AO DE LA CONSOLIDACION DEL MAR DE

GRAU

CITOGENTICA

ACIDOS NUCLEICOS
 OBJETIVOS DE APRENDIZAJE
Facilitar las definiciones conceptuales tericas del ADN,
Ncleo y Cromosomas
y su correspondiente nomenclatura.
Describir la composicin y la estructura del DNA
segn el modelo de Watson-Crick
(incluidos conceptos de direccionalidad y complementariedad).
Describir el proceso de empaquetado (packaging) del DNA.
Explicar como se consigue una replicacin del DNA con alta
fidelidad (de modo bidireccional y semiconservadora).
Describir la naturaleza y los mecanismos que participan en la
reparacin de las lesiones del DNA.
ACIDOS NUCLEICOS CELULARES: 2 TIPOS
ACIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (DNA)
ACIDOS NUCLEICOS CELULARES: 2 TIPOS
cido Desoxirribonucleico (DNA)
cido Ribonucleico (RNA)

Aprox. 90% Ac. Nucleicos Intracelulares = RNA

El resto 10% = DNA
(Depositario de la Informacin Gentica Intracelular)

Estudiaremos la estructura del DNA, la manera como se

almacena en los cromosomas del ncleo y los mecanismos
que participan en su biosntesis y reparacin.
 ESTRUCTURA DEL DNA
DMERO ANTIPARALELO DE HEBRAS DE AC. NUCLEICO
Formado por NUCLETIDOS (Pentosa= Desoxirribosa)
Las cadenas estn polimerizadas a travs de un enlace:
FOSFODISTER (entre grupo 3-Hidroxilo y el grupo 5-Hidroxilo)

El DNA es una cadena lineal de Desoxirribosa - Fosfato

Con bases de Purinas y Pirimidinas unidas al carbono 1
de la subunidad de Desoxirribosa.

1953, James Watson y Francis Crick:

Utilizando fotografas de difraccin de rayos X del DNA
Propusieron una estructura para el DNA.
 ESTRUCTURA DEL DNA
MODELO DE DNA DE WATSON Y CRICK
DNA formado por 2 hebras, enrolladas una con otra
Formando una estructura helicoidal diestra
Con los pares de base en el centro unidas mediante enlaces de
hidrgeno y las cadenas de
desoxirribosilfosfato en la parte externa.
La orientacin de las hebras es: antiparalelas.
Los pares de bases son planos y estn orientados
perpendicularmente al eje de la hlice.
La GUANINA 3enlaces H con la CITOSINA
La ADENINA 2 enlaces de H con la TIMINA
ESTRUCTURA DE LOS PARES DE BASES
 FORMAS ALTERNATIVAS DE DNA
PUEDEN AYUDAR A REGULAR LA EXPRESIN GNICA
La mayor parte del DNA intracelular es la de tipo B.
Otras formas alternativas: A y Z.
DNA de la forma A
La humedad relativa es inferior al 75%, el DNA B experimenta una
transicin reversible a la forma A.
Los pares de bases de los nucletidos estn inclinados 20 en relacin
al eje helicoidal.
Existen regiones de polipurinas y polipirimidinas,
La hlice del DNA presenta unas propiedades diferentes.
DNA de la forma Z
Los pares de bases estn desplazados 180 respecto al enlace del azcar
Surge una forma de DNA en zigzag.
Debido a concentraciones inicas elevadas (metilacin del DNA)
ESTRUCTURA DE LA DOBLE HELICE
ESTRUCTURAS DE LAS DIFERENTES
FORMAS DE DNA
 LAS HEBRAS DE DNA SEPARADAS
PUEDEN REASOCIARSE
HIBRIDACION DE SOUTHERN
Las hebras se mantienen unidas gracias a fuerzas no covalentes
Es posible separarlas en hebras individuales (desnaturalizacin)
Se induce a menudo calentando la solucin; la disociacin es
reversible; y al enfriarse las interacciones entre las secuencias
de nucletidos complementarios vuelven a asociarse
(pares de bases originales)

Las regiones ricas en A:T (temperaturas mas bajas)

Las regiones ricas en C:G (temperaturas mas altas)
La desnaturalizacin puede ser inducida por enzimas o por
protenas de fijacin del DNA
 EL GENOMA HUMANO
Contiene 35 000 40 000 genes diferentes
Codifican protenas (se localizan en 23 pares de Cromosomas)
Secuencias de DNA exclusivas (en copias nicas)
Existen varios tipos de secuencias repetidas:
Secuencias escasamente repetidas (<10 copias por genoma)
Secuencias altamente repetidas (>10 copias por genoma)

DNA escasamente repetitivas:

Genes que codifican RNA de trasferencia, RNA ribosmico,
protenas histonas.
Otras no poseen alguna funcin conocida.
EL GENOMA HUMANO
 EL GENOMA HUMANO
La secuencia repetida mejor descrita:
secuencia Alu I
300 pares de bases; 300 000500 000 repet. (36% DNA Total)
DNA satlite
Formado por unos cmulos (clusters) de cortas secuencias de
DNA; casi idnticas, especficas de especie y repetidas una tras
otra ciento o miles de veces (cerca de los centrmeros)
DNA mitocondrial
Es pequeo, de forma circular y codifica pocas protenas.
22 RNAt, 2 RNAr y 13 protenas
(citocromo b, 3 sub-unidades de la citocromo-oxidasa,
1 de la subunidad de la ATPasa, 7 subunidades de la
NADH-deshidrogenasa).
 EL DNA SE HALLA COMPACTADO
EN LOS CROMOSOMAS
En los Eucariotas (DNA organizado en los cromosomas)
Cada cromosoma contiene: 48 y 240 millones Pb.
La forma B del DNA tiene un perfil de 3.4 por Pb.
Por lo tanto: Longitud de los cromosomas (1.6 8.2 cm)
En el Ncleo, el DNA se encuentra compactado (>8000 veces)
ENSAMBLAJE DEL CROMOSOMA
 CROMOSOMAS
En el cromosoma nativo
DNA forma un complejo (RNA + Protenas)
Se denomina CROMATINA (protenas Histonas)
Son una familia conservada de protenas que participan en el
empaquetado y plegado del DNA en el interior de la ncleo.

Clases de Histonas: H1, H2A, H2B, H3 y H4.

Poseen (>20%) aminocidos bsicos y con carga positiva
(LISINA y ARGININA)
Disminuir la repulsin electrosttica y permitir un empaquetado
ptimo y ms ajustado del DNA.
 CROMOSOMAS
NUCLEOSOMAS
Las Histonas se asocian y forman un complejo proteico:
2 mol. de H2A, H2B, H3 y H4 + 1 mol. de H1
Rodeado por unos 200 Pb. de DNA
(forman dos espirales alrededor del ncleo del nucleosoma)
H1 se asocia con la parte exterior para estabilizar el complejo.
Formando nucleosomas: aumenta la densidad de empaquetado.

Estas a su vez organizadas forman otras estructuras mas densas

FILAMENTOS DE CROMATINA DE 300 .
(Estructura solenoide que contiene 6 nucleosomas)
Estos se compactan en el cromosoma maduro
asociado al andamiaje nuclear
ENSAMBLAJE DEL CROMOSOMA
 CROMOSOMAS
TELMEROS
Los extremos de los cromosomas
estn formados por unas secuencias peculiares de DNA.
Consisten en tndem repetidos de oligonucletidos cortos.
Ricos en GUANINA y especficas de especie.

En el ser humano, la secuencia repetida es TTAGGG

Pueden contener hasta 1000 copias de esta secuencia

Durante la sntesis de los Telmeros

La enzima TELOMERASA aade al extremo 3'
Las repeticiones de hexanucletidos preformados.
CICLO CELULAR
 CICLO CELULAR
Fases de crecimiento y divisin de las clulas.
Controlado por protenas: cinasas dependientes de ciclina
FASE G1
Perodo de crecimiento celular; antes de la replicacin del DNA.
FASE S
Se sintetiza o replica el DNA.
FASE G2
Segunda fase de crecimiento; despus de la replicacin del DNA.
FASE M (Mitosis)
Periodo de divisin celular.
Despus, las clulas hijas vuelven a entrar en la fase G1
o una fase inactiva G0 (cesan el crecimiento y la replicacin)
CICLO CELULAR
CICLO CELULAR
 El DNA se replica por separacin
y copia de sus hebras
Para que las clulas se dividan
DNA debe duplicarse durante la fase S.
MECANISMO DE REPLICACIN
La separacin de las hebras seguidas de su copia
Las hebras paternas separadas sirven como molde
para la sntesis de las nuevas hebras hija.

Mtodo semiconservador de replicacin del DNA

(cada molcula de DNA hija contiene una hebra paterna
y otra obtenida por sntesis)
 REPLICACION
SEMICONSERVATIVA - DISCONTINUA
 Lugar de replicacin del DNA
ORIGEN DE REPLICACIN
Protena de fijacin del DNA (DnaA): 29 30 mol. se fijan a
secuencias de nucletidos repetidas en el interior del origen.
Induce el desenrrollamiento, que separa las hebras (regin rica en AT)
Protena hexamrica DnaB se fija a las hebras de DNA separadas.
Tiene actividad helicasa y cataliza el desenrrollamiento de la hlice.
Participa la DNA-girasa.
El desenrrollamiento se da en ambas direcciones (a partir del OR),
las hebras son revestidas por protenas de fijacin
del DNA monohebra (impedir su reasociacin).
Objetivo: Separacin suficiente de las hebras
Se aade otra protena: DNA primasa
Formacin de un complejo de primosoma
HORQUILLA DE REPLICACIN
Lugar de replicacin del DNA
 Lugar de replicacin del DNA
HORQUILLA DE REPLICACIN
El primosoma sintetiza oligonucletidos de DNA complementarios a
cada hebra de DNA paterno.
Actan como cebadores (primers) de la sntesis de DNA.
Una vez sintetizado cada cebador de RNA
Se ensamblan 2 complejos de DNApolimerasa III (donde actu el primers)
Debido: Actividad sinttica unidireccional de la polimerasa +
Carcter antiparalelo de las dos hebras
= La sntesis del DNA en ambas hebras es distinta.
Las dos hebras hijas que se estn sintetizando se denominan:
Hebra Conductora (leading strand)
Hebra Rezagada (lagging strand)
Lugar de replicacin del DNA
REPLICACIN DEL DNA
REPLICACIN DEL DNA
 Lugar de replicacin del DNA
En la hebra conductora:
Sntesis de DNA en direccin 5'-3'
Se obtiene una hebra contina y larga.
En la hebra rezagada:
La DNApolimerasa III no puede sintetizar
(slo aade nucletidos en el extremo 3')
Es sintetizada en fragmentos pequeos (1000-5000 Pb)
Fragmentos de OKAZAKI
El primosoma permanece asociada con la hebra rezagada
Cuando el extremo 3' del FO se prolonga, alcanza el extremo
5' del FO sintetizado previamente.
Los fragmentos son unidos por una DNApolimerasa I
Esta sustituye el cebador por DNA.
Finalmente, una DNAligasa une los fragmentos,
para formar una hebra continua.
 Los eucariotas regulan rigurosamente
la replicacin del DNA
La sntesis del DNA es muy similar a la de los procariotas.
Los Eucariotas tiene ms orgenes de replicacin
Se activan simultneamente durante la fase S.
Permite la rpida replicacin de todo el cromosoma.
FACTOR DE LICENCIA:
Despus de la replicacin, este factor es inactivado (o destruido)
Se impide una posterior replicacin (DNA no se acumule en exceso)

ORC: complejo de reconocimiento del origen

Punto de anclaje de otros componentes que regulan la replicacin.
CDC6/18, CDT1- facilitan la fijacin de MCM2, MCM3 y MCM5
El ORC recibe la licencia para entrar en la fase S.
La sntesis del DNA es iniciada por la cinasa CDC7
 Las clulas son capaces de reparar
el DNA lesionado
DNA es el reservorio intracelular de la informacin gnica.
Importante: mantener su integridad.
La clula ha desarrollado: Mecanismos eficientes para reparar el DNA
modificado y/o lesionado.
NATURALEZA DE LA LESION
DNA sometido a agresiones: endgenas y ambientales
(deleciones, inserciones, inversiones , transposiciones)
Modificaciones qumicas: Agentes alquitranes (carcingenos)
Oxgeno reactivo y radiaciones ionizantes (UV-Radiactivas)
Modificacin de bases aisladas
Rotura de una o dos hebras
Entrecruzamientos (cross-linking)
Cambios permanentes en la estructura del DNA.
Favorecen: prdida de funciones, muerte celular o cncer.
NATURALEZA DE LA LESION DEL DNA
 Por sustitucin de bases
MOLECULAR
Por inserciones o deleciones de bases
M
U Inversiones
T
A
CROMOSOMICA Deleciones o duplicaciones
C
I
Translocaciones
O
N
Poliploida

GENOMICA
Aneuploida
 Las clulas son capaces de reparar
el DNA lesionado
REPARACIN POR ESCISIN (REN)
Modificaciones especficas de los nucletidos
CAUSAN: Desacoplamientos (mismatches)
durante sntesis del DNA
La hebra hija resultante contiene una secuencia
distinta (mutacin) a la hebra paterna.
Una ENDONUCLEASA escinde y se extrae
una pequea porcin de la hebra.
DNApolimerasa I reconoce y llena el hueco (gap) resultante.
DNAligasa finaliza la reparacin y vuelve a juntar
las hebras del DNA.
REPARACION POR ESCISION
DE NUCLEOTIDOS O HEBRA
REPARACION POR ESCISION
DE NUCLEOTIDOS O HEBRA
Mecanismo de reparacin de cromosomas fragmentados.
Reparacin mediante recombinacin