DNA. REPLICACION.

REGULACION
Dr. Jorge Huamn Saavedra
Doctor en Medicina Magister en Bioqumica.
2017
 Cuestionario
1. Cules son las caractersticas de le replicacin del
DNA?
2. Caractersticas especiales de la replicacin en
eucariotes
3. Qu son los fragmentos de Okasaki?
4. Cules son las protenas que participan en la
replicacin?
5. Qu es el RNA cebador ?
6. Cules son los principales tipos de dao del DNA
7. Qu son las ciclinas y cul es su funcin?
DNA
Estructura del DNA: Cuatro
desoxinucleotidos
DNA
 Organizacin del DNA: Cromatina y
nucleosomas
Cromatina: es el material cromosmico en los
ncleos .Consta de molculas de DNA de doble
cadena , protenas histonas y no histonas .RNA
en pequea cantidad
Organizada en nucleosomas: partculas densas
formadas por DNA enrollado en ncleo de
histonas
Histonas: protenas bsicas. H1, H2A, H2B, H3 y
H4. Octmero: H2A, H2B, H3 y H4. H1 : ajuste
Cromatina y nucleosomas
 Compactacin de la cromatina
Fibra de nucleosomas
Fibra de 39 nm
Asas no condensadas de 300nm
Asas condensadas de 700 nm
Cromosomas
 Genoma
Haploide humano: 3x109 pb
Nucleosomas: 1.7x107
23 cromtides con promedio de 1.3x10 8 nucletidos en una
molcula bicatenaria
Cada molcula se comprime 8000 veces para formar un cromosoma
condensado
Ms del 50 % del DNA en los organismo eucariticos est en
secuencias nicas o no repetitivas
En el DNA de seres humanos, al menos 30 % del genoma consta de
secuencias repetitivas
Secuencias de microsatlite
1 % DNA mitocondrial
 Replicacin en eucariotes
Pasos
1. Identificacin de los orgenes de replicacin
2. Desenrollado (desnaturalizacin del dsDNA para
proporcionar un molde de ssDNA)
3. Formacin de la horquilla de replicacin: sntesis de
RNA iniciador
4. Inicio de la sntesis y alargamiento de DNA
5. Formacin de burbujas de replicacin con ligadura de
los segmentos recin sintetizados
6. Reconstitucin de la estructura de la cromatina
 Clase de protenas comprendidas en la
replicacin
protena Funcin

DNA polimerasa Polimerizacin de desoxinucletidos

Helicasas Desenrollamiento progresivo de DNA

Topoisomerasas Alivia el desarrollo de tensin que se

produce por desarrollo inducida por
helicasa
DNA primasa Inicia la sntesis de RNA iniciadores

Protena de unin de cadena sencilla Evita el retemplado prematuro del DNA

SSB (procariotes) RPA (eucariotes)
DNA ligasa Sella la muesca de cadena sencilla entre la
cadena naciente y fragmentos de Okasaki
en la cadena retrasada
 Origen de la replicacin
Ori: orgen de la replicacin
En ori hay asociacin de protenas de unin a dsDNA especficas para secuencia, con
una serie de secuencias de DNA repetidas directas
E. coli: ori C es unido por protena dnaA. Complejo 150 a 250 bp de DNA y
multmeros de protenas de unin a DNA
Levaduras: secuencias de replicacin autnoma (ARS) o replicadores, contiene
elemento de replicacin de orgen (ORE) que unido a protenas forma el complejo
de reconocimiento de orgen (ORC) .Existen homlogos a ORC en los eucariotes.
Elemento de desenrollado de DNA (DUE): regin rica en A-T prxima a 80 bp de
ORE. Es el orgen de la replicacin en levaduras y es unido por el complejo de
protenas MCM
En clulas de mamfero o existe consenso en secuencias similares a ori o ARS, aunque
se han descrito varias protenas que participan en el reconocimiento y la funcin de
ori, similares a las de levaduras
 Desenrollado del DNA
La interaccin de protenas con ori define el sitio de inicio
de la replicacin y proporciona una regin corta de ssDNA
esencial para el inicio de la sntesis de la cadena de DNA
naciente.
DNA helicasa. En E.coli no infectada dnaB helicasa y
protena dnaC estabilizadas con SSB(protenas de unin a
ssDNA).
En E.coli infectada por fago lambda: inhibicin por P que
se une y forma complejo P/dnaB/O.Las protenas de
choque (dnaK, dnaJ y GrpE) la eliminan y activan a la
helicasa
Formacin de la horquilla de replicacin
4 componentes que se forman en secuencia:
1) DNA helicasa 2) primasa: inicia la sntesis de RNA primer o cebador
3)DNA polimerasa que inicia la sntesis de la cadena hija naciente 4) las
SSB se unen al ssDNA y evitan el realineamiento precoz
En E.coli: Polimerasa III (gen dnaE )consta de varias factores(, , , y )
Helicasa asociada a primasa: primosoma. Sntesis de RNA cebador
Sntesis de DNA es continua en la cadena lder (gua o conductora)y
discontinua en la cadena retrasada, sintetizando fragmentos cortos de
DNA llamados fragmentos de Okasaki (100 a 250 nt en eucariotes y 1000
a 2000 bp en procariotes).
 DNA polimerasas en E.coli
I: Llenado de brechas despus de replicacin,
reparacin y recombinacin de DNA
II: lectura de pruebas y reparacin de DNA
III: Sintesis de cadena adelantada
Dna G: primasa
 Replicacin del DNA en eucariotes
En fase S del ciclo celular. Regulacin por ciclinas
Nucleosomas
RPA: protena de unin al ss DNA semejante a SSB de E.coli
RFC: factor de replicacin C, facilita el ensamblaje de complejos de replicacin activos
DNA polimerasas:
:reparacin del DNA
: mitocondrial)
: sntesis de cadena adelantada (Lehninger: reparacin)
: primasa o sintesis de RNA primer
: sntesis de cadena retrasada.Asociada a antigeno nuclear de proliferacin celular
(PCNA) que favorece su actividad
Direccin 5 a 3
Sntesis de DNA es ms lento que procariotes por la interferencia de los nucleosomas
Inicio y alargamiento de la sntesis de DNA

El inicio de la sntesis de DNA requiere preparacin por

un tramo corto de RNA de alrededor de 100 a 200
nucletidos de largo(RNA cebador) que es sintetizado
por primasa
dnaG : E.coli
DNA Pol : eucariotes
Fragmentos de Okasaki: DNA ms RNA cebador
Eliminacin de RNA cebador: RNAasa.
Eucariotes:Complejo de replicacin elimina , llena los
espacios con DNA y sella la Ligasa
 Formacin de burbujas de replicacin
En procariotes: replicacin en 30 min
En eucariotes:
9h
Mltiples burbujas de replicacin(hasta 100 en el hombre)
Bidireccional (de izquierda a derecha y de derecha a izquierda)
Regulado. Sincrnico
Desenrollado adicional: E .coli DNA hexamrico. Eucariotes:
Complejo hexamrico MCM
DNA Topoisomerasas: corte y pega para romper la tensin de
las cadenas de DNA. Tambin del superenrrolamiento
 Reconstitucin de la estructura de la
cromatina
El DNA recin replicado se ensambla con
rapidez hacia nucleosomas, los octmeros de
histonas preexistentes y los nuevos se
distribuyen al azar
Participan chaperonas de histon
 Replicacin y ciclo celular. Regulacin.
Ciclinas
Fases del ciclo celular: G1, S, G2 y M
G1: se preparan para la sntesis de DNA
S. sntesis de DNA
G2: preparacin para la mitosis
M: mitosis
 Ciclinas
Las ciclinas : protenas que regulan la transicin de una fase del ciclo a la
otra.
Activan cinasas dependientes: CDK que producen fosforilaciones especficas
Ciclina D: aumenta al final de G1, activan CDK4 y CDK6, y se ensamblan como
un complejo, una proteina cinasa serina-treonina activa.
Este complejo acta sobre Rb o la protena del retinoblastoma que es un
regulador del ciclo celular porque se une y desactiva al factor de transcripcin
E2F necesarios para la sntesis de histonas y protenas de replicacin del DNA.
La fosforilacin de RB libera la represin y sigue el ciclo.
Ciclinas E y CDK2 forman un complejo al final de G1, se degrada E y CDK2 se
une a Ciclina A y este complejo es necesario para el inicio de la sntesis de
DNA en fase temprana
Ciclina B con cinasa CDK1 son limitante para el paso de G2 hacia M
 Tipo de dao del DNA
I. Alteracin de base nica.
Despurinizacin
Desaminacion de C a U
Dezaminacin de A a H
Alquilacin
Insercin o delecin
Incorporacin de anlogo de base
II. Alteracin de dos bases:
Dimero de T-T (uv)
Entrecruzamiento por agente alquilante bifuncional
III. Roturas de cadenas:
Rad. Ionizante
Desintegracin radioactiva
Formacin de radical libre oxidante
IV. Entrecruzamiento
Entre bases en la misma cadena o en cadena opuesta
Entre DNA y molculas de protenas (histonas?
 Reparacin del DNA
Enzimas
Reparacin de errores de mal apareamiento
Reparacin por escisin de bases
Reparacin por escisin de nucletidos
Reparacin de rotura de dible cadena
 Monitoreo de la integridad del DNA y de la
cromatina
Al principio del ciclo celular
Supresor tumoral p53 desempea funcin
clave en puntos de control de G1 y G2, es un
factor de transcripcin de unin a DNA.
Cuando hay dao p53 activa la sntesis de p21
que inhibe a CDK-1 y se retrasa el ciclo. Puede
ir a la apoptosis. Mutacin de p53: cancer,
coln por ejemplo
 Dogma de Gentica Molecular
DNA RNA protenas (Watson y Crick)
DNA: informacin gentica. Sntesis:
replicacin en la fase S del Ciclo
RNA: recibe por transcripcin la informacin.
hnRNA ---mRNA
Sntesis de Proteinas: traduccin de la
informacin que lleva el mRNA, participa tRNA
y los ribosomas (con rRNA)