Universidade Federal do Piau UFPI

Centro de Tecnologia Engenharia de Materiais

Biomateriais Professora: Dra. Carla Eiras

Carla Oliveira e Wanderson Bezerra

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Teresina, 2016
 SUMRIO

1. Introduo
2. Materiais e Mtodos
3. Resultados e Discusso
4. Concluso

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1. INTRODUO
Engenharia de Tecidos
Consiste na regenerao de rgos e tecidos vivos, atravs
do recrutamento de tecido do prprio paciente, que so
dissociados em clulas e cultivadas sobre suportes biolgicos
ou sintticos, conhecidos como scaffolds, para ento serem
reinseridos no paciente.

Figura 1.
Engenharia
de Tecidos
e scaffolds

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1. INTRODUO

No entanto, engenharia de tecido sseo base de scaffolds

ainda incapaz de superar alguns problemas de forma eficaz.
Integrao em tecido hospedeiro pobre e osso insuficiente no
interior de grandes defeitos sseos.
Devido s restries de homogeneidade clulas de
distribuio, migrao e troca de oxignio e nutrio no
interior da scaffolds.

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1. INTRODUO

de grande importncia projetar scaffolds inteligentes com a

capacidade para orientar e estimular a formao de novo
tecido sseo em ossos com defeitos graves.
Arquitetura macroporosa: superfcie, curvatura, forma e
tamanho de poro.
Os scaffolds foram preparados por secagem por congelao
em combinao de matriz de arame modelo.
Mtodo fcil de fabricar scaffolds com macro-poros projetados
atravs de impresso 3D, a fim de melhorar a regenerao
ssea.

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2. MATERIAIS E MTODOS
Impresso 3D de scaffolds de biocermica (HSP)
Processo sol-gel: tetra-etil ortossilicato ((C2H5O) 4Si), fosfato
de trietilo ((C2H5O) 3PO) e nitrato clcio tetra-hidrato (Ca
(NO3) 2 4H2O).
Tinta de impresso: p de biocermica foram misturados com
p de alginato e de Pluronic F-127 , em seguida soluo
aquosa agitadas at formar uma pasta homognea.
Scaffolds foram fabricados pela impresso das pastas
preparadas atravs da concepo de uma concha de bocal.
O sistema de impresso 3D foi desenvolvido pelo Fraunhofer
IWS (Dresden, Alemanha) com base no dispositivo Nano-
Plotter de GESIM (Groerkmannsdorf, Alemanha) e introduziu
no mercado como uma "impressora bio-scaffold.

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2. MATERIAIS E MTODOS

Os scaffolds foram impressos atravs de bicos de sinal, vrios tamanhos

dos bicos foram concebidos e preparados para este estudo. Depois de
impressos os scaffolds foram secos durante a noite sob temperatura
ambiente e, em seguida, sinterizados a 1400 C durante trs horas.

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2. MATERIAIS E MTODOS

Caracterizao dos scaffolds:

A morfologia dos macroporos e canal oco dos scaffolds
sinterizados foram observado por microscopia ptica (S6D,
Leica, Alemanha).
Os macroporos e microestrutura das paredes dos poros foram
caracterizados por microscopia eletrnica de varredura (MEV)
(JSM-6700F, JEOL, Japo).
A porosidade foi medida de acordo com um mtodo lquido de
deslocamento.

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2. MATERIAIS E MTODOS
Clculo da porosidade:

Os scaffolds foram Os suportes foram imersos em Finalmente, os

secos a 100 C gua e colocado sob vcuo at scaffolds foram
durante a noite e que no haja bolhas apareceu. O imersos em gua e
pesados, e peso dos andaimes com cheio de o flutuante peso foi
marcado como M1. gua poros foi marcado como M2. marcado como M3

A porosidade (P) foi calculado usando a equao:

P = (M2 -M1) / (M2-M3) 100%.

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2. MATERIAIS E MTODOS
Ensaios mecnicos:
A resistncia compresso e o mdulo de young foram testados
utilizando uma mquina universal de ensaios controlados por
computador (AG-I, da Shimadzu, Japo), cinco amostras foram
testadas para cada tipo de scaffolds.
Degradao in vitro:
Dois tipos de scaffolds, HSP e SSP, foram embebidos em soluo
de Tris-HCl tamponada (pH 7,40) num banho de gua com
agitao a 37C
A perda de peso foi calculada.
Para investigar liberao inica a partir dos scaffolds a soluo foi
coletadas a cada 7 dias. As concentraes de ons de Ca, P e Si
foram determinados por plasma indutivamente acoplado a
espectrometria de emisso atmica (ICP-AES) (Varian Co., EUA).

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2. MATERIAIS E MTODOS

Cultura das clulas in vitro:

BMSC humanas (obtidas a partir de Cambrex, Walkersville,
MD, EUA) foram semeadas com uma densidade inicial de 5
104. Os scaffolds foram cultivados numa incubadora a 37C e
5% de CO2, e o meio de cultura de clulas foi mudado duas
vezes por semana.
MTT foi dada aps 1, 3 e 7 dias de cultivo para anlise da
proliferao das clulas em estruturas de suporte

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2. MATERIAIS E MTODOS
Avaliao in vivo:
Os scaffolds foram implantados em defeitos sseos de
coelhos adultos provenientes da Nova Zelndia, por cirurgia.
A profundidade dos defeitos foi de 10 mm, medido por um
paqumetro digital. Em seguida, um HSP e um andaime SSP
foram implantados no defeito dos membros posteriores direito
e esquerdo em um coelho, respectivamente.
As amostras complexas dos scaffolds (n = 4) foram coletadas
para anlise Micro-CT imediatamente. As imagens foram
obtidas por meio de um Siemens Inveon Micro PET / scanner
CT (Siemens Medical Solution, Alemanha).

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2. MATERIAIS E MTODOS

Tecido mineralizado foi distinguido do tecido no mineralizado

atravs de um procedimento limiar com um valor aproximao
1,20 g cm-3 (25% menor do que 1,6 g cm-3).
Apenas a regio no cilindro do defeito sseo meio foi medida.
Para anlise histolgica, todas as amostras foram fixadas com
paraformaldedo 4% para 2 semanas, e descalcificados em
10% de EDTA durante 3 semanas. As amostras foram
embebidas em parafina e cortados usando um micrtomo
para se obter 300 mm de espessura. As seces foram
coradas com Van Gieson (VG) colorao, e depois avaliadas
sob luz microscopia (Nikon, ECLIPSE E600).

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2. MATERIAIS E MTODOS
Para anlise histolgica, todas as amostras foram fixadas com
paraformaldedo a 4% para 2 semanas, e descalcificados em
10% de EDTA durante 3 semanas.
Em seguida, as amostras foram embebidas em parafina e
cortados usando um micrtomo para se obter 300 mm de
espessura.
Em seguida, o seces foram coradas com Van Gieson (VG)
colorao, e depois avaliadas sob luz microscopia (Nikon,
ECLIPSE E600).
A anlise estatstica
Todos os dados esto expressos em mdia desvio padro
(SD) e foram analisados por meio de one-way ANOVA com p
<0,05.

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3. RESULTADOS E DISCUSSO
Fabricao e caracterizao de scaffolds biocermica HSP :
Dois fatores: preparar a pasta biocermica imprimvel
(bioprinting tinta) e o outra a concepo do bocal de
impresso co-eixo (core-shell).

A anlise de DRx mostrou que

alginato e Pluronic F-127, como
soluo de tinta biocermico, no
tm nenhum efeito sobre a
composio da fase de cristal final
do scaffolds HSP e que ainda
mantm a fase cermica pura.

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3. RESULTADOS E DISCUSSO
O tamanho e geometrias das escoras e ocos, pode ser
controlada por bico de co-eixo. Ao utilizar diferentes tamanhos
de bocal co-eixo, o tamanho da cavidade dos suportes,
incluindo o tamanho externo, tamanho interno (canal oco) e a
espessura de escoras, pode ser bem controlada.

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3. RESULTADOS E DISCUSSO
Outros suportes cermicos HSP podem tambm ser
preparados usando este mtodo, indicando que a estratgia
para a tinta cermica modificado e o projeto de co-eixo bocal,
um mtodo eficaz para a construo de scaffolds 3D-
impresso HSP de cermica no s para aplicao biomdica,
mas para engenharia mecnica e catlise aplicao.
Os scaffolds HSP impressos pelo bocal co-eixo com padro
de 20G / 27G (bico de shell / core padro) apresentaram
porosidade elevada at 86% e elevada rea de superfcie
especfica acima de 6500 mm2 / g, enquanto os andaimes
SSP impressos com poros macro semelhante por bocal com
padro de 20G tiveram apenas 57% de porosidade e 2800
mm2 / g de rea de superfcie especfica.

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3. RESULTADOS E DISCUSSO

Alm disso, a porosidade de scaffolds HSP pode ser bem

controlada 65-85% ajustando o tamanho de ncleo /
revestimento dos bocais de impresso.

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3. RESULTADOS E DISCUSSO
A resistncia compresso e mdulo de andaimes HSP so
4-6 vezes daqueles de scaffolds preparado pelo mtodo de
modelo de espuma.
A resistncia compresso de scaffolds HSP so
comparveis com os de 3D impresso e scaffolds monetita com
menor porosidade.

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3. RESULTADOS E DISCUSSO

Os resultados sugerem que scaffolds de biocermica HSP

tm significativamente resistncia mecnica superior, em
comparao com suportes polimricos anteriormente
utilizados.
Sabe-se que a resistncia compresso do osso esponjoso
sobre 2-12MPa. A resistncia compresso de scaffolds
HSP comparvel com a do osso tabecular, o que sugere que a
fora de scaffolds HSP suficiente para a aplicao de
rolamentos de regenerao ssea.

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3. RESULTADOS E DISCUSSO
Adeso e proliferao de clulas em scaffolds impressos
Estudos anteriores confirmaram que os scaffolds
bioceramicos preparados em p, disco e 3D no tinha
citotoxicidade evidente e apresentou boa compatibilidade com
clulas do estroma da medula ssea.
Em comparao com esses scaffolds sem estruturas ocas,
uma das vantagens significativas para as preparaes de
HSP que a sua elevada porosidade e rea de superfcie
melhorado a migrao de clulas estaminais da medula ssea
(bmsc), no interior de scaffolds.
Scaffolds de engenharia de tecidos com alta porosidade e
rea de superfcie foram as preferidas para a adeso celular,
migrao e intercmbio de gs e nutrio, bem como
regenerao.
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3. RESULTADOS E DISCUSSO

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3. RESULTADOS E DISCUSSO

Foram semeadas BMSC atravs do corte vertical de HSP com

tamanho diferente suporte, SSP foram usadas para os
controles.
Os scaffolds aderem a BMSC na superfcie exterior das
hastes ocas, mas tambm na superfcie interna das hastes
ocas.
Em comparao SSP com o mesmo tamanho de macroporos,
HSP tinha melhorado a ligao de clulas significativa no dia
3 e a proliferao no dia 7.

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3. RESULTADOS E DISCUSSO

HSP tm capacidade de formao de osso in vivo superior.

Portanto, neste estudo, o impresso (Standard bico: 16/22)
HSP com tamanho de 8 x 10 mm (Figura 7a) foram
escolhidos para implante no defeito do fmur de coelhos
(Figura 7b) para investigar a nova habilidade formao ssea
in vivo.
A anlise mostrou que os andaimes HSP bem integrado com
o tecido sseo de acolhimento, e novo tecido sseo comeou
a crescer no andaime poroso, enquanto no se limitou novo
crescimento do tecido sseo para o SSP porosa.

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3. RESULTADOS E DISCUSSO

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3. RESULTADOS E DISCUSSO
Novos tecidos sseos no apenas formado nos macroporos,
mas tambm cresceu para dentro dos canais ocos de HSP.
Grande quantidade de tecido sseo recm-formado no centro
de HSP, enquanto quase nenhuma em SSP.

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3. RESULTADOS E DISCUSSO

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3. RESULTADOS E DISCUSSO

A melhoria da regenerao ssea de pode ser diretamente

relacionado com a liberao rpida de ons de Si.
A degradao de HSP pode oferecer muito mais espao para
crescimento de novos tecidos.
HSP impressas neste trabalho podem recrutar clulas de todo
em torno dos tecidos do hospedeiro e fornecer oxignio e
nutrio de diferentes direes de andaimes, que podem
beneficiar do melhoramento da formao ssea.

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4. CONCLUSO
Nesse trabalho foi apresentado um mtodo til e fcil para a
preparao de scaffolds de biocermica HSP com macroporos
projetados e canais de multi-orientados ocos atravs de uma
estratgia de impresso em 3D coaxial modificado.
Os HSP preparados apresentaram alta porosidade e rea de
superfcie com resistncia mecnica impressionante
Estruturas ocas para escoras de scaffolds de biocermica
melhorou significativamente a adeso e proliferao celular.
A formao de osso no centro de scaffolds, indicou que a HSP
podem ser utilizadas para reserva de grandes defeitos sseos.
Alm disso, a estratgia pode ser utilizada para preparar outros
HSP, indicando potencial de aplicao para a engenharia de
tecidos, engenharia mecnica, catlise e materiais.

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Obrigado

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