Buenas Practicas

BUENAS PRACTICAS DE TRABAJO Y
SEGURIDAD APLICADAS AL LABORATORIO

DE MICROBIOLOGIA
* Llenado de documentacin
* Buenas prcticas en el laboratorio de
microbiologa farmacutica
* Manejo, activacin y control de cepas ATCC
21/9/2017 Bioqumico Facundo Eduardo Vidaurre

* Llenado de documentacin
Objetivo
Establecer los puntos bsicos a tener en cuenta al llenar un
documento.
Fundamento
La documentacin es una parte esencial de las Buenas
Prcticas de Manufactura; por lo tanto es necesario que se
complete en tiempo, forma y de manera clara y as poder
obtener resultados trazables y confiables.
Bioqumico Facundo Eduardo Vidaurre

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Desarrollo
Una buena documentacin constituye una parte esencial del
Sistema de Calidad. La documentacin claramente escrita
previene los malos entendidos y permite el seguimiento de la
historia o trazabilidad de las actividades que requieren un
registro segn el Sistema de Calidad implementado.

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Los Formularios Generales, las Listas de Chequeo, los
Protocolos de Elaboracin, los Protocolos de
Acondicionamiento, los Rtulos, los cuadernos de analistas,
etc. deben estar libres de errores o con los errores salvados y
disponibles por escrito. La legibilidad de los documentos es de
suma importancia.

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Caractersticas de un buen registro
* Permanente.
* Legible y claro.
* Exacto.
* Realizado a tiempo y directamente (sin
pasos intermedios).
* Consistente.
* No debe contener contenidos ambiguos
* Completo.
* Firmado y fechado.
* Enmiendas bien hechas.

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Generalidades
Siempre se debe completar la documentacin en tiempo
y forma, vale decir en el momento en que se utilice y de
manera correcta.
Los registros deben ser realizados manualmente en
forma clara e indeleble con lapicera tinta azul. El uso de
lpiz est prohibido ya que puede borrarse fcilmente o
ser alterado.
En el caso de escribir un dato en forma errnea, no
sobrescriba para corregirlo, no realice tachaduras, no
utilice goma de borrar ni corrector para anularlo

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Trace una lnea fina sobre el texto errneo, permitiendo
la lectura de la informacin que se ha de modificar,
escriba el dato correcto prximo al registro errneo
(arriba, abajo, derecha o izquierda del mismo); firme y
feche, registrando la fecha en la que se est realizando
dicha enmienda; adems debe proveer una breve
explicacin para las correcciones, salvo cuando el error
sea en las fechas.

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Por ejemplo:
Nota: La enmienda se debe justificar en todos los casos

salvo cuando el error sea en las fechas.

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En el caso que la lapicera no funcione correctamente,
evite remarcar.
No deje espacios en blanco, escriba la abreviatura N/A o
NA (NO APLICA) firmando y fechando.
En caso que el documento por su formato incluya firma y
fecha complete estos datos en el espacio
predeterminado, coloque solamente N/A donde
corresponda sin firmar ni fechar nuevamente.

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En el caso de espacios grandes, por ejemplo por finalizacin
de la actividad proceda de la siguiente
El escribir N/A o NA (NO APLICA), en un espacio en blanco

significa que este espacio de registro es sobrante .

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Siempre que realice una operacin y no tenga lugar asignado
para firmar y fechar, hgalo al final del desarrollo de la misma,
dando conformidad de lo realizado.
De resultar el espacio insuficiente, colocaque asteriscos
numerados. Ej: 1 En el caso de que el llamado diferencial (*)
sea repetitivo porque se colocan varias enmiendas para la
misma causa de error, se puede repetir el numero del
asterisco.
Ejemplo 1:
Clonacepan *1
Clonacepan *1
Clonacepan *1
Clonacepan *1

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Las firmas debern ser las mismas que declar en el registro
de firmas. No se permite el uso de iniciales. Ej: MM-IT-AJ-
MC-PO-LE.
No est permitido el uso de comillas , tildes ni palabras del
tipo idem , para el reemplazo de datos, resultados y/o
palabras entre renglones.

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Tampoco est permitido el uso de abreviaturas y/o
claves que no se encuentren predefinidas en el
documento o no sean de conocimiento generalizado
{Ej: q (que) h/ (hasta)- p (para)- x (por) s/ (segn)}
Se debe utilizar para seleccionar opciones Circular la
opcin correcta siempre que se encuentre claramente
establecido como consigna en el registro.
Ejemplo:

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Se pueden utilizar tildes o cruces en las casillas de una
lista de chequeo para confirmar la realizacin de la
actividad. Tambin puede utilizarse SI/CUMPLE
En el caso que se deba pegar un registro en otro
documento (por ejemplo: Planillas de clculo en los
cuadernos de analistas, reportes de ciclos de secado en
los protocolos de elaboracin, etc.), se debern firmar de
modo que la firma abarque ambos documentos.

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Registro de Hora y Fecha
Si es necesario colocar la hora en un documento, deber
adecuarla a la forma legal de Argentina, o sea de 00:00 a
23:59 hs. Utilizando dos dgitos para la hora y dos dgitos
para los minutos
Ejemplo: 08:15 en la maana 20:15 en la tarde
Coloque las fechas de la siguiente forma: DIA/MES/AO.
Ejemplo:
- 09/05/13
- 09/05/2013
- 09/MAY/2013

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Registro de Unidades de Medidas
Se respetar la simbologa adoptada por el Sistema
Mtrico Legal Argentino o en el Sistema Internacional de
Unidades (SI).
Cifras Significativas
Para las mediciones cuantitativas si la cantidad requerida
de cifras se muestra con cuatro cifras significativas como
por ejemplo 500.0 g; registre el valor obtenido
respetando la cantidad de cifras significativas solicitada
en la documentacin.

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Ejemplo:
Si peso 500.21 g
Correcto: Incluir un digito despus del punto decimal:
500,2 g
Tampoco es correcto registrar 500 g
De esta forma mantenemos la cantidad de cifras
significativas solicitadas en la documentacin.

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Redondeo
Es vlido redondear un nmero con el fin de cumplir con la
cantidad correcta de cifras significativas especificadas en la
documentacin.
Para ello tenga en cuenta que si el ltimo digito de la
derecha es menor que 5, quite el
dgito adicional y deje la cifra anterior
Ejemplo:
Si peso 500,21 g
Correcto: 500,2 g
Si el ltimo dgito es 5 o ms, retire el dgito adicional y aumente
la cifra anterior por una unidad
Ejemplo:
Si peso 500,28 g
Correcto: 500,3 g

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*BUENAS PRACTICAS PARA EL LABORATORIO DE
MICROBIOLOGIA DE INDUSTRIA FARMACEUTICA
Objetivo
Establecer un procedimiento por escrito que indique la forma
de proceder segn las Buenas Practicas del laboratorio.
Fundamento
Debido al riesgo inherente de variabilidad de los datos
microbiolgicos, la confiabilidad y la reproducibilidad de los
mismos dependen de la utilizacin de los mtodos aceptados,
y del cumplimiento de las Buenas Practicas del Laboratorio
Alcance
Todas las prcticas llevadas cabo en el Laboratorio de Microbiologa

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Desarrollo
Las buenas prcticas en un laboratorio microbiolgico consisten en
actividades que dependen de varios principios como tcnicas
aspticas, control de medios, control de cepas, operacin y control
de equipos, registro y evaluacin de datos, como tambin
capacitacin del personal.
* Personal y Capacitacin
Los ensayos microbiolgicos deben ser realizados y supervisados
por una persona experimentada, calificada en microbiologa o su
equivalente. El personal debe tener entrenamiento bsico en
microbiologa o en otro campo cientfico vinculado a la biologa y
experiencia prctica relevante antes de ser autorizado a realizar los
ensayos microbiolgicos.

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El el laboratorio microbiolgico debe contar con un sistema de
procedimientos operativos estndares, el cual tiene como
finalidad lo siguiente:
*Describen la metodologa que los analistas deben
seguir para obtener resultados reproducibles y precisos y que a
la vez sirven como base para las capacitaciones.
*El registro de las capacitaciones realizadas por el
personal define el tipo de tareas que podr realizar.
Es importante mantener las descripciones de los puestos de
trabajo vigentes. Tenga registro de todo el personal tcnico que
describa sus reas de competencia, entrenamiento y
experiencia.

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La gerencia del laboratorio debe asegurar que todo el personal haya
recibido una capacitacin adecuada para la ejecucin correcta de los
ensayos y el manejo de los equipos. El personal solo puede realizar
alguna operatoria si se ha reconocido su entrenamiento. Cuando un
mtodo o tcnica no se usa regularmente, se debe verificar la destreza
del personal para realizar dicho ensayo antes de llevarlo a cabo.
Asegure que el personal est entrenado en los procedimientos
necesarios para la contencin de microorganismos dentro de las
instalaciones del laboratorio,
El personal debe estar entrenado en el manejo seguro de
microorganismos.

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Personal autorizado con experiencia adecuada y conocimientos
relevantes de la aplicacin especfica incluyendo, por ejemplo,
requisitos regulatorios, tecnolgicos y criterios de aceptacin, debe ser
quien emita las opiniones e interpretaciones de los resultados de los
ensayos en los informes.
* Medio Ambiente
Asegure que todas las pruebas de laboratorio que se usan se realicen
bajo condiciones controladas.
Asegure que el laboratorio de microbiologa y algunos equipos de
apoyo (ej. autoclaves y material de vidrio) sean de dedicacin
exclusiva y estn separados de otras reas, especialmente de las de
produccin. Los laboratorios microbiolgicos deben estar diseados
para adaptarse a las operaciones que se llevan a cabo en los mismos.

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Diagrame las actividades teniendo en cuenta los espacios
disponibles de manera tal de evitar confusiones, contaminacin
y contaminacin cruzada. Debe haber espacio suficiente y
adecuado para las muestras, microorganismos de referencia,
medios (con enfriamiento, si fuera necesario), ensayos y
registros.

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Debido a la naturaleza de algunos materiales (ej. medios de
cultivo estriles vs. microorganismos de referencia o cultivos
incubados), disponga de lugares de almacenamiento
separados.
El diseo y aptitud de los materiales de construccin con los
que est realizado el laboratorio debe permitir una apropiada
limpieza y desinfeccin y de este modo minimizar el riesgo de
contaminacin. Verifique que los suministros de aire para
los laboratorios y para las reas de produccin estn
separados. El laboratorio de microbiologa debe contar con
unidades de manejo de aire separadas, controles de
temperatura y humedad.

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El personal debe estar al tanto de:
*los procedimientos adecuados de ingreso y salida, incluyendo
la vestimenta.
*el uso previsto de un rea determinada.
*las restricciones impuestas al trabajo dentro de tales reas.
*las razones por las cuales se imponen tales restricciones.
*los niveles apropiados de contencin.
Procure que las actividades del laboratorio, tales como la preparacin
de la muestra, la preparacin de medios de cultivo y de equipos y el
recuento de microorganismos estn segregadas en espacios diferentes
o al menos por tiempos, con la finalidad de minimizar el riesgo de
contaminacin cruzada y los resultados falsos positivos o falsos
negativos. Realice siempre el ensayo de esterilidad en un rea de
dedicacin exclusiva.

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Las reas clasificadas deben ser adecuadas para las operaciones a
desarrollar dentro del laboratorio de microbiologa. Base dicha
clasificacin en la criticidad del producto y la operacin a llevarse a
cabo en el rea. Realice el ensayo de esterilidad en la misma clase de
rea usada para las operaciones de fabricacin estril/asptica de
productos.
Evite mover rutinariamente los equipos de laboratorio entre reas de
diferente clase de limpieza para evitar la contaminacin cruzada
accidental
* Monitoreo ambiental en el laboratorio
Establezca cuando sea necesario y apropiado (ej. en reas para
ensayos de esterilidad) un programa de monitoreo ambiental que
cubra, por ejemplo, el uso de monitoreo activo de aire, placas de
sedimentacin o placas de contacto.

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* Limpieza, desinfeccin e higiene
Cuente con un programa documentado de limpieza y
desinfeccin. Siempre que se justifique, considere los resultados
del monitoreo ambiental.
Disponga de un procedimiento para el manejo y contencin de
derrames.
Disponga de instalaciones adecuadas para lavado y
desinfeccin de material.
* Instalaciones para el Ensayo de Esterilidad
Asegrese de que las instalaciones para el ensayo de
esterilidad tengan los requisitos ambientales especficos para
asegurar la integridad de los ensayos realizados.

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Lleve a cabo el ensayo de esterilidad dentro de una zona protegida con
flujo de aire unidireccional de Grado A o una cabina de bioseguridad
que debe localizarse dentro de un cuarto limpio con un entorno de
Grado B. Controle el diseo de las instalaciones y los patrones de flujo
de aire de los ambientes, y asegure que el flujo de aire unidireccional
no sea perturbado. (Cascada de presiones, rea Microbiologa)
Recalifique la clasificacin de cuartos limpios y los equipos de manejo

de aire de las instalaciones para ensayos de esterilidad, por lo menos
una vez al ao. Corrobore que el ambiente cumpla con los lmites de
partculas y realice la verificacin de la integridad de los filtros de
partculas de aire de alta eficiencia (HEPA, por sus siglas en ingls).

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Compruebe que el aire suministrado a las zonas de Grado A y B sea filtrado a
travs de filtros HEPA terminales.
Verifique los diferenciales de presin.
Tome y registre las lecturas de presin en los cuartos desde medidores
externos. Tome las lecturas antes de ingresar al cuarto del ensayo
Realice el ingreso al cuarto limpio a travs de un sistema de esclusas y un

vestuario donde se coloque la vestimenta de cuarto limpio. Corrobore que el
ltimo vestuario tenga en condiciones de reposo el mismo grado de
limpieza que el cuarto de ensayo al que comunica. Corrobore que los
vestuarios posean tamao adecuado para facilitar el cambio de vestimenta.

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Asegure que la vestimenta para el operador del ensayo de esterilidad
cumpla con los requerimientos para el anlisis de productos
farmacuticos estriles y que los operadores estn entrenados en los
procedimientos de vestimenta. Compruebe que se cuente con los
registros de las capacitaciones.
Corrobore que los accesorios y acabados de las dependencias
cumplan con los lineamientos para productos farmacuticos estriles.
Confirme que el monitoreo microbiolgico ambiental refleje la
instalacin utilizada (cuarto) e incluya una combinacin de mtodos
de muestreo de aire y superficie apropiados, como por ejemplo:
*muestreo de aire activo.
*placas de sedimentacin (exposicin).
*superficie de contacto: placas RODAC para deteccin y
recuento de microorganismos, hisopos o pelculas flexibles.

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* Validacin de Mtodos de Ensayo.
Los mtodos de ensayo estndares (farmacopeicos) se
consideran validados. Sin embargo, demuestre que el mtodo
de ensayo especfico a ser utilizado por el laboratorio para el
anlisis de un producto dado es adecuado para su grupo de
bacterias, levaduras y hongos filamentosos en presencia del
producto especfico. Verifique que los criterios de desempeo
del mtodo de ensayo estndar son satisfechos por el
laboratorio antes de introducir el ensayo como ensayo de rutina
(verificacin del mtodo) y que el mtodo de ensayo especfico
para un producto dado es adecuado (aptitud del mtodo de
ensayo incluyendo controles positivos y negativos)

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*Equipamiento
Identifique individualmente cada equipo, instrumento u otro dispositivo
utilizado para el anlisis, verificacin y calibracin.
Como parte de su sistema de calidad, cuente con un programa
documentado para la calificacin, calibracin, verificacin del
desempeo y mantenimiento de sus equipos y con un sistema para
el monitoreo del uso de los mismos. Verifique antes del uso de
cualquier equipo su estado.
Califique los equipos nuevos para cumplir con lo estipulado por un
protocolo aprobado por Garanta de Calidad.
Limpie y regularmente el equipo a fin de minimizar las posibilidades de
contaminacin en el laboratorio. Limpie y revise los sellos de las
puertas de incubadoras y refrigeradores para determinar si necesitan
reparaciones.

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En el caso de los autoclaves, no seleccione el uso de los mismos de
acuerdo a la necesidad de separar las tareas en aspticas y no
aspticas sino acorde a la disponibilidad de recursos. Habilite ciclos
destinados a material y medios dedicados a los ensayos de esterilidad,
en los que la apertura de la puerta del autoclave sea por la puerta
interna situada dentro de la sala de estriles.
Mantenimiento de equipos
Lleve a cabo el mantenimiento de los equipos esenciales en intervalos
predeterminados de acuerdo con un procedimiento documentado.
Mantenga registros detallados.

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Calificacin
Ver Cronograma.
Calibracin, verificacin de desempeo y monitoreo de uso
Corrobore que la fecha de calibracin y la fecha en que debe realizarse
la recalibracin estn indicadas claramente en una etiqueta adherida
al instrumento.
Determine la frecuencia de calibracin y verificacin de desempeo
por la experiencia documentada y bsela en la necesidad, el tipo y el
desempeo previo del equipo.
Dispositivos de medicin de temperatura
Compruebe que cuando la temperatura tiene un efecto directo sobre
el resultado de un anlisis o es crtica para el correcto funcionamiento
de los equipos los dispositivos de medicin de temperatura sean de la
calidad apropiada para alcanzar la exactitud requerida.

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Verifique que la calibracin de los dispositivos sea trazable a
estndares de temperatura nacional o internacional.
Incubadoras y baos de agua.
Establezca y documente inicialmente la estabilidad de la temperatura,
la uniformidad de su distribucin y el tiempo necesario para alcanzar
condiciones de equilibrio en las incubadoras y baos de agua.
Verifique la constancia de las caractersticas registradas durante la
validacin inicial del equipo despus de cada reparacin o
modificacin significativa. Monitoree y registre la temperatura de
operacin de estos equipos.
Autoclaves
Asegure que los autoclaves cumplan con las tolerancias de tiempo y
temperatura especificadas adems del monitoreo de la presin.
Calibre los sensores utilizados para controlar los ciclos operativos,
verifique el desempeo de los temporizadores.

21/9/2017 37
Corrobore que la validacin inicial incluya estudios de desempeo
(distribucin espacial de la temperatura) para cada ciclo operativo y
cada configuracin de carga usada en la prctica. Repita este proceso
despus de cualquier reparacin o modificacin significativa, o cuando
sea indicado por los resultados de los controles de calidad en los
medios o la evaluacin de riesgos.
Coloque sensores de temperatura suficientes dentro de la carga (ej. en
recipientes llenos de lquido/medio) para permitir demostrar las
diferencias debidas a la ubicacin.
Deben proporcionarse instrucciones operativas claras, basadas en los
perfiles de calentamiento determinados para los usos habituales
durante la validacin/revalidacin.

21/9/2017 38
Realice el monitoreo del autoclave a travs del uso de una termocupla
y registrador para generar un grfico o impresin
La eficiencia de su funcionamiento durante cada ciclo, tambin se
debe chequear por el uso de indicadores qumicos o biolgicos para los
propsitos de esterilizacin o descontaminacin.
La cinta de autoclave o las tiras indicadoras deben utilizarse slo para
demostrar que una carga ha sido procesada, pero no para demostrar
que se ha completado un ciclo aceptable.

21/9/2017 39
Pesas y balanzas
Calibre las pesas y balanzas en forma trazable a intervalos regulares
(de acuerdo a su uso previsto) usando las pesas estndares
apropiadas, trazables a pesas estndares certificadas.
Equipo volumtrico
Lleve a cabo la verificacin inicial del equipo o material volumtrico
La verificacin inicial no es necesaria para el material de vidrio que
haya sido certificado para una tolerancia especfica.

21/9/2017 40
Reactivos y medios de cultivo
Asegure que la calidad de los reactivos y los medios utilizados sea
apropiada para el ensayo en cuestin.
Reactivos
Verifique la aptitud de cada lote de reactivos crticos (colorantes para
la tincin de GRAM, Reactivo de Kovacs, Plasma de conejo, etc) para el
ensayo, inicialmente y durante su vida til.
Medios
Prepare o compre los medios ya sea parcial o totalmente preparados.
Corrobore que los proveedores de los mismos estn aprobados y
calificados. Realice la prueba de promocin del crecimiento y, si fueran
apropiadas, otras pruebas de desempeo adecuadas, para todos los
medios segn.

21/9/2017 41
Chequee el desempeo adecuado de los medios de cultivo, diluyentes
y otros lquidos de suspensin, cuando sea relevante, en relacin a:
*recuperacin o mantenimiento de la supervivencia de los
microorganismos. Demuestre una recuperacin del factor 2 despus
de la inoculacin de no ms de 100 unidades formadoras de colonias.
*inhibicin o supresin de los microorganismos diferentes al
objetivo.
*propiedades bioqumicas (diferenciales y de diagnstico).
*otras propiedades adecuadas (ej. pH, volumen y esterilidad).

21/9/2017 42
Almacene los medios bajo las condiciones apropiadas recomendadas
por el fabricante. Todos los envases, especialmente aquellos de medios
deshidratados, deben estar firmemente sellados. No utilice los medios
deshidratados que estn apelmazados o agrietados o muestren un
cambio de color.
Use para la preparacin de medios agua purificada la cual debe
cumplir con lo establecido en USP, no se debe utilizar agua de menor
calidad para dicha preparacin de medios.
Realice la distribucin de los medios despus de la esterilizacin, bajo
flujo de aire unidireccional para minimizar la posibilidad de
contaminacin ambiental. Tambin incluye el enfriamiento de los
medios, cuando necesite retirar las tapas de los envases para prevenir
la condensacin.

21/9/2017 43
Determine y verifique el periodo de vida til de los medios preparados,
bajo condiciones definidas de almacenamiento.
Identifique los lotes de los medios y documente su conformidad.
Prepare los medios de acuerdo con todas las instrucciones del
fabricante, tenga en cuenta especificaciones tales como el tiempo y la
temperatura de esterilizacin.
Confirme cada pH mediante la extraccin asptica de una muestra,
luego de haberse enfriado a temperatura ambiente (20-25 C).
Disuelva totalmente los medios de cultivo antes de su dispensacin y
esterilizacin.

21/9/2017 44
No utilice los dispositivos de microondas para la fusin de los
medios debido a la distribucin desigual del proceso de
calentamiento.
Pruebas de Control de Calidad
Realice las Pruebas de Control de Calidad a todos los medios
preparados, estas deberan incluir medicin de pH, Promocin
de Crecimiento, Pruebas de inhibicin y Pruebas de verificacin
de Propiedades indicativas, adems de los controles de
estabilidad para confirmar la fecha de caducidad.

21/9/2017 45
Lmite las pruebas de promocin de crecimiento a cada lote de medios
autoclavado, siempre que hayan sido preparados y esterilizados de
forma adecuada. Realice de igual modo controles negativos, para cada
lote de medios preparados, para de este modo asegurar la esterilidad
del medio.
Cuando un lote de medios no cumple con los requisitos, de las pruebas
de promocin de crecimiento, inicie una investigacin para identificar
la causa, la misma debera incluir un plan de accin correctivo para
evitar que el problema se repita. Tenga en cuenta que cualquier
partida de medios que no cumpla con la prueba de promocin de
crecimiento se considerara inadecuada para su uso.

21/9/2017 46
Para el caso de las pruebas de diagnostico, que ayudan en la
identificacin de microorganismos, como Tinciones de Gram, Pruebas
de Oxidasa, Coagulasa, Catalasa, etc, someta a los mismos a controles
de calidad. Seleccione las cepas estndares a ensayar como controles
positivos, y realice el control de calidad en paralelo en caso de oxidasa,
coagulasa, etc antes de realizar la prueba diagnostico de una muestra
desconocida.
Rotulacin
Asegrese de que todos los reactivos, medios diluyentes, lquidos de
suspensin, estn adecuadamente rotulados, para indicar segn
corresponda la identidad, concentracin condiciones de
almacenamiento, fecha de preparacin y/o periodos de
almacenamiento recomendados.

21/9/2017 47
*Materiales de referencia y cultivos de referencia
Estndares internacionales y sustancias de referencia farmacopeicas.
Utilice los materiales de referencia y materiales de referencia
certificados para calificar, verificar y calibrar equipos.
Utilice siempre que sea posible, estos materiales de referencia en
matrices apropiadas.
Los estndares internacionales y las sustancias de referencia
farmacopeicas se emplean, por ejemplo, para:
Determinar potencia o contenido.
Validar mtodos.
Comparar mtodos.
Realizar controles positivos.
Realizar las pruebas de promocin del crecimiento.

21/9/2017 48
Cultivos de referencia
Subcultive las cepas de referencia una sola vez para proporcionar
stocks de referencia. Realice chequeos de pureza y pruebas
bioqumicas en forma paralela segn corresponda. Se recomienda
almacenar los stocks de referencia en alcuotas ya sea congeladas o
liofilizadas. Los cultivos de trabajo para el uso rutinario deben ser
subcultivos primarios de los stocks de referencia
Si los stocks de referencia han sido descongelados, no vuelva a
congelarlos ni reutilizarlos.
Utilice no ms de cinco generaciones (o pasajes) de la cepa de
referencia original.

21/9/2017 49
*Muestreo, manejo e identificacin de muestras
Toda muestra que deba ser sometida a control microbiolgico, ensayos
de esterilidad o de endotoxina, debe seguir un circuito definido de
manera de asegurar el anlisis de las mismas en tiempo y forma.
Realice los anlisis de las muestras lo ms pronto posible despus del
muestreo. Compruebe que la responsabilidad del transporte y
almacenamiento entre el muestreo y la llegada al laboratorio de
ensayo est claramente documentada.
Determine que solo personal capacitado realice el muestreo. Este debe
llevarse a cabo en condiciones aspticas. Tome las precauciones
adecuadas para asegurar que se mantenga la integridad. Monitoree las
condiciones ambientales en el sitio de.

21/9/2017 50
Asegrese de tener procedimientos que cubran la entrega y recepcin de
las muestras y la identificacin de las mismas. Si la muestra es insuficiente
o se encuentra en malas condiciones debido al deterioro fsico,
temperatura incorrecta, envases rotos o etiquetado deficiente, consulte si
va a analizar o rechazar la muestra.
Registre toda la informacin relevante segn, como:
Fecha.
Condicin de la muestra al momento de la recepcin y
cuando sea imperioso la temperatura.
Caractersticas de la operacin de muestreo (incluyendo la
fecha y condiciones de muestreo).
Corrobore que las muestras entregadas al laboratorio vengan
acompaadas por documentacin que detalle el origen de la muestra, la
fecha en que se muestreo, la fechade entrega, el responsable de la
entrega.

21/9/2017 51
Almacene las muestras en espera de los ensayos en condiciones
adecuadas para minimizar los cambios en cualquier poblacin
microbiana presente. Las condiciones de almacenamiento deben estar
definidas y registradas.
Los procesos de desinfeccin aplicados al envase exterior no deben
afectar la integridad de la muestra.
Procure contar con un procedimiento escrito para la retencin y
eliminacin de muestras. Almacene las muestras hasta que se
obtengan los resultados de los ensayos, si fuera necesario.

21/9/2017 52
*Eliminacin de residuos contaminados
Disee los procedimientos para la eliminacin de materiales
contaminados de modo de minimizar la posibilidad de contaminacin
del ambiente o materiales de trabajo.
*Garanta de calidad de resultados y control de calidad de desempeo.
Cuente con un sistema de Calidad o Control de Calidad interno
(manejo de desvos, OOS,) para asegurar la consistencia de resultados
da a da y su conformidad con los criterios establecidos.
Tenga en cuenta que las valoraciones microbiolgicas analticas
pueden ser de difcil interpretacin debido a varias razones
importantes:

21/9/2017 53
1-Los microorganismos se encuentran en todas partes y los
contaminantes ambientales comunes asociados al ser humano,
predominan en muchos tipos de anlisis microbiolgicos.
2-El analista corre el riesgo de introducir organismos contaminantes
durante la manipulacin de la muestra o durante el procesamiento de
la misma en el laboratorio.
3-Los microorganismos pueden no estar distribuidos de forma
homognea dentro de una muestra o ambiente.
4-Las valoraciones microbiolgicas estn sujetas a una considerable
variacin respecto a sus resultados.
Cuando observe resultados que no se ajustan a los criterios de
aceptacin, lleve a cabo una investigacin en la desviacin de los datos
microbianos

21/9/2017 54
Hay generalmente dos razones diferentes para la observacin de
contaminacin microbiana que no cumple con un requisito y objetivo:
-Existe un error de laboratorio o condiciones ambientales de
laboratorio que generaron un resultado invlido.
-El producto contiene un nivel de contaminacin o tipos
especficos de contaminantes fuera de los lmites establecidos.
Realice una evaluacin integral y completa de la situacin del
laboratorio en que se origina el resultado.
La documentacin con la que cuenta debe ser suficiente para
demostrar que los ensayos fueron realizados en un laboratorio y que
los mtodos utilizados para el anlisis fueron adecuados.

21/9/2017 55
Esto incluye la siguiente documentacin:
*Capacitacin de analistas y verificacin de competencias.
*Validacin, calibracin y mantenimiento de equipos.
*Desempeo de equipos durante los anlisis.
*Preparacin de medios, controles de esterilidad, promocin
de crecimiento.
*Inventario de los medios y pruebas de control.
*Aspectos crticos de las pruebas realizadas segn
metodologas de trabajo.
*Verificacin de datos y clculos.
*Revisin de informes por parte de Garanta de Calidad.
*Investigacin de desviacin de datos.

21/9/2017 56
*Procedimientos de ensayos
Realice normalmente los ensayos de acuerdo a los procedimientos
vigentes basados en las farmacopeas nacionales, regionales o
internacionales.
Emplee procedimientos de ensayos alternativos siempre que hayan
sido debidamente validados y su equivalencia con mtodos oficiales
haya sido demostrada. Los mismos deben estar debidamente
documentados.
Mantenga registros adecuados de datos y estudios para el ptimo
funcionamiento del laboratorio microbiolgico.
Tenga como principio fundamental el basar cada prueba realizada en
los Procedimientos Operativos Estndares y la Metodologas de
trabajo..

21/9/2017 57
Compruebe que como mnimo los informes de laboratorio incluyan:
*Fecha
*Material analizado.
*Nombre del analista.
*Numero de procedimiento vinculado.
*Registro de los resultados de la prueba.
*Desviaciones si se presentaron.
*Parmetros documentados (Equipos usados, Cultivos
utilizados, lotes de medios de cultivo, etc)
*Firma de revisin.
*Firma de Dictamen
Confirme que todo lo que se refiera a equipos e instrumentos
este bajo un Plan de Calificacin y Calibracin, documentado y en un
Log Book de registro de mantenimiento.

21/9/2017 58
Corrobore que las temperaturas de los equipos (baos. Incubadoras,
autoclaves) se registren para adquirir trazabilidad,
En el informe incluya el procedimiento vigente y sus revisiones, tache
con una lnea para enmendar cuando corresponda, y coloque firma y
fecha. No use lpiz, goma ni correctores para cubrir datos originales.
Incluya en el informe los recuentos de las placas, para permitir que el
revisor pueda reproducir los clculos realizados para obtener los datos
finales.
Si incorpora tablas, grficas o tickets, asegure los mismos con
pegamento, sin obstruir la visualizacin de ningn dato en la pagina,
firme el mismo abarcando parte del folio y parte del documento
adosado.

21/9/2017 59
*Informes de ensayos
Si el resultado de un recuento es negativo, infrmelo como no
detectado para una unidad definida o menor que el lmite de
deteccin para una unidad definida. No informe el resultado como
cero para una unidad definida a menos que esto sea un requisito
regulatorio. Informe los resultados de los ensayos cualitativos como
No Ponderables en una cantidad de volumen definido. Exprselos
como menor que un nmero especfico de microorganismos para una
unidad definida cuando el nmero especificado de microorganismos
supere el lmite de deteccin del mtodo. No informe en los datos
crudos el resultado como cero para una unidad definida a menos que
sea un requisito regulatorio. Use un valor informado 0 para la
entrada de datos y clculos o el anlisis de tendencias en bases de
datos electrnicas.

21/9/2017 60
*Manejo, activacin y control de cepas
ATCC

21/9/2017 61
Objetivo
Establecer un procedimiento por escrito que asegure la correcta activacin y
seguimiento de las cepas utilizadas en el rea de microbiologa.
Fundamento
Disponer de un cepario estandarizado, conformado por cepas ATCC
cuantificadas y no cuantificadas, para realizar las diferentes actividades que
requieran su utilizacin.

21/9/2017 62
Alcance
Cepas ATCC no cuantificadas (American Type Culture Collection, 10801
University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209) http://www.atcc.org
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Escherichia coli ATCC 8739/25922
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Aspergillus brasiliensis ATCC 16404
Candida albicans ATCC 10231
Clostridium sporogenes ATCC 11437
Bacillus subtilis ATCC 6633

21/9/2017 63
Procedimiento de activacin
Cada vez que reciba un nuevo juego de cepas actualice el LIST, solo
deje plasmado en l, las cepas que estn en existencia en el
laboratorio.
Las activaciones y movimientos de las cepas deben ser registradas para
la trazabilidad de las mismas.
Trabaje en el box donde se encuentra situada la campana de flujo
laminar destinada para uso biolgico, colocando previamente en la
puerta el cartel que indica RIESGO BIOLOGICO. Use guantes de ltex,
barbijo y gafas de proteccin. Desinfecte los guantes con alcohol
isoproplico al 70% despus de trabajar con cada cepa y antes de la
siguiente.
Adjunte siempre los certificados de las cepas.

21/9/2017 64
Siga los pasos del proveedor para activar la cepa
Retire la etiqueta de identificacin de la cepa y pguela en el
cuaderno de Control de Cepas
Una vez activada esta
Inocule con el swab (hisopo) un rea circular de dos placas del
agar correspondiente segn el microorganismo del que se trate,
tal como se detalla

21/9/2017 65
21/9/2017 66
Realice la identificacin de los microorganismos aislados para
confirmar su pureza.
Este cultivo constituye el cuarto pasaje a partir del cultivo de
referencia.

21/9/2017 67
Acondicionamiento y almacenamiento de cepas de trabajo mediante
el sistema de CryoBank
Identifique que cepa colocar en cada vial de Criobank utilizando el
rotulo para tal fin Repique de Cepas.
Realice esta operatoria individualmente para cada microorganismo.
Tome colonias aisladas del cultivo puro e inocule un vial hasta lograr
una turbidez semejante al 3 4 en la escala Mac Farland (Standard).
Mezcle cuidadosamente el contenido del vial, para permitir la
distribucin homognea del microorganismo.

21/9/2017 68
Saque con micropipeta utilizando tips estriles tanto fluido
criopreservativo como sea posible, desechndolo en el cesto de
residuos patolgicos . Traspase pares de perlas a Tubos
Ependorf o similares, la cantidad de tubos ependorf preparados
por cada cepa se calculara en base a la necesidad del sector,
Almacene los tubos obtenidos en el Refrigerador de Ultra Baja
Temperatura a menos 70C.+/- 5 C .

21/9/2017 69
Personal de micobiologa registrar la temperatura del refrigerador de
ultrabaja temperatura mediante la utilizacin del controlador segn
indica.
El almacenamiento de las cepas reactivadas a esta temperatura tiene
una validez de 1 ao a partir de la fecha de reactivacin.
Utilice los tubos preparados para cada microorganismo para realizar
las correspondientes reactivaciones, coloque el que retire para ser
utilizado, en el Cryoblock. Registre su movimiento. Deje el resto de los
viales para ser utilizados cuando corresponda.

21/9/2017 70
Reactivacin de los microorganismos conservados mediante el
sistema de Cryobank
Cada semana retire el Cryoblock con el/los viales conteniendo las
perlas, del refrigerador de ultrabaja temperatura y colquelo en el
transportador de material aislante. Trabaje en el box donde se
encuentra situada la campana de flujo laminar, colocando previamente
en la puerta el cartel que indica RIESGO BIOLOGICO.
Desinfecte la mesada con alcohol isoproplico al 70%, colquese los
elementos de proteccin personal que correspondan.
Abra el vial y tome la cuenta a utilizar, coloque la misma en el tubo o
placa segn corresponda.

21/9/2017 71
Abra el vial y tome la cuenta a utilizar, coloque la misma en el tubo o
placa segn corresponda.
Estre la cuenta en un tubo con agar pico de flauta o en una placa
segn la tarea a la que ser destinado el cultivo una vez reactivado.
Realice la operacin por duplicado para cada microorganismo. El tipo
de agar sobre el cual realizar el estriado depender del
microorganismo en cuestin.

21/9/2017 72
Cada 15 das realice las identificaciones de cada uno de los microorganismos,
hgalo segn la, utilizando los cultivos obtenidos en tubo con pico de flauta,
la misma puede variar por alguna eventualidad en mas o menos 2 das, por lo
que cumplido este periodo, descarte los tubos existentes esterilizando los
mismos mediante un ciclo de autoclavado tal como se describe en , previo a
esto reactive nuevamente cada microorganismo a partir de nuevas perlas,
repitiendo el procedimiento y no descarte stos hasta obtener un buen
desarrollo de las nuevas.
Si el da en el que se debiera realizar la reactivacin fuera da no laboral
realice la misma el siguiente da hbil.

21/9/2017 73
Este cultivo constituye el quinto pasaje a partir del cultivo de
referencia, guarde los tubos, distinguiendo los de uso de los de no uso,
reservados por cualquier eventualidad, en refrigerador entre 2 y 8 C.
Utilice estos cultivos para la preparacin de inculos microbianos, los
cuales sern utilizados para la promocin de medios de cultivos y
Ensayos de Validacin de Tcnicas Microbiolgicas
Utilice estos cultivos, tambin para la realizacin de determinadas
pruebas: Coagualasa, Gram de Referencia y Controles Positivos en
medios especficos que evidencien el tipo de desarrollo. Para
identificar que cepa contiene cada tubo utilice el rotulo Repique de
Cepas

21/9/2017 74
Plan de Contingencia
Para el caso en que el refrigerador de ultrabaja temperatura
deba quedar fuera de funcionamiento ya sea por desperfecto, por
algn tipo de mantenimiento o por cualquier otro motivo, vare su
temperatura entre los -70 C y los -20C.
Dada la situacin, use un control de temperatura realizado por
un DATTA LOGER apto.
En el caso de superar los -20 C deseche las cepas y reactive
un nuevo juego.

21/9/2017 75
Procedimiento en caso de derrames
En caso de ocurrir un derrame de material infeccioso o potencialmente
infeccioso, notifique del mismo a todas las personas que estn
trabajando en la zona, utilice el Kit para derrames biolgicos peligrosos
ubicado en el Box y aplique el siguiente procedimiento de limpieza:
Utilice guantes y ropa protectora, tambin proteccin facial y ocular si
estuviese indicado.
Cubra el derrame con paos o papel absorbente para contenerlo.
Vierta hipoclorito de sodio al 5% preparado segn sobre el papel
absorbente y la zona inmediatamente circundante.

21/9/2017 76
Aplique el desinfectante en crculos concntricos, comenzando por el
exterior de la superficie del derrame y procediendo hacia el centro.
Despus del tiempo necesario (30 minutos), retire todos los
materiales, si hubieran vidrios rotos u objetos punzantes, jntelos con
una pala y depostelos en un recipiente a prueba de perforaciones para
su eliminacin segn .
Limpie y desinfecte la zona afectada por el derrame si fuera necesario
repita los pasos.

21/9/2017 77
Coloque el material contaminado en un recipiente para desechos a prueba de
fugas y perforaciones, al mismo colquelo en una bolsa de decontaminacin,
y someta la misma a un ciclo de autoclavado (Descarte. Registre dicho ciclo.
Tras haber culminado con la limpieza y desinfeccin informe a sus superiores
que el lugar quedo descontaminado.
Reponga cuanto antes todos aquellos elementos que fueron utilizados del kit
de derrames de forma que el mismo quede en perfectas condiciones para ser
utilizado nuevamente en otro caso similar.

21/9/2017 78
Nota 4: En cualquier caso, para todo material de vidrio
autoclavable que haya estado en contacto con las cepas,
realcele un ciclo de autoclavado,, antes de remitirlo al personal
de maestranza para su lavado.

21/9/2017 79
Muchas gracias por su
participacin

21/9/2017 80

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21/9/2017 Bioqumico Facundo Eduardo Vidaurre

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Nota: La enmienda se debe justificar en todos los casos

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El escribir N/A o NA (NO APLICA), en un espacio en blanco

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Recalifique la clasificacin de cuartos limpios y los equipos de manejo

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Realice el ingreso al cuarto limpio a travs de un sistema de esclusas y un

Bioqumico Facundo Eduardo Vidaurre

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