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BIOQUMICA CLNICA I

CINTICA ENZIMTICA

MODELO MICHAELIS-MENTEN
PARMETROS CINTICOS
INHIBICIONES
Cintica de enzimas

El estudio de una actividad enzimtica puede hacerse a travs


de modelos matemticos que permiten describir el
comportamiento de una reaccin, considerando parmetros de
concentracin de sustrato, de enzima y participacin de
moduladores (activadores o inhibidores).
Una reaccin enzimtica ms simple contempla la unin de la
enzima a su sustrato para formar un complejo enzima-sustrato:

k1 k3

k2

Cada etapa de la reaccin est gobernada por constantes


cinticas o constantes de velocidad: k1, k2, k3

Pueden ser enzimas con uno o ms sitios activos.


Michaelis y Menten describieron un modelo cintico que describe
una curva parablica de velocidad de reaccin, en relacin a la
concentracin de sustrato.

En este tipo de curva de reaccin, la enzima presenta una


primera componente que es proporcional a la concentracin de
sustrato (parte lineal de la curva V/[S]) y una segunda
componente que tiende hacia su Vmax, donde la velocidad se hace
independiente de la [S] (plateau de la curva)
CINTICA ENZIMTICA
Si representamos Vo (velocidad inicial) frente a [S]o ([S] inicial)
obtenemos una grfica como la siguiente:

Cuando [S]o es
pequea, la
velocidad inicial es
directamente
proporcional a la [S] y
por tanto, la
reaccin es de
v =orden.
primer k [S]

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CINTICA ENZIMTICA
A altas [S]o, la enzima se encuentra saturada por el sustrato, y
la velocidad ya no depende de [S].
En este punto, la reaccin es de orden cero y la velocidad de
la reaccin tiende a alcanzar un valor mximo y constante:
velocidad mxima (Vmx)

v = cte = Vmx

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CINTICA ENZIMTICA

A bajas [S] A altas [S]

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Ecuacin de Michaelis-Menten

uando la [S] es Km la velocidad de la reaccin es proporcional a la [S

Vmax Parte lineal de la curva


V0 = x [S]
Km

Cuando la [S] es >>> Km la velocidad de la reaccin se acerca a la Vmax:

V0 = Vmax Plateau de la curva


LA CONSTANTE DE MICHAELIS-MENTEN (KM)
ES UN PARMETRO CINTICO IMPORTANTE:
Si el valor de KM es grande, indica que el complejo
ES es inestable, pues predomina la tendencia a la
disociacin (poca afinidad hacia el sustrato),

Si el valor de KM es pequeo, significa que el


complejo ES es estable, ya que predomina la
tendencia a formarlo (gran afinidad hacia el
sustrato).
El valor de KM entrega una idea de la
afinidad del enzima por el sustrato

A menor KM, mayor afinidad de la enzima


por su sustrato.
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A mayor KM, menor afinidad.
VALORES DE KM PARA ALGUNAS
ENZIMAS CON SUS SUSTRATOS

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Ecuacin de Lineweaver-Burk

Grfico de dobles recprocos


GRAFICA DE LOS DOBLES RECPROCOS

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Grfico de dobles recprocos 1/V versus 1/[S]
No todas las enzimas cumplen con esta cintica michaeliana.
Existen otras cuya velocidad de reaccin describe una curva
sigmoidea que indica que:

La unin de una molcula de sustrato en un sitio activo influye en


la unin de otra molcula de sustrato en un segundo sitio activo
y as sucesivamente.
Para enzimas con unin de moduladores:
Una enzima con cintica sigmoidea puede pasar a cintica
michaeliana en presencia de activadores o acentuar su
comportamiento original en presencia de inhibidores.
Parmetros Cinticos Enzimticos
1. Km (constante de Michaelis-Menten para cada enzima) =
concentracin de S a la que la V es 1/2 Vmax. Es una medida de
la afinidad de la enzima por el S. Cuanto menor es K m, mayor
es la afinidad de la enzima por el S.
2. kcat (constante cataltica para cada enzima) = nmero de
recambio = nmero de molculas de sustrato convertidas en
producto por molcula de enzima y unidad de tiempo, en
condiciones de saturacin de sustrato.
3. Vmx = velocidad mxima terica = la velocidad mxima
terica que la enzima presenta cuando todos los centros
activos estn ocupados con sustrato (nunca alcanzada en la
realidad).
4. Unidad de enzima internacional (UI)= cantidad de enzima
que transforma 1 mol de sustrato por min = una forma comn
de expresar la velocidad.
5. Actividad especfica = unidades de enzima por mg de
protena total de la preparacin enzimtica. En el caso de
enzimas en suero: unidades/L = U/L. Unidad ms moderna: kat
Unidades enzimticas
Las cantidades deenzimapueden ser expresadas enmoles, como
las de cualquier otrocompuesto qumico, o pueden ser
cuantificadas en trminos deactividad enzimtica.

La actividad enzimtica es una medida de la cantidad de enzima


activa presente y del nivel de actividad de la misma, por lo que la
medida de la actividad es dependiente de las condiciones,que
deben ser especificadascuando se dan valores de actividad.

La actividad expresa la cantidad de sustrato convertido por


unidad de tiempo, teniendo en cuenta el volumen dereaccin.

En elSistema Internacional de Unidadesla unidad para la actividad


cataltica es elkatal(kat), pero es una unidad demasiado grande y
suele usarse launidad de actividad enzimtica(UI).

1 kat = 1molsustratoconvertido xs-1= 6 x 107UI


1 UI = 1molsustrato convertido xmin-1= 16,67 nkat
Actividad especfica
Otra unidad comnmente usada es laactividad especfica (AE).

sta se refiere a la actividad de una enzima pormiligramo(mg)


deprotena, y se suele expresar en:

mol / min
AE=
mg

La actividad especfica da una idea de la pureza de la enzima.


Inhibiciones de la actividad enzimtica
Existen dos grupos de inhibidores,
clasificados segn el tipo de interaccin
con la enzima:

INHIBIDORES ENZIMTICOS
REVERSIBLES
- Competitiva
- No competitiva
- Acompetitiva
- Mixta
Inhibicin
competitiva
El inhibidor se une al sitio activo de la enzima,
compitiendo con el sustrato e impidiendo su unin.
Estos inhibidores usualmente se asemejan al sustrato,
se combinan con la enzima y no ocurre catlisis.
Inhibicin competitiva

Ej: Tratamiento para intoxicacin con


metanol.

Por lo tanto, se afecta la Km de la enzima y la Vmax se mantiene.


Inhibicin Competitiva en un grfico de dobles recprocos.

Si se aumenta la
concentracin de
sustrato, el inhibidor
puede ser desplazado
del sitio activo.

Km aumenta
Vmax se mantiene
Inhibicin No Competitiva

El inhibidor se une a un sitio distinto al sitio


activo de la enzima, no impide la unin al sustrato y
slo se une al complejo ES
Inhibicin no
competitiva

El inhibidor se une a un sitio diferente al sitio activo


afectando la catlisis.
nhibicin no competitiva en un grfico de dobles recproc

KM se mantiene
Vmx disminuye
Inhibidores enzimticos
irreversibles
Estos inhibidores, se caracterizan por
formar enlaces covalentes fuertes
y estables con la enzima,
especficamente con un grupo
esencial para su actividad.

Otra opcin es que destruyan un


grupo esencial para realizar la
catlisis enzimtica.
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Inhibidores enzimticos
irreversibles
Los antibiticos -lactmicos se
anclan al sitio activo de las
enzimas transpeptidasas (PBPs).
Esta unin irreversible, impide el
paso final
(transpeptidacin) de la sntesis Penicilina
del peptidoglicano, evitando la
correcta formacin de la pared
celular bacteriana.

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MODIFICACIN COVALENTE IRREVERSIBLES
Ej: Organofosfricos
DIFP: diisopropil fluorofosfato
- Ejemplos: Insecticidas (Paration,
Malation), Gases de guerra
(Neurogases como Sarn y
Mostaza).

- Actan sobre enzimas sernicas


a residuos a esenciales para la
catlisis (serin proteasas,
acetilcolinesterasa, otros).

- Inhibidores de la enzima
Acetilcolinesterasa.

- Enzima se inactiva, pues es


modificada qumicamente.

- Tratamiento precoz!: antdoto: