Facultad de Ciencias Naturales

Cianobacterias: gentica y
biotecnologa

Dreacy Galvan Nio

Carlos Mario Zenteno
Ricrdez
Transferenci
a de
material
gentico
Mecanismos de recombinacin gentica
Alteracin gentica de una clula resultante de la absorcin directa, incorporacin y
expresin de material gentico exgeno (ADN exgeno).
El ADN exgeno se encuentra en el ambiente y se introduce a travs de la membrana de
la clula bacteriana.
La clave para el funcionamiento de los sistemas de transformacin en cualquier organismo es el
desarrollo de competencia celular para la instruccin de ADN.
Estado de competencia fisiolgico:
Al menos algunas clulas en una poblacin poseen una habilidad natural de incorporar ADN exgeno
sin ningn tratamiento especial anterior a la exposicin al ADN donado (clulas competentes
naturales).
El estado de transformacin artificial:
La introduccin del ADN por las clulas ocurre como resultado de un tratamiento que no es parte de
su ciclo de crecimiento normal.
Los factores que afectan la eficiencia de transformacin son:
Las concentraciones de ADN
La densidad celular
El estado fisiolgico de la clula receptora y de las condiciones durante la transformacin
Las frecuencias de transformacin son mayores si las clulas crecen primero en condiciones no
selectivas despus de la transformacin, para permitir la expresin fenotpica antes de aplicar
agentes selectivos.
Las bacterias son competentes durante todas las fases de crecimiento sin embargo, son
normalmente transformadas durante la fase de crecimiento exponencial media o tarda.
La carencia de sistemas de transferencia en cianobacterias ha sido el principal obstculo en el
desarrollo de sistemas de clonacin en cianobacterias filamentosas.

El ejemplo ms comn de competencia artificial es el tratamiento con cloruro de calcio como el

que se utiliza para E. coli.

Ejemplos de competencia artificial en cianobacterias incluyen la transformacin de complejos ADN-

ARN por el tratamiento con cloruro de calcio permitiendo que el ADN pueda ingresar a la clula.
Es el proceso de transferencia de material gentico entre una clula procariota (bacteria o arquea)
donadora y una receptora mediante el contacto directo o una conexin que las una.

Durante la conjugacin la clula donadora provee un elemento gnico mvil o conjugativo que
generalmente es un plsmido o un transposn.
El mtodo ms usado por cianobacterias es la conjugacin.
Se ha convertido en una herramienta verstil para la manipulacin gentica de cianobacterias
filamentosas.
sta tcnica se ha utilizado para diversos propsitos:
Obtener mutaciones en genes que han sido clonados por el reemplazamiento in vitro de una
copia de tipo silvestre con un gen mutado.
Para la complementacin de mutantes
Anlisis de promotores
Introduccin de transposones para mutagnesis.
Estos sistemas conjugativos son muy prometedores para el desarrollo de estudios de
gentica molecular en cianobacterias y sern de particular ayuda en el estudio de
procesos como:
La diferenciacin celular
La fijacin de nitrgeno
Los estudios de adaptacin cromtica que han sido encontrados en cianobacterias
unicelulares y filamentosas donde no se cuenta con otro sistema de transferencia de
genes.
Electroporacin
Forma artificial de transformacin de ADN exgeno. Se ha utilizado para la transformacin de
diversas bacterias.
Consiste en someter a las clulas a un campo elctrico de voltaje definido por un tiempo
determinado para permitir que el ADN exgeno sea incorporado a la clula.
La Electroporacin tiene algunas ventajas sobre la conjugacin:
Las clulas transformadas no son contaminadas por clulas de E. coli
Los vectores que carezcan del sitio bom pueden servir como donador
La Electroporacin slo requiere del ADN y del lavado de las clulas hospederas

Otras ventajas de la electroporacin que podran ser exploradas incluyen la habilidad de metilar el
ADN donador in vitro para producir plsmidos lineales para la transferencia y el uso de ADN
cromosomal.

Bruns et al. (1989) sugieren que la electroporacin puede ser ligeramente mutagnica.
Mutagnesis
La mutagnesises aquella modificacin del material gentico que resulta estable y transmisible a las
clulas hijas que surgen de la mitosis. De realizarse in vitro, dicha alteracin puede realizarse al azar
(mutagnesis al azar), sobre cualquier secuencia, o bien de forma dirigida (mutagnesis dirigida)
sobre una secuencia conocida y en la posicin de inters.
Las mutaciones permiten identificar genes no conocidos involucrados en un proceso particular
y determinar la funcin de genes conocidos.
Las metodologas fsicas clsicas para la generacin de mutantes incluyen el uso de mutgenos
qumicos como la N-metil-N-nitro-N-nitrosoguanidina y los metil sulfonatos. Estas tcnicas se han
aplicado con xito tanto a cianobacterias unicelulares como filamentosas. El tercer mtodo fsico es
la aplicacin de luz ultravioleta (UV).
Entre los mtodos biolgicos de mutagnesis destaca el uso de la mutagnesis insercional
para el estudio de una variedad de genes en cianobacterias. El otro mtodo biolgico consiste en
utilizar transposones y sus derivados.
La mutagnesis sitio dirigida es otra de las tcnicas importantes para realizar uno o ms cambios
en una secuencia nucleotdica y se ha utilizado principalmente en cianobacterias unicelulares para el
estudio de la fotosntesis.
Genes
reporteros
Los genes reporteros permiten la medicin de los niveles de transcripcin de un gen particular, ya
sea de una colonia particular o dentro de clulas particulares de un filamento, puede estudiarse la
expresin de muchos genes cianobacterianos que son regulados por factores ambientales.

La luciferasa se ha empleado como gen reportero para identificar mutantes inducidos por
transposones que responden a cambios del ambiente.

Existen tambin ciertas desventajas al emplear algunos de los sistemas reporteros.

El ruido de fondo causado por la fluorescencia natural de las clulas cianobacterianas limita la
sensibilidad de los anlisis con algunos de los genes reporteros.

La seleccin del gen reportero depender de las caractersticas particulares del experimento que se
lleve a cabo.
Genomas
cianobacteria
nos
Las secuencias genmicas permiten monitorear cambios globales en la expresin gentica a nivel
transcripcional y traduccional en respuesta a variaciones ambientales distintas.
El desarrollo de tcnicas como la electroforesis de campo pulsado, ha dado lugar a mapas fsicos para
muchos cromosomas bacterianos. Tales mapas permiten localizar genes en fragmentos de restriccin
grandes, lo que hace que los mapas genticos y fsicos sean una representacin precisa de los
cromosomas.
Las tcnicas para analizar la expresin de genes procariotas es ms complicado de aplicar que en
eucariotas debido a la ausencia de poliA del RNAm. Sin embargo, algunas tcnicas se han desarrollado
para resolver estos problemas.
Ahora solo se requiere la secuenciacin de un fragmento de protena producida en ciertas condiciones
ambientales especficas para poder identificar el gen que la produce.
El anlisis de la transcripcin en genes cianobacterianos ha tenido un incremento importante durante
la ltima dcada.