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AGUSTIN
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y
AGROPECUARIAS
CURSO DE MICROBIOLOGIA
AREQUIPA - PERU
2010
CURSO DE
MICROBIOLOGIA
CAPITULO CUARTO
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD
ANTIMICROBIANA
Blgo. Ren Efran Campana Quispe
Ministerio de Salud
E. mail: reneefrain@yahoo.es
EVOLUCION DE LA RESISTENCIA BACTERIANA
Penicillina Methicillina
Penicillin-resistant Methicillin-resistant
S. aureus S. aureus S. aureus (MRSA)
1950s 1970s nosocomial
Vancomicin
MRSA comunidad
1997 1990s
2002
Vancomicin Vancomicin- Vancomicin-resistant
-resistant intermediate enterococco (VRE)
S. aureus (VRSA) S. aureus (VISA)
Cientfico ingls,
descubre, en forma
accidental, la
penicilina
Producida por el
Penicillium notatum
Antecedentes
A partir de 1929, Fleming descubri la penicilina,
poca de los antibiticos
Se produjo incremento de forma exponencial en
la creacin de nuevas clases de estos agentes,
especialmente en pases desarrollados.
En los aos recientes la produccin de nuevos
antibiticos ha disminuido de forma considerable
y ha surgido como un problema de consecuencias
impredecibles la resistencia bacteriana.
ESTRUCTURA BACTERIANA
Bacteria Gram-Negativa, tipica
- Pared y la membrana celular.
- El interior de la clula contiene DNA cromosomal y
- un numero de ribosomas constituido de protenas
y RNA. Los ribosomas estan comprendidos por
subunidades.
ESTRUCTURA BACTERIANA
ESTRUCTURA DE LA PARED DE UNA BACTERIA GRAMNEGATIVA
ACCIN DE AGENTES ANTIMICROBIANOS
PBP
Mecanismos de Resistencia
Antimicrobiana
1. Produccin de enzimas que destruyen al
agente antimicrobiano.
2. Impermeabilidad a la pared celular.
3. Sitio de unin modificado.
4. Bomba de eflujo.
5. Vas metablicas modificadas.
Cefalosporina
Mecanismos de Resistencia
Antimicrobiana
BETALACTAMASA EN GRAM
NEGATIVOS
Betalactamicas entran en la
bacteria a travs del canal de
las porinas encontrndose
con las betalactamasas en el
espacio periplasmico.
Las betalactamasas destruyen
las molculas betalactamicas
PBP antes que ellos alcancen su
PBP objetivo
Bacteria es resistente a la
accin de los betalactamicos
Mecanismos de Resistencia
Antimicrobiana
BETALACTAMASA EN
GRAMPOSITIVOS
En bacterias
grampositivas la
produccion de
betalactamasas son
excretadas
extracelularmente.
Los betalactamicos
son inactivados
fuera de la bacteria
Mecanismos de Resistencia
Antimicrobiana
MODIFICACION DE PORINAS
EN GRAMNEGATIVOS
Resistencia a betalactamicos
por barrera a la
permeabilidad
Alteracin del canal de la
porina no tan grande como
para permitir la entrada y
pasaje de las molculas de
los antimicrobianos dentro
de la bacteria
Recordar que los
betalactamicos necesitan
alcanzar la PBP en el interior
de la membrana para ejercer
su accin.
Mecanismos de Resistencia Antimicrobiana
Resistencia adquirida por conjugacin
La bacteria resistente a la
Ciprofloxacina encuentra otra
bacteria gramnegativa con
un plasmido que codifica un
gen de resistencia a
Ampicilina
Al estar bastante cerca, una
estructura pilus se forma.
Una copia del plasmido es
transferido.
El resultado es una bacteria
que es ciprofloxacino y
ampicilina resistente
SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA
METODOS BASICOS METODOS ESPECIALES
Capacidad Bactericida
Mtodos de difusin Concentracin CBM
Difusin en Agar (Kirby-Bauer) Curvas de letalidad o curvas de
Epsilon Test muerte
Actividad bactericida del suero
Mtodos de dilucin Actividad combinada de
Dilucin en agar antimicrobianos
Dilucin en caldo (concentracin
inhibitoria mnima CIM) Deteccin de mecanismos de
resistencia
Beta-Lactamasas
Resistencia en S. aureus (MRSA,
VISA)
Resistencia en Enterococcus ANRA
PRUEBA DE SENSIBILIDAD
ANTIMICROBIANA POR EL MTODO DE
DISCO DIFUSION
PRINCIPIO
La sensibilidad del
microorganismo estar indicada
por el tamao de la zona de
inhibicin del crecimiento
bacteriano
Factores que influyen en la susceptibilidad
antimicrobiana
Composicin del agar
Profundidad del agar
Densidad del inculo
Concentracin del antimicrobiano en el disco
Tiempo de aplicacin de los discos
Temperatura de incubacin
Tiempo de incubacin
pH del medio
Concentracin de Timina y Timidina
Concentracin de cationes divalentes (Ca y Mg)
Reactivos y medios
Preparacin
0.5 ml BaCl2 0.048 M (BaCL22H2O al 1.176% P/V)
99.5 ml H2SO4 0.18 M (0.36N)1% V/V
A= 0.08 0.1 (625 nm)
Conservation: En oscuridad y temperatura ambiente
Verificar la turvidez mensualmente
Preparacin del inculo
Mtodo directo
Mtodo del desarrollo
previo
Seleccin de colonias bien aisladas para
el inculo
Oxacilina Rifampicina.
Eritromicina Tetraciclina.
Clindamicina Teicoplanina
Vancomicina Nitrofurantona(1)
Ciprofloxacina Norfloxacina(1)
Cotrimoxazol
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina(1)
Levofloxacina(1)
Gentamicina Cefepime
Amikacina Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina Ofloxacina(1)
Zona afelpada
Zona con brotes
Como interpretar colonias dentro de las zonas
METODO DEL EPSILON TEST E-test
MIC
Mtodo de microdilucin en caldo
antibiticos
128
Concentracin 64
de antibitico
32
MIC (Ug/ml) 16
1
Mtodo de dilucin en agar
Tubo N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
2 3
4 5
Prueba de combinaciones antibiticas
Ensayo del tablero
Difusin en discos
Deteccin de mecanismos de resistencia
Deteccin de MRSA
Se utiliza un disco de
Oxacilina de 1 ug o
un disco de Cefoxitina
de 30 ug.
30 mm
IPM CAZ