Citofluorimetra de flujo

Inmunologia Clinica
Ignacio Candia Ramos
 INTRODUCCIN
La citometra de flujo representa un mtodo rpido objetivo y cuantitativo de
anlisis de clulas, ncleos, cromosomas, mitocondrias u otras partculas en
suspensin.

El principio en el que se basa esta tecnologa es simple: hacer pasar clulas u

otras partculas en suspensin alineadas y de una en una por delante de un haz
luminoso.

La informacin producida puede agruparse en dos tipos fundamentales: la

generada por la dispersin de la luz y la relacionada con la emisin de luz por los
fluorocromos presentes en la clula o partcula al ser excitados por el rayo
luminoso. Las seales luminosas detectadas se transforman en impulsos
elctricos que se amplifican y se convierten en seales digitales que son
procesadas por una computadora.
 Parmetros que se pueden analizar por citometra
de flujo
Para el estudio fenotipico se utilizan anticuerpos monoclonales (Ig que reconocen
de forma especifica las moleculas de superficie de las celulas a estudiar)
conjugados con compuestos fluorescentes. La citometra de flujo permite medir
diferentes parmetros de una clula. stos se dividen en:

Parmetros nucleares
Parmetros citoplsmicos
Parmetros de superficie
Parmetros extracelulares
 La conjugacin de marcadores fluorescentes con anticuerpos monoclonales o
policlonales ha hecho posible los estudios de la densidad y la distribucin de
determinantes y receptores de la superficie y del citoplasma celular, permitiendo
identificar subpoblaciones celulares.

El objetivo del anlisis por inmunofluorescencia en citometra de flujo es asignar a

cada clula a un grupo especfico de clulas que compartan propiedades
comunes. El primer paso es identificar las clulas de inters. Por ejemplo, para el
anlisis de subpoblaciones linfocitarias se requiere seleccionar un rea de trabajo
distinguiendo los leucocitos por sus propiedades de dispersin de luz (tamao
contra complejidad celular). Una vez que las clulas de inters han sido
distinguidas de los otros tipos celulares, se puede usar la inmunofluorescencia
para determinar la proporcin o el nmero de clulas que poseen un determinado
marcador, por ejemplo, del marcador CD4 para monitorear el progreso de la
enfermedad por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)8 , entre muchas
otras aplicaciones clnicas.