUE
AR EXALADO
MATRIZES ALTERNATIVAS:
SALIVA
CABELO
MECNIO
UNHA
SUOR
URINA
Nfron
URINA
CARACTERSTICAS:
Coleta no invasiva
Disponibilidade de grandes volumes de
amostra
Concentrao alta
Facilidade da anlise (baixo custo)
Possibilidade de adulterao da amostra
Perodo de deteco: alguns dias
Deteco de uso eventual
SANGUE
CARACTERSTICAS:
Coleta invasiva
Necessidade de profissional treinado
Matriz relativamente complexa
Perodo de deteco: algumas horas
Correlao com estado clnico
Maior dificuldade de adulterao
SALIVA
SALIVA
CARACTERSTICAS:
Coleta no-invasiva
Facilidade na coleta
Coleta sob vigilncia e em campo aberto
Correlao com concentrao sangnea
Perodo de deteco: algumas horas
Pouco volume de amostra
Concentrao baixa
CABELO
CARACTERSTICAS:
Coleta no-invasiva
Perodo de deteco: meses
Retrospectiva e cronolgica
Deteco: uso intenso
Disponibilidade: ????
Adulterao: difcil
Possibilidade de contaminao
Baixa concentrao
Matriz complexa -dificuldade na anlise
CABELO
1 cm
2 cm
3 cm
4 cm
5 cm
6 cm
7 cm
8 cm
9 cm
10 cm
MECNIO
CARACTERSTICAS:
Exposio fetal
Coleta no-invasiva
Matriz complexa -dificuldade na anlise
Perodo de deteco: meses
Disponibilidade
Possibilidade de contaminao
UNHA
UNHA
CARACTERSTICAS:
Coleta no-invasiva
Baixa concentrao
Dificuldade na anlise
Perodo de deteco: meses
Uso intenso
Disponibilidade????
Adulterao: difcil
Possibilidade de contaminao
SUOR
CARACTERSTICAS:
Coleta no-invasiva
Coleta atravs de adesivos patch
Baixa concentrao
Dificuldade na anlise
No existem muitos estudos
Monitorar pacientes em tratamento
Aumento da seletividade e
sensibilidade
-Derivao
Objetivo:
-melhorar as condies cromatogrficas
(GC)
-aumentar a sensibilidade
-Derivao
Ex. opiceos
Aumento da volatilidade
(melhora das condies
cromatogrficas (GC)
N.CH3
N.CH3
H BSTFA
H
H 70C 20 H
min
CH3 CH3
CH3 Si O O O Si CH3
HO O OH
CH3 CH3
-Derivao
Ex. benzoilecgonina
Aumento da sensibilidade
para detectores ECD
CH3 CH3
N PFP/PFPA N
O
O 70C 20 C O CH2CF2CF3
C O H
min O
O O C
O C
Tcnicas de extrao e deteco em amostras biolgicas de acordo com a