Descalcificación y Desmineralización

DESCALCIFICACIN Y
DESMINERALIZACIN
CARTLAGO
Vinculacin Colgeno- GAGs
GAGs DE LA MEC AMORFA ESTN
UNIDOS A FIBRAS DE COLGENO
FORMANDO AS UNIONES
ESTABILIZANTES
AS MEC AMORFA RETIENE AGUA Y

METABOLITOS EN STA
HUESO
CANTIDA
NOMBRE D FUNCIN
Protenas
morfognica Homlogos de TGF-; estimulacin del desarrollo y
s del hueso Menor reparacin de Hueso y Cartlago
Colgeno
tipo I 90% Formacin de fibrillas en la matriz sea
Red de cido asprtico y unin de hidroxiapatita
acadenas laterales cido glutmico - carboxilado;
Osteocalcin promueve la calcificacin; atrae osteoclastos y
a 1-2% osteoblastos
Sintetizada en hueso en desarrollo y regeneracin; une
Osteonectin colgeno e hidroxiapatita; puede nuclear cristalizacin
a 2% de hidroxiapatita en la matriz sea
Osteopontin Secuencia RGD; une integrinas osteoclsticas a la
a Menor superficie sea
Proteoglican
os Menor Decorina, biglicano, osteoadherina, puede unir TGF-
Sialoproten Secuencia RGD; une integrinas osteoclsticas a la
as 2% superficie sea
Hueso
a. HUESO INMADURO
. NO MUESTRA UNA APARIENCIA

LAMINAR ORGANIZADA
. DISPOSICIN DE ENTRELAZADO
DE LAS FIBRAS DE COLGENO.
. CLULAS DISPUESTAS
ALEATORIAMENTE
b. CLULAS EN HUESO COMPACTO
MADURO ORGANIZADOS DE FORMA
CIRCULAR
REFLEJA ESTRUCTURA LAMINAR DEL

SISTEMA DE HAVERS.
CANALES DE RESORCIN EN HUESO

MADURO SE ALINEAN POR
OSTEOCLASTOS (EN EL CORTE DE LOS
CONOS)
EJES MAYORES ORIENTADOS EN LA MISMA

DIRECCIN QUE LOS CANALES DE
HAVERS,
c. HUESO ESPONJOSO MADURO
MALLA DE TRABCULAS
(ESPCULAS DELGADAS,
ANASTOMOSIS DEL TEJIDO SEO).
ESPACIOS CONTNUOS DENTRO DE

LA MALLA
EN UN HUESO VIVO, ESTN

OCUPADOS POR MDULA SEA.
MINERALIZACIN DEL HUESO
EVENTOS DE LA
MINERALIZACIN DE LA
MATRIZ OSTEOIDE PARA
FORMAR HUESO
OSTEOBLASTOS
CUBOIDEOS ACTIVOS
SECRETAN COLGENO
OSTEOIDE Y VESCULAS
DE MATRIZ
PASO 1: SOBRE LAS
VESCULAS DE MATRIZ SE
DEPOSITAN CRISTALES DE
HIDROXIAPATITA (FOSFATO
DE CALCIO HIDROXILADO)
PASO 2: SECRECIN
CONTNUA DE MINERAL
SOBRE ESTOS FOCOS
TEMPRANOS DERIVA EN LA
MINERALIZACIN DEL
COLGENO OSTEOIDE Y LA
MATRIZ SOPORTANTE DE
GLICOSAMINOGLICANOS
LAS VESCULAS SON RICAS
EN FOSFATASA ALCALINA Y
PIROFOSFATASA, QUE
PRODUCEN IONES FOSFATO
ESTOS IONES FOSFATO SE
ACUMULAN EN LAS
VESCULAS DE LA MATRIZ
CON IONES CALCIO Y
FORMAN MATERIAL
PRODUCTOR DE
HIDROXIAPATITA
Difisis y Epfisis
Brote Peristico
Manguito Peristico
Esponjosa Primitiva
Compacta Primitiva
Examination of bone marrow and
for the diagnosis of tumors,
infections or for other purposes
Degenerative processes such as

necrosis (dystrophic calcification)
or it may occur in the walls of
blood vessels or in kidney, lung or
elsewhere (metastatic
calcification)
Composicin structural del Diente
Esmalte: 95-98% inorgnica
1-2% orgnica
1-4% agua
Dentina: 70% inorgnica

20% orgnica
10% agua
Cemento: 45-50% inorgnica

50-55% orgnica y agua
LA HISTOTECNOLOGA DISPONE DE DIVERSAS TCNICAS POSTERIORES A LA FIJACIN PARA
MEJORAR LA MICROTOMA Y LA CALIDAD DE TINCIN.
CADA TCNICA DEBE SER ENSAYADA Y EVALUADA PARA PRESERVAR LA MORFOLOGA Y

PROPORCIONAR LA MEJOR CALIDAD TINTORIAL POSIBLE
DESCALCIFICACIN: PRIMER MTODO POST-FIJACIN, EN ORDEN CRONOLGICO DE LA

HISTOLOGA
APLICABLE A ESPECMENES QUE PUEDEN SER DIFCILES DE CORTAR EN UN MICROTOMO DEBIDO A
DEPSITOS DE CARBONATO DE CALCIO O FOSFATO.
SE PUEDE LOGRAR YA SEA POR CIDOS O POR AGENTES QUELANTES.
PRECAUCIN: ASEGURARSE DE QUE EL TEJIDO HA SIDO ADECUADAMENTE FIJADO Y BIEN

ENJUAGADO PARA EVITAR CUALQUIER REACCIN NO DESEADA CON EL AGENTE
DESCALCIFICANTE.
DESCALCIFICACIN: TCNICA PARA EXTRAER EL
MINERAL DEL HUESO U OTRO TEJIDO CALCIFICADO
PERMITE PREPARAR CORTES DE PARAFINA DE BUENA
CALIDAD QUE PRESERVEN TODOS LOS ELEMENTOS
MICROSCPICOS ESENCIALES.
SE LLEVA A CABO DESPUS DE QUE LA MUESTRA HA

SIDO COMPLETAMENTE FIJADA Y ANTES DEL
PROCESAMIENTO DE RUTINA A PARAFINA.
VARIAS OPCIONES DISPONIBLES CUANDO SE REQUIEREN CORTES DE
HUESO U OTRAS MUESTRAS CALCIFICADAS.
AL ELEGIR UNA TCNICA Y UN MTODO DE PROCESAMIENTO, DEBE

TENERSE EN CUENTA EL TIPO DE INVESTIGACIN QUE SE EST LLEVANDO
A CABO.
POR EJEMPLO, SI SE EST INVESTIGANDO UNA ENFERMEDAD SEA

METABLICA Y ES NECESARIO DIFERENCIAR EL HUESO MINERALIZADO DEL
OSTEOIDE, O SI SE REQUIEREN MEDIDAS MORFOMTRICAS, PUEDE SER
NECESARIO RETENER Y DEMOSTRAR EL CONTENIDO MINERAL
PRODUCIENDO SECCIONES DE HUESO "NO DESCALCIFICADO".
COMO EL HUESO MINERALIZADO ES UN MATERIAL TAN DURO HAY UNA GAMA LIMITADA
DE TCNICAS DISPONIBLES PARA PRODUCIR SECCIONES DE ELLA.
DESPUS DE LA FIJACIN SE PUEDE ASERRAR DIRECTAMENTE EN OBLEAS FINAS Y LUEGO

MOLER CON SUPERFICIES ABRASIVAS PARA PRODUCIR SECCIONES DELGADAS EN TIERRA
(VER FIGURA 1).
TAMBIN ES POSIBLE PREPARAR ESPECMENES SEOS INFILTRNDOLOS CON RESINAS

ACRLICAS O EPOXI QUE, CUANDO SE POLIMERIZAN, TIENEN UNA DUREZA EQUIVALENTE A
LA DEL HUESO MINERALIZADO.
A CONTINUACIN, PUEDE PRODUCIR SECCIONES DE TIERRA DE LOS ESPECMENES

INFILTRADOS O SECCIONARLOS DIRECTAMENTE USANDO UN MICROTOME RESISTENTE Y
UN CUCHILLO DE CARBURO DE TUNGSTENO O DIAMANTE (VEA LA FIGURA 2).
USO EFICAZ DE CIDOS MINERALES DILUIDOS (CLORHDRICO O
NTRICO) O CIDO FRMICO
REQUIERE ADECUADO CONTROL DEL PUNTO FINAL DE LA
DESCALCIFICACIN.
EXPOSICIN PROLONGADA A AGENTES DECALCIFICANTES

CIDOS
COMPROMISO DE DETALLES NUCLEARES Y CITOPLSMICOS
EXTRACCIN ARN Y ELIMINACIN DE BASES PRICAS Y
PIRIMIDNICAS DEL ADN.
ES IMPERATIVO LAVAR EL CIDO DEL TEJIDO

ELECCIN DEL DESCALCIFICADOR EN CASO DE :
PRESERVACIN DE EL ADN ES IMPORTANTE
MTODOS HISTOQUMICOS PARA CIDOS NUCLEICOS O
ACTIVIDADES ENZIMTICAS
PREFERIR AGENTE QUELANTE A UN CIDO

USUALMENTE SAL DISDICA DE EDTA, pH ENTRE 7 Y 8.
DECALCIFICACIN POR EDTA:

TOMA MUCHO MS TIEMPO QUE LA DESCALCIFICACIN POR
CIDOS
SEMANAS EN LUGAR DE DAS.
OTRA POSIBILIDAD ES LA PRESENCIA DE SECCIONES CONGELADAS DE HUESO
ESPONJOSO MINERALIZADO.
MUCHO MS COMNMENTE EL HUESO Y OTROS ESPECMENES CALCIFICADOS SON

DESCALCIFICADOS (DESMINERALIZADOS) DESPUS DE LA FIJACIN Y PROCESADOS
USANDO UN MTODO ESTNDAR PARA PRODUCIR SECCIONES DE PARAFINA.
LAS SECCIONES DESCALCIFICADAS SE UTILIZAN PARA EL EXAMEN DE LA MDULA

SEA Y PARA EL DIAGNSTICO DE TUMORES, INFECCIONES O PARA OTROS FINES.
LOS ESPECMENES PUEDEN ESTAR EN FORMA DE TRPANOS DE CRESTA ILACA O

TROZOS DE HUESO REMOVIDOS DURANTE EL FUNCIONAMIENTO (TALES COMO
CABEZAS FEMORALES) O DISECADOS A PARTIR DE MUESTRAS DE AMPUTACIN.
A MENUDO SE UTILIZAN RADIOGRAFAS DE DETALLE FINO PARA AYUDAR EN LA
SELECCIN DE ESPECMENES SEOS APROPIADOS PARA SU PROCESAMIENTO.
APARTE DEL HUESO, OTROS TEJIDOS PUEDEN SUFRIR CALCIFICACIN

ASOCIADA CON PROCESOS DEGENERATIVOS COMO NECROSIS (CALCIFICACIN
DISTRFICA) O PUEDE OCURRIR EN LAS PAREDES DE LOS VASOS SANGUNEOS
O EN LOS RIONES, PULMONES O EN OTRA PARTE (CALCIFICACIN
METASTSICA).
SI LAS REAS CALCIFICADAS EN LAS MUESTRAS DE TEJIDO SON SUSTANCIALES,

PUEDE SER IMPOSIBLE OBTENER SECCIONES DECENTES SIN PRIMERO
DESCALCIFICAR LA MUESTRA.
OTRA POSIBILIDAD CONSISTE EN APLICAR UNA "DESCALCIFICACIN
SUPERFICIAL" A UN BLOQUE DE PARAFINA PARA PERMITIR LA
OBTENCIN DE SECCIONES DONDE NO SE PREVEA LA PRESENCIA DE
CALCIO CUANDO SE PROCES LA MUESTRA.
EL PROCEDIMIENTO DE DESCALCIFICACIN ES RELATIVAMENTE

SENCILLO Y SE DISCUTE AMPLIAMENTE EN LOS TEXTOS ESTNDAR DE
LA TCNICA HISTOLGICA.
SIN EMBARGO, SI SE OBTIENEN RESULTADOS DE ALTA CALIDAD,

ALGUNOS PUNTOS SON DIGNOS DE NFASIS.
ESTRUCTURA SEA
EL HUESO SE COMPONE DE CLULAS (OSTEOCITOS) RODEADAS POR UNA
MATRIZ CALCIFICADA QUE CONTIENE FIBRAS DE COLGENO TIPO 1.
EN LA MATRIZ EL CALCIO EST EN FORMA DE CRISTALES DE

HIDROXIAPATITA [CA10 (PO4) 6 (OH) 2] QUE SE DEPOSITAN ENTRE LOS
ELEMENTOS FIBROSOS.
ESTOS CRISTALES SE DISUELVEN DURANTE EL PROCESO DE

DESCALCIFICACIN QUE, SI SE REALIZA CORRECTAMENTE, DEJA EL
TEJIDO COHESIVO CON LAS CARACTERSTICAS FSICAS DEL TEJIDO
CONECTIVO FIBROSO DENSO.
HAY DOS TIPOS DE HUESO MADURO.
EL HUESO CORTICAL O COMPACTO FORMA LOS EJES DE LOS HUESOS LARGOS Y LAS PARTES
PRINCIPALES DE LOS HUESOS PLANOS DEL CRNEO Y TIENE UNA ESTRUCTURA MUY DENSA BASADA
EN UNA DISPOSICIN DE ESTRUCTURAS CILNDRICAS LLAMADAS OSTEONES (FIGURA 3).
EL HUESO ESPONJOSO, TRABECULAR O ESPONJOSO TIENE UN ARREGLO MUCHO MS DELICADO QUE

CONSISTE EN PARTICIONES FINAS (TRABCULAS) QUE CONECTAN PLACAS SEAS ENTRE LAS QUE SE
ENCUENTRA LA MDULA SEA.
SE LOCALIZA EN LA VRTEBRA Y EN LA EPFISIS DE LOS HUESOS LARGOS (FIGURA 4).
TANTO EL HUESO COMPACTO COMO EL HUESO ESPONJOSO SE DESARROLLAN EN CAPAS O LMINAS

EN LAS QUE LAS FIBRAS DE COLGENO ESTN ESTRUCTURALMENTE ORIENTADAS Y MUESTRAN UN
CUADRO CARACTERSTICO BAJO MICROSCOPA DE LUZ POLARIZADA (VER FIGURA 5).
ES IMPORTANTE CONSIDERAR CUIDADOSAMENTE LA NATURALEZA DE CUALQUIER
ESPCIMEN SEO RECIBIDO PARA PROCESAMIENTO DEBIDO A QUE LAS
CANTIDADES RELATIVAS DE HUESO CORTICAL Y ESPONJOSO SON IMPORTANTES Y
DETERMINARN EL TIEMPO REQUERIDO PARA LA DESCALCIFICACIN Y EL
PROCESAMIENTO.
POR EJEMPLO, LA MUESTRA DE TRPANO DE LA CRESTA ILACA CONSISTE EN UN

BORDE DE HUESO CORTICAL QUE RECUBRE UN CILINDRO DE HUESO ESPONJOSO.
EL HUESO CORTICAL SER EL LTIMO EN RENUNCIAR A SUS SALES DE CALCIO

DURANTE LA DESCALCIFICACIN YA MENOS QUE EST COMPLETAMENTE
DESCALCIFICADO SE EXPERIMENTAR DIFICULTAD EN LA OBTENCIN DE
SECCIONES DECENTES.
FIJACIN DEL HUESO
CON EL FIN DE PROTEGER LOS ELEMENTOS CELULARES Y FIBROSOS DEL HUESO DE LOS DAOS
CAUSADOS POR LOS CIDOS UTILIZADOS COMO AGENTES DESCALCIFICANTES, ES
PARTICULARMENTE IMPORTANTE FIJAR A FONDO ESTOS ESPECMENES ANTES DE LA
DESCALCIFICACIN. 2-3 LOS ESPECMENES MAL FIJADOS SE MACERAN DURANTE LA
DESCALCIFICACIN Y MANCHAN POCO DESPUS.
ESTO ES MUY NOTABLE EN REAS QUE CONTIENEN MDULA SEA. POR LO TANTO, ES UNA
PRCTICA COMN PARA LOS LABORATORIOS EXTENDER LOS TIEMPOS DE FIJACIN PARA LOS
ESPECMENES SEOS ANTES DE COMENZAR LA DESCALCIFICACIN.
ES IMPORTANTE PROPORCIONAR UN ACCESO FCIL PARA QUE EL FIJADOR PENETRE EN EL

HUESO, POR LO QUE LA PIEL Y LOS TEJIDOS BLANDOS DEBEN ELIMINARSE DE LOS
ESPECMENES GRANDES SI ES POSIBLE.
LOS ESPECMENES SEOS DEBEN SER ASERRADOS EN RODAJAS FINAS TAN PRONTO
COMO SEA POSIBLE PARA MEJORAR LA FIJACIN Y UN VOLUMEN ADECUADO DE FIJADOR
PROPORCIONADO.
SE DEBEN USAR SIERRAS DE ALTA CALIDAD PARA PREPARAR TROZOS DE HUESO.
LAS SIERRAS GRUESAS PUEDEN CAUSAR UN DAO MECNICO CONSIDERABLE Y FORZAR

FRAGMENTOS SEOS EN LOS TEJIDOS BLANDOS PRESENTES EN LA MUESTRA (VER
FIGURA 6).
LA FORMALINA TAMPONADA ES UN FIJADOR SATISFACTORIO PARA EL HUESO, PERO

DONDE LA PRESERVACIN DE LA MDULA SEA ES IMPORTANTE, ALGUNOS
LABORATORIOS UTILIZARN ALTERNATIVAS COMO UNA DE LAS MEZCLAS DE FORMALINA
DE ZINC, B5, ALCOHOL FORMOL ACTICO (FIJADOR DE DAVIDSON) O BOUIN.
FIJACIN ACORDE
A TCNICAS DE
TINCIN Y GROSOR
DE CORTE
RECOMENDABLE
FIJACIN ACORDE
A TCNICAS DE
TINCIN Y
GROSOR DE
CORTE
RECOMENDABLE
FIJACIN ACORDE A
TCNICAS DE
TINCIN Y GROSOR
DE CORTE
RECOMENDABLE
PROCESO DE
FIJACIN SEGN
ESPESOR DE
MUESTRA Y
MTODO
PROCESO DE
FIJACIN SEGN
ESPESOR DE
MUESTRA Y
MTODO
PROCESO DE
FIJACIN SEGN
ESPESOR DE
MUESTRA Y
MTODO
ESTUDIO DE COMPONENTES MINERALES EN
PREPARACIONES DE PIEZAS DENTARIAS O HUESO
TRITURACIN (CULLING, 1974; DICKSON, 1984)
ESTOS PROCEDIMIENTOS REQUIEREN EXPECIENCIA Y

BASTANTE TIEMPO
PROVEEN PREPARACIONES EN QUE CRISTALES MINERALES
SON VISIBLES (SANDERSON, 1997)
MUESTRAS DURAS NO PUEDEN CORTARSE EN MICRTOMOS
NORMALES, PERO PUEDEN ABLANDARSE DESPUS DE LA FIJACIN
REMOCIN SUSTANCIAS RESPONSABLES DE LA DUREZA TISULAR
DESCALCIFICACIN:
DISOLUCIN QUMICA DE SALES DE CALCIO INSOLUBLE
UTILIZA AGENTES CIDOS O QUELANTES
ABLANDAMIENTO DE MATERIAL DURO RICO EN SILICA O QUE

POSEA UN GRADO DE DUREZA ASOCIADO A ELEMENTOS
ORGNICOS COMPACTOS
MUESTRAS CALCIFICADAS
HUESO
DENTINA
CUERNOS
MADERA
INCLUIR EN RESINA PLSTICA Y CORTAR CON
VIBRTOMO
MICRTOMO DE DESLIZAMIENTO
ULTRAMICRTOMO
CORTAR CON HOJA DE ALTA DENSIDAD EN FORMA DE PUNZON O
BISELADA
DISPONIBLE EN LABORATORIOS ESPECIALIZADOS EN PROCESO DE TEJIDOS
DUROS (MADURACIN SEA, ODONTOPATOLOGA, ANATOMA DE LA MADERA)
EXISTEN DIVERSAS TCNICAS DE PROCESAMIENTO DE DIENTES Y
HUESO
CALLIS, 2002
EXISTEN MTODOS DE PROCESAMIENTO VEGETAL

BERLYN & MIKSCHE, 1976
RUZIN, 1999
FACTORES QUE INFLUYEN EN LA
TASA DE DESCALCIFICACIN
CONCENTRACIN DEL AGENTE ACTIVO.
AFECTAR LA VELOCIDAD A LA QUE SE ELIMINA EL CALCIO.
FORMULACIONES PUBLICADAS PARA SOLUCIONES DESCALCIFICADORAS ALCANZAN UN
EQUILIBRIO ENTRE VELOCIDAD Y GRADO DE DAO TISULAR.
LA CONCENTRACIN DE AGENTE ACTIVO SE AGOTAR, YA QUE SE COMBINA CON CALCIO

ES ACONSEJABLE UTILIZAR UN GRAN VOLUMEN DE DESCALCIFICADOR Y RENOVARLO VARIAS VECES
DURANTE EL PROCESO DE DESCALCIFICACIN.
TEMPERATURA.
AUMENTO DE TEMPERATURA ACELERAR LA TASA DE DESCALCIFICACIN
TAMBIN AUMENTAR LA TASA DE DAO TISULAR
SE DEBE EMPLEAR CON MUCHO CUIDADO.
AGITACIN.
AGITACIN SUAVE PUEDE AUMENTAR LA TASA LIGERAMENTE.
ACCESO FLUIDO.
COMO CON LA FIJACIN, EL DESCALCIFICADOR FRESCO DEBE
TENER ACCESO INMEDIATO A TODAS LAS SUPERFICIES DE LA
MUESTRA.
MEJORAR LA DIFUSIN Y PENETRACIN EN LA MUESTRA
FACILITAR LA SOLUCIN, IONIZACIN Y ELIMINACIN DEL
CALCIO.
COMPOSICION DE LOS
DEPSITOS MINERALES
HIDROXIAPATITA
[Ca10(PO4)6(OH)2]:
PRINCIPAL DEPSITO
MINERAL DE TEJIDOS
CALCIFICADOS EN
VERTEBRADOS
SAL INSOLUBLE
EN MEDIO ACUOSO, EST
EN EQUILIBRO CON
SOLUCIN SATURADA QUE
CONTIENE BAJAS
CONCENTRACIONES DE
CALCIO, FOSFATO E IONES
HIDROXILO
REMOCIN IONES HIDRXIDO COMO
RESULTADO DE LA DISOLUCIN DE
HIDROXIAPATITA
CIDOS FUERTES PUEDEN SERVIR COMO

FUENTE DE HIDROGENIONES
NO SE RECOMIENDA UTILIZAR AQUELLOS QUE

FORMAN ESCASAS SALES SOLUBLES DE CALCIO
(CIDO SULFRICO)
CIDOS MS UTILIZADOS:
CLORHDRICO
NTRICO
FRMICO
REMOCIN CONTINUA DE CALCIO, FOSFATO O
HIDROXILO DE LA SOLUCIN EVITA QUE EL
SISTEMA ALCANCE EL EQUILIBRO
LA REACCIN SE DESPLAZA DE IZQUIERDA A

DERECHA HASTA QUE LA HIDROXIAPATITA SE
DISUELVA
SI EL LQUIDO QUE RODEA A LA MUESTRA

TIENE ALTA CONCENTRACIN DE
HIDROGENIONES, SUCEDE LO QUE MUESTRA
LA REACCIN
LA REACCION EST DESPLAZADA DE

IZQUIERDA A DERECHA
CALCIO TISULAR SE ENCONTRAR FINALMENTE COMO
IONES DE CALCIO DISUELTO EN EL FLUIDO
DESCALCIFICANTE
RECAMBIO FRECUENTE DE SOLUCIN DESCALCIFICADORA

IONES CALCIO NO DETECTABLES ASEGURA TRMINO DE
DESCALCIFICACIN
DETECCIN MEDIANTE PRUEBA QUMICA
RED CRISTALINA HIDROXIAPATITA SEA Y DENTARIA

INCORPORA PEQUEAS CANTIDADES DE IONES
CARBONATO ENTRE LOS MS ABUNDANTES FOSFATOS E
HIDRXIDOS
EN TEJIDO MINERAL HAY UN PEQUEO PORCENTAJE DE

CARBONATO DE CALCIO
LA FRMULA MUESTRA SU DISOLUCIN POR CIDOS

PEQUEAS BURBUJAS DE DIXIDO DE CARBONO DENTRO Y SOBRE SUPERFICIES DE LAS MUESTRAS
EN DESCALCIFICACIN CIDA
GENERALMENTE NO PRODUCEN SIGNOS DE DAO VISIBLE AL MICROSCOPIO
MAYORA DE ENZIMAS SON INACTIVADAS POR DESCALCIFICANTES CIDOS
ESTRUCTURA TISULAR LEVEMENTE ALTERADA

FIJACIN HA SIDO ADECUADA
INMUNOHISTOQUMICA ES AFECTADA POR DESCALCIFICACIN

POBRE DESPUS DE DESCALCIFICACIN A pH CIDO
CIDOS DBILES SE PREFIEREN PARA CONSERVAR ANTGENOS
CIDO ACTICO (HENZEN-LONGMANS ET AL,1985)
CIDO ASCRBICO pH 2.5 (MERCHAN-PEREZ ET AL,1999)
EFECTOS DE LA DESCALCIFICACIN
CIDA
HIDRLISIS DE CIDOS NUCLEICOS
RUPTURA DE RNA EN FRAGMENTOS SOLUBLES
REDUCCIN O PRDIDA DE TINCIN CITOPLASMTICA POR COLORANTES CATINICOS
REMOCIN DE PURINAS Y PIRIMIDINAS DESDE EL ESQUELETO DE FOSFATOS Y

AZCARES DEL ADN
MENOR PORCENTAJE QUE EN HIDRLISIS CIDA INTENCIONAL DE LA REACCIN FEULGEN
NO INTERFIERE CON LA INTERPRETACIN DE MEDICIONES DENSITOMTRICAS EN CORTES
SOMETIDOS A HISTOQUMICA O HIBRIDACIN IN SITU (ALERS ET AL, 1999)
SHIBAHA ET AL, 2000:
DAO SEVERO EN TEJIDO DENTARIO DESCALCIFICADO POR CIDOS A HIBRIDACIN IN SITU Y
MARCACIN DE SONDAS CON RNA m
MEJORAMIENTO TCNICAS CUANDO SE DESCALCIFICA CON CIDO FRMICO
DESCALCIFICACIN Y
DESMINERALIZACIN
CONSIDERACIONES PRCTICAS
EL PROCESO DE DESCALCIFICACIN ES AGRESIVO AL TEJIDO
DEBE SER PRECEDIDO DE UNA ADECUADA FIJACIN Y

LAVADO POSTERIOR
ELIMINACIN APROPIADA DEL LQUIDO FIJADOR
LAVADO PROFUSO PREVIENE REACCIONES INDESEABLES ENTRE
FIJADOR Y DESCALCIFICANTE
NO DEBEN PRESENTAR CAMBIOS EN LA PRESIN OSMOTICA

LAVADO PROFUSO PREVIENE REACCIONES INDESEABLES
ENTRE FIJADOR Y DESCALCIFICANTE
FOSFATOS DE SODIO RESIDUALES DE FIJACIN EN
FORMALDEHDO SE OPONEN A REACCIN DE
DESCALCIFICADOR CIDO
CARBONATO DE CALCIO DE FORMALINA NEUTRA ADEMS REACCIONA
CON CIDO NTRICO
IONES DICROMATO SERAN REDUCIDOS POR EL CIDO
FRMICO
MERCURIO O EL ZINC FORMARAN UN QUELATO CON EDTA.
DESCALCIFICACIN REQUIERE GRANDES CANTIDADES DE REACTIVOS (AL MENOS 20 VECES EL
VOLUMEN DEL TEJIDO A PROCESAR)
CAMBIO DE SOLUCIN DIARIAMENTE

MEZCLA DE ACIDO SE CAMBIA CADA 24-48HRS
SOLUCIN DE EDTA CADA 3-5 DAS
EN EL CASO DE HACER LA PRUEBA DE OXALATO DE AMONIO

LTIMO CAMBIO DE DECALCIFICADOR PREVISTO DEBE SER SLO DE CINCO VECES EL VOLUMEN DE LA
MUESTRA
PRESENCIA DE CALCIO EN EL LQUIDO EN UNA CONCENTRACIN MS ALTA QUE EN UN VOLUMEN MS
GRANDE
TEJIDO CALCIFICADO O HUESO DEBEN SUSPENDERSE DE MODO QUE LAS SALES DISUELTAS
PUEDAN CAER EN EL FONODO DEL RECIPIENTE UTILIZADO
DIENTE
PRESENTA DIFICULTADES NO OBSERVABLES EN HUESO
ESMALTE:
CASI COMPLETAMENTE FORMADO DE SALES DE CALCIO
ADEMS POSEE TENUE RED PROTEICA QUE COLAPSA TRAS DESCALCIFICACIN
FIJACIN DEBE ASEGURAR FORMACIN DE PUENTES CRUZADOS FIRMES

(CROSS-LINKING)
IDEALMENTE USAR GLUTARALDEHDO
PULPA PUEDE RETRAERSE, DAANDO PROCESO ODONTOBLSTICO, PASANDO

DE PULPA A DENTINA
REDUCCIN ARTEFACTO USANDO FIJACIN EN GLUTARALDEHDO (VAN WYK, 1993)
TIEMPO DE DESCALCIFICACIN VARA CONSIDERABLEMENTE
SEGN MATERIAL A PROCESAR
SEGN AGENTE DESCALCIFICADOR
DESCALCIFICACIN TERMINA CUANDO LA MUESTRA EST

SUFICIENTEMENTE BLANDA Y FLEXIBLE
PUEDE CORTARSE CON BISTUR
SIN PRODUCIR RUIDO ESTRIDENTE PROPIO DE HUESO AL CORTE
RECOMENDABLE COMPROBAR TRMINO DE DESCALCIFICACIN

MEDIANTE PRUEBAS QUMICAS
SOLUCIONES
DESCALCIFICADOR
AS
FIJADORES CIDOS
CASI TODOS LOS FIJADORES CIDOS ACTAN EN MAYOR
O MENOR GRADO COMO DESCALCIFICADORES
ACCIN LENTA E INSUFICIENTE
FIJADORES UTILIZADOS COMO DESCALCIFICANTES

LQUIDO DE MLLER
BOUIN
SUSA
MTODO DE JENKINS
SOLUCIN
CIDO CLORHDRICO CONCENTRADO (12,06 N) p.a. 4 mL
CIDO ACTICO GLACIAL p.a. 3 mL
CLOROFORMO 10 mL
AGUA DESTILADA 10 mL
ALCOHOL ETLICO ABSOLUTO 73 mL
UNA VEZ TERMINADA LA DESCALCIFICACIN, LAVAR EN

VARIOS CAMBIOS DE ALCOHOL 95%
DESCALCIFICAD
ORES CIDOS
DESCALCIFICADORES CIDOS
CIDO FRMICO pH 1.5-3.5: DESCALCIFICADOR DE ELECCIN
GENERALMENTE EN MEZCLAS
ALGUNOS CONTIENEN FORMALDEHDO
ATENUAR CONSECUENCIAS DE FIJACIN PRIMARIA INADECUADA
OTROS CIDOS ORGNICOS USADOS PARA DESCALCIFICACIN

CIDO ACTICO
CIDO CTRICO
LENTOS
CIDO LCTICO
CASI TAN RPIDO COMO CIDO FRMICO
HCL 1 M O CIDO NTRICO

DESCALCIFICACIN DE MUESTRAS BIEN FIJADAS POR VARIOS DAS EN FORMALDEHDO, O TIEMPOS MS CORTOS EN OTROS
FIJADORES DE ACCIN MS RPIDA
CIDOS MINERALES (pH 0) REMUEVEN DEPSITOS CALCIFICADOS MS RPIDAMENTE QUE CIDO FRMICO (SANDERSON,
1994)
DE CASTRO:
UNO DE LOS DESCALCIFICADORES QUE CONTIENE CIDOS MINERALES
CIDO ASCRBICO SLO SE USA CON MUESTRAS DELICADAS QUE POSEEN DELGADAS CAPAS DE HUESO
DESCALCIFICADOR CIDO DEMORA TRADICIONALMENTE 4-5 DAS EN ABLANDAR UN
CUBO DE HUESO ESPONJOSO DE 5 mm (CULLING, 1974)
NILSSON ET AL (1991): PERFUSIN RATAS CON FIJADOR, SEGUIDO DE DESCALCIFICACIN

CIDA POR 6 HRS
IGUALMENTE EFECTIVO QUE SUMERGIR TEJIDOS FIJADOS POR 72 HRS EN EL MISMO FLUIDO
OTRO MODO DE ACORTAR TIEMPO DE DESCALCIFICACIN ES APLICAR TEMPERATURA

(KOK & BOON, 1992
CALENTAR A 55 C EN MICROONDAS
ACELERA 10 VECES VELOCIDAD DE REACCIN
DESCALCIFICACIN HUESO
30 HRS A TEMPERATURA AMBIENTE
< 3 HRS A 55 C
TERMINADA LA DESCALCIFICACIN, LAVAR EN VARIOS CAMBIOS DE AGUA O ETANOL 70%

CIDOS FUERTES
CIDOS FUERTES
CIDO CLORHDRICO
CIDO NTRICO
CONCENTRACIONES HASTA 10%
AGENTES DE ACCIN MS RPIDA
USO POR TIEMPO EXCESIVO

RPIDA PRDIDA DE TINCIN NUCLEAR
PUEDE MACERAR LOS TEJIDOS.
IMPORTANTE
UTILIZAR UNA PRUEBA DE PUNTO FINAL APROPIADA
MINIMIZAR LA EXPOSICIN DE LOS ESPECMENES A ESTOS AGENTES.
GENERALMENTE SE BASAN EN CIDOS
FUERTES
COMNMENTE CIDO
CLORHDRICO
SE DEBE UTILIZAR
CONSERVADORAMENTE CON
ATENCIN A LAS INSTRUCCIONES
PROPORCIONADAS SI SE VAN A
OBTENER BUENOS RESULTADOS.
Corte de hueso esponjoso descalcificado (H & E).
EJEMPLOS: Esta muestra se decalcific con un decalcificador
DESCALCIFICADOR II DE SURGIPATH ES
RPIDO EN ACCIN de cido clorhdrico durante un tiempo excesivo
CONTIENE CIDO CLORHDRICO sin usar una prueba de punto final apropiada.
CONSECUENCIAS DE UN TRATAMIENTO Aunque los elementos de tejido son cohesivos, la
PROLONGADO CON UN tincin es muy pobre, mostrando una ausencia
DESCALCIFICADOR DE CIDO MINERAL completa de tincin nuclear junto con eosina
MS ALL DEL PUNTO FINAL fuertemente diferenciada.
APROPIADO.
CIDO NTRICO 5% ACUOSO
SOLUCIN CIDO NTRICO 5%
CIDO NTRICO CONCENTRADO p.a. 5 mL
MTODO RPIDO
EXTREMADAMENTE AGRESIVO Y DAA CITOARQUITECTURA

EVITAR SOBREEXPONER MUESTRA AL DESCALCIFICANTE
AUMENTA ACIDOFILIA
NCLEOS PIERDEN AFINIDAD TINTORIAL
LAS MUESTRAS DEBEN FIJARSE POR LARGO TIEMPO ANTES DE DESCALCIFICAR
DEBE HACERSE UN LAVADO PROFUSO DE LARGO TIEMPO PARA EVITAR FORMACIN DE CIDO
CARBNICO Y CO2
EN GENERAL SE UTILIZAN SOLUCIONES ACUOSAS DE CIDO
NTRICO 5-10%
UTILIZAR TROZOS PEQUEOS DE TEJIDO

EVITA PERODOS PROLONGADOS DE EXPOSICIN A CIDO
TIEMPO DE DESCALCIFICACIN < 48 HRS
TRANSFERIR TEJIDO DIRECTAMENTE A ALCOHOL 70%
CONTINUAR HISTOPROCESAMIENTO PARA PARAFINA O CELOIDINA

CIDO NTRICO 5% Y
FLOROGLUCINA
CIDO NTRICO CONCENTRADO p.a.
5 mL
FLOROGLUCINA (1,3,5 TRIHIDROXIBENCENO) 1
g
ALCOHOL ETLICO 95%
70 mL
AGUA DESTILADA
30 mL
MTODO RPIDO
DE CASTRO
FRMULA 1
ALCOHOL ETLICO 95% 250 mL
HIDRATO DE CLORAL 20 mL
CIDO NTRICO CONCENTRADO p.a. 20 mL
FRMULA 2
ALCOHOL ETLICO 100% 300 mL
HIDRATO DE CLORAL 50 g
CIDO NTRICO CONCENTRADO (70% HNO3) p.a. 30 mL
MEZCLAR EN EL ORDEN INDICADO

DURACIN INDEFINIDA
PRECAUCIONES:
EL CIDO NTRICO DEBE AADIRSE AL FINAL
REACCIONA EXPLOSIVAMENTE CON ETANOL CONCENTRADO
SE RECOMIENDA PREPARAR EN FRO (USAR RECIPIENTE CON HIELO
DE CASTRO
SE USA TRADICIONALMENTE JUNTO A TINCIONES NEUROLGICAS
ES FUERTEMENTE ACDICO
DESCALCIFICA RPIDAMENTE
EL ALCOHOL Y EL HIDRATO DE CLORAL EN MEZCLA PREVENDRAN TUMEFACCION TISULAR

MAYOR PRESIN OSMTICA DEL FLUIDO?
NO SERA RELEVANTE CUANDO SE DESCALCIFICAN MUESTRAS ADECUADAMENTE FIJADAS

SE UTILIZABA PREVIAMENTE COMO FIJADOR Y DESCALCIFICANTE SIMULTNEO
EN RAZN DE LOS EFECTOS OSMTICOS Y PROPIEDADES FIJADORAS DE LOS 3

INGREDIENTES, COBRA RELEVANCIA
CIDO ASCRBICO
SOLUCIN CIDO ASCRBICO 1% EN SUERO FISIOLGICO
CIDO ASCRBICO 1 g
CLORURO DE SODIO 0,85 g
PREPARAR INMEDIATAMENTE ANTES DE USAR
UTILIZAR UNA SOLA VEZ
TIL PARA MUESTRAS PEQUEAS (ODO INTERNO DE ALGUNOS ANIMALES)

MEJORAMIENTO INMUNOHISTOQUMICA EN COMPARACIN A DESCALCIFICACIN
EDTA (MERCHAN-PEREZ ET AL, 1999)
DESCALCIFICA
NTES DBILES
CIDOS DBILES
CIDO FRMICO
POPULARES Y AMPLIAMENTE UTILIZADOS EN DESCALCIFICACIN.
CIDO FRMICO SE PUEDE USAR EN SOLUCIN ACUOSA AL 10% SIMPLE O

COMBINADO CON FORMALINA O CON UN TAMPN.
ES MS LENTO QUE LOS AGENTES CIDOS FUERTES
ES MUCHO MS SUAVE EN ACCIN
ES MENOS PROBABLE QUE INTERFIERA CON LA TINCIN NUCLEAR.

DECALCIFICADOR I DE SURGIPATH: EJEMPLO DE UN
DESCALCIFICADOR PATENTADO BASADO EN CIDO
FRMICO.
TAMBIN CONTIENE FORMALINA
FIJADOR Y DESCALCIFICADOR SUAVE EN SU ACCIN
TAMBIN SE HAN UTILIZADO OTROS CIDOS

CIDO TRICLOROACTICO (TCA).
CIDO PCRICO
FIJADOR POTENTE Y DESCALCIFICADOR DBIL
ANA-MORSE
SOLUCIN A: CIDO FRMICO 45%
CIDO FRMICO CONCENTRADO (90%) p.a. 50 mL
SOLUCIN B: CITRATO DE SODIO 20%

CITRATO DE SODIO 20 g
TIMOL(PRESERVANTE ANTIMICROBIANO) 1 CRISTAL
SOLUCIN DE TRABAJO:
MEZCLAR A PARTES IGUALES SOLUCIN A Y SOLUCIN B
CAMBIAR DIARIAMENTE SOLUCIN DE TRABAJO

TERMINADA LA DESCALCIFICACIN, TRANSFERIR DIRECTAMENTE A ALCOHOL 70%
CIDO FRMICO TAMPONADO
(CLARK, 1954)
FRMULA 1:
FORMIATO DE SODIO (HCOONa) 34 g
FRMULA 2:
HIDRXIDO DE SODIO (NaOH) 19,8 g
DURACIN INDEFINIDA
MANTIENE pH EN 2.0
PRODUCE SLO SUPRESIN MNIM DE TINCIN DE CIDOS NUCLEICLOS
CIDO FRMICO A ESTE pH EXTRAE MENOS PROTEOGLICANOS DE CARTLAGO QUE OTROS
AGENTES DESCALCIFICANTES PROBADOS (IPPOLITO ET AL,1981)
QUELANTE
S
VERSENO
EDTA SECUESTRENO
CIDO EDTICO
NOMENCLATU ETILEN-BIS(CIDO IMINODIACTICO)
RA
SALES SDICAS RESPECTIVAS
AGENTES QUELANTES
CIDO ETILENDIAMINOTETRACTICO (EDTA)
TRABAJAN CAPTURANDO IONES DE CALCIO DE LA SUPERFICIE DEL

CRISTAL DE APATITA
REDUCEN LENTAMENTE SU TAMAO.
PROCESO MUY LENTO PERO MUY SUAVE (PUEDEN SER NECESARIAS

SEMANAS DEPENDIENDO DEL TAMAO DE LA MUESTRA),
NO ES ADECUADO PARA ESPECMENES URGENTES
ES MS APROPIADO PARA APLICACIONES DE INVESTIGACIN

MORFOLOGA DE MUY ALTA CALIDAD
ELEMENTOS MOLECULARES PARTICULARES CONSERVADO
TCNICAS IHC, FISH O PCR.
CONCENTRACIN APROXIMADA 14% EN SOLUCIN NEUTRALIZADA.
VELOCIDAD DE DESCALCIFICACIN DEPENDER DEL pH.

GENERALMENTE SE USA A pH 7,0.
FUNCIONA MS RPIDAMENTE A pH 10
ALGUNOS ELEMENTOS DE TEJIDO PUEDEN DAARSE A pH ALCALINO.
DESCALCIFICACI
N POR QUELACIN
AGENTE QUELANTE
COMPUESTO ORGNICO O ION CAPAZ DE COMBINARSE CON IONES METLICOS
FORMA COMPUESTO CONOCIDO COMO QUELATO METLICO
EL TOMO METLICO DEL QUELATO SE UNE COVALENTEMENTE A PATE

DE UN ANILLO DE 5-6 COMPONENTES
SON ESTABLES
NO SE DESCOMPONEN FCILMENTE PARA LIBERAR IONES METLICOS
REACCIN DE IONES METLICOS CON QUELANTES, AUNQUE

REVERSIBLE, SUCEDE CUANDO EL QUELANTE EST EN EXCESO
ETILENDIAMINA CIDO TETRAACTICO (EDTA)
FORMA 4 TIPOS DE SALES CON SODIO Y
OTROS METALES ALCALINOS
IONES ETILENDIAMINA TETRAACETATO SE
COMBINAN CON LA MAYORA DE IONES
METLICOS
FORMAN QUELATOS ESTABLES, SOLUBLES
INMERSIN MUESTRA CALCIFICADA EN

SOLUCIN RICA EN ANIONES EDTA,
REMOVER IONES CALCIO LIBRES MEDIANTE
QUELACIN
DISOLUCIN HIDROXIAPATITA POR

IMPOSIBILIDAD DE MANTENER EQUILIBRIO
CON SOLUCIN SATURADA
QUMICA DE LA QUELACIN FUE REFERIDA POR CHABEREK Y MARTELL (1959)
DESCALCIFICACIN CON EDTA DIFIERE DE AQUELLA CON CIDOS EN QUE LOS

HIDROGENIONES NO PARTICIPAN DE LA REACCIN QUMICA
SE UTILIZAN EN CONDICIONES DE ALCALINIDAD
EVITA EFECTOS DELETREOS DE CIDOS EN SUSTANCIAS LBILES COMO CIDOS
NUCLEICOS Y ENZIMAS
SOLUCIONES FUERTEMENTE ALCALINAS NO SE USAN

EXTRAEN PROTEOGLICANOS DE MATRIZ EXTRACELULAR TISULAR (IPPOLITO ET AL, 1981)
DESVENTAJA EDTA: ACTA LENTAMENTE EN COMPARACIN CON CIDOS

SOLUCIONES DE CUALQUIERA DE LAS SALES
PRESENTAN CANTIDADES DISPONIBLES DE GRUPOS
CARBOXILO PARA LA QUELACIN DEPENDIENTES DEL c
A MAYOR pH, MS GRUPOS DISPONIBLES

SOLUCIN 1% Na2EDTA TIENE pH 5.3
ETILENDIAMINA CIDO
TETRAACTICO EDTA
AGENTE QUELANTE
DESCALCIFICACIN MS LENTA (SEMANAS O MESES)
MNIMO DAO CITO-HISTOLGICO
PERMITE PRESERVAR MATRIZ ORGNICA SEA Y

CARTILAGINOSA
ETILENDIAMINA CIDO
TETRAACTICO EDTA
FRECUENTEMENTE SE USA PARA INMUNOHISTOQUMICA
PERMITE DESENMASCARAR ALGUNOS ANTGENOS (HOSOYA ET

AL,2005)
DESPUS DE DESCALCIFICAR PUEDEN HACERSE ALGUNOS MTODOS

HISTOQUMICOS EN CORTES EN CONGELACIN
LA SOLUCIN EDTA SE PREPARA INMEDIATAMENTE ANTES DE USAR Y

SLO SE UTILIZA UNA VEZ
SOLUCIN EDTA DISDICA TETRAACETATO ETILENDIAMINA
DISDICO [CH2N(CH2COOH)2]2
SOLUCIN EDTA DISDICA TETRAACETATO

ETILENDIAMINA DISDICO [CH2N(CH2COOH)2]2
RECOMENDABLE PARA DESCALCIFICACIN RUTINARIA
EDTA DISDICO [CH2N(CH2COOH)2]2 5-10 g

NaOH 4% AGREGAR HASTA QUE pH EST ENTRE 7 Y 8
SOLUCIN EDTA AMONIO
RECOMENDABLE PARA ESPECMENES CON ALTA DENSIDAD SEA
DESCALCIFICACIN DEMORA 6 DAS EN LUGAR DE LOS 18 QUE

DEMORA EN OTRAS MEZCLAS DE EDTA (SANDERSON ET AL, 1995)
CIDO TETRAACTICO ETILENDIAMINA [CH2N(CH2COOH)2]2 14 g

HIDRXIDO DE AMONIO (SOLUCIN DE AMONIO 28-30%, SG 0.9 9 mL
AGITAR HASTA DISOLVER Y AGREGAR MS HIDRXIDO DE AMONIO HASTA
QUE pH SEA 7.1
PONER LA MUESTRA EN CASSETTE HISTOLGICO DE PROCESAMIENTO
DEPOSITAR EN RECIPIENTE CON EDTA
COLOCAR EN AGITADOR MAGNTICO MIENTRAS PROCEDE LA
DESCALCIFICACIN
SOLUCIN EDTA PUEDE CAMBIARSE CADA 3-4 DAS
AL DESCALCIFICAR, LAS MUESTRAS PUEDEN ENJUAGARSE EN AGUA
ANTES DE DESHIDRATAR
SALES DE EDTA SON INSOLUBLES EN ALCOHOL
EXISTEN SIN EMBARGO SALES ALCOHOL SOLUBLES SEGN SEALAN EGGERT
ET AL EN 1981 PERO NO TIENEN VENTAJAS ESPECIALES COMO
DESCALCIFICANTES
EDTA VERSENO O TITRIPLEX
FIJACIN: FORMOL NEUTRO 10%
SOLUCIN DESCALCIFICADORA
EDTA SAL SDICA 10 g
AJUSTAR pH CON HIDRXIDO DE SODIO 40%
AL LLEGAR A 7 SE ALCANZA SOLUBILIZACIN DEL EDTA
PROCEDIMIENTO
PONER TEJIDO FIJADO EN SOLUCIN DESCALCIFICADORA
CAMBIAR DIARIAMENTE SOLUCIN
VOLUMEN 40 VECES O MS EL VOLUMEN DEL TROZO A DESCALCIFICAR
CONTROLAR DESCALCIFICACIN CON TEST QUIMICO
COMENZAR DESHIDRATACIN EN ALCOHOL 70% (NO ES NECESARIO LAVAR DESPUS DE
DESCALCIFICAR)
INCLUIR EN MEDIO APROPIADO
BUEN AGENTE DESCALCIFICADOR

DE EFECTO LENTO
NO INTERFIERE EN TINCIONES POSTERIORES
NO DISTORSIONA TEJIDOS
PERMITE ESTUDIOS HISTOQUMICOS E INMUNOHISTOQUMICOS
REMUEVE OTROS METALES (FIERRO, MAGNESIO, PLOMO)
SONICACIN EMPLEADA CON EDTA
OTRAS ACELERA LA DESCALCIFICACIN DE
ESPECMENES DE TRPANO PARA SU
TCNICAS QUE POSTERIOR ANLISIS MOLECULAR.
TEMPERATURA
AUMENTAN LA
DEBE SER
CUIDADOSAMENTE CONTROLADA.
EFICIENCIA DE
TRATAMIENTO POR MICROONDAS SE
LA HA USADO CON DECALCIFICADORES
DE CIDO CLORHDRICO
DESCALCIFICAC TEMPERATURA ELEVADA PUEDE DAAR LA
IN MORFOLOGA
CAUSA ARTEFACTOS DE TINCIN.
BAOS ELECTROLTICOS ACELERAN
ACCIN DESCALCIFICADORA DE
SOLUCIONES CIDAS
PRECAUCIN:
DESCALCIFICAC INSTALAR BAO ELECTROLTICO
DESCALCIFICADOR EN CAMPANA DE
IN EXTRACCIN DE VAPORES
ELIMINA VAPORES QUE
ELECTROLTICA DESPRENDE LA REACCIN
GENERADOR DEBE QUEDAR FUERA
DE LA CAMPANA
COLORAR SOLUCIN EN DEPSITO
CERRADO CON MANGUERA
CONECTADA A TRAMPA DE AGUA
EL HUESO SE COLOCA EN DESCALCIFICADOR CIDO Y
SE UNE A UN ELECTRODO A TRAVS DEL CUAL SE
APLICA CORRIENTE
TCNICA QUE NO HA ENCONTRADO AMPLIA

ACEPTACIN
POTENCIAL DE CAUSAR DAO TRMICO A LA MUESTRA.
DESCALCIFICACIN ELECTROLTICA
DIFERENTES SOLUCIONES DESCALCIFICADORAS
CIDO CLORHIDRICO 8 mL
CIDO FRMICO 10 mL
CAMBIAR SOLUCIN CUANDO INTENSIDAD DE CORRIENTE BAJE MS ALL DE LO INDICADO PARA

DESCALCIFICADOR EMPLEADO (2 AMPRES)
TIEMPO DE DESCALCIFICACIN VARIABLE SEGN TEJIDO
INCISIVO 36 HRS
MOLAR 48 HRS
TEMPERATURAS MAYORES A 40 C EN BAO ELECTROLTICO PRODUCEN SERIAS ALTERACIONES

TISULARES
COLOCAR BAO ELECTROLTICO EN DEPSITO CON AGUA CORRIENTE PARA EVITAR AUMENTO DE
TEMPERATURA
GANTER RECOMIENDA USAR SIGUIENTES
RESINAS
AMBERLITE RKO 120
DESCALCIFICA DOWEX 50
CIN EN BASE ZEE CARB 225

UTILIZABLES SOLAS
A RESINAS DE PONER EN RESINA TROZO DE TEJIDO
PREVIAMENTE FIJADO
INTERCAMBIO DEJAR TIEMPO SUFICIENTE PARA
COMPLETAR DESCALCIFICACIN (1-
INICO 14HRS)
LAVAR TEJIDO
SEGUIR HISTOPROCESAMIENTO
RESINAS DE INTERCAMBIO INICO HAN SIDO
INCORPORADAS EN ALGUNOS PROTOCOLOS DE
DESCALCIFICACIN.
SE AADEN AL CONTENEDOR QUE CONTIENE EL
DESCALCIFICADOR
ABSORBEN EL CALCIO IONIZADO MANTENIENDO LA EFICACIA DEL CIDO.
DESCALCIFICADORES CIDOS USADOS EN VOLMENES

ADECUADOS Y REEMPLAZADOS REGULARMENTE HARAN
INNECESARIO USAR RESINAS
ASOCIADAS CON SOLUCIONES DESCALCIFICADORAS
NO DEBEN CONTENER CIDOS MINERALES
SE USA CIDO FRMICO Y CIDO NTRICO
VOLUMEN RESINA SIMILAR O MAYOR A 10% VOLUMEN SOLUCIN
DESCALCIFICADORA
MENOR TIEMPO NECESARIO PARA ELIMINACIN SALES DE CALCIO
REGENERACIN RESINA:
LAVADO 2 VECES EN HCl 0,1 N
LAVADO 3 VECES EN AGUA DESTILADA
USO DE ULTRASONIDOS O
MICROONDAS
LA APLICACIN DE ULTRASONIDOS O MICROONDAS ACELERA LA CINTICA DE LAS
MOLCULAS
ESTO FAVORECE EL ACORTAMIENTO DE LOS TIEMPOS DE DESCALCIFICACIN
COMO LA PENETRACIN DEL AGENTE DESCALCIFICANTE
SE HA OBSERVADO QUE EL USO DE AGENTES DESCALCIFICANTES EXPUESTOS A

ULTRASONIDO O A MICROONDAS PUEDEN DISMINUIR LOS TIEMPOS DE
EXPOSICIN
EN EL CASO DE LAS MICROONDAS, UN PROTOCOLO DE DESCALCIFICACIN PARA

MUESTRAS PEQUEAS PUEDE APLICARSE MEDIANTE LA UTILIZACIN DE ANA
MORSE EN HORNO MICROONDAS A POTENCIA MEDIA-ALTA POR 100 MINUTOS
MUESTRAS SUFICIENTEMENTE GRANDES
EXTENSIN MS ALL DE REGIONES DE
INTERS
CONTIENE TEJIDO CALCIFICADO EN VARIOS
TRMINO DE SECTORES
PUEDE CORTARSE CON NAVAJA O BISTUR A
LA INTERVALOS DURANTE LA DESCALCIFICACIN
CORTES FCILES
DESCALCIFICA SUFICIENTEMENTE BLANDAS PARA SER
CORTADA EN MICRTOMO
CIN MUESTRAS EN OCASIONES PEQUEAS PARA
SER DESGASTADAS
MATERIAL CALCIFICADO ES AISLADO EN
MEDIO DEL BLOQUE DE TEJIDO
TROZOS NO DESEADOS DE HUESO DE APROXIMADAMENTE EL MISMO
TAMAO PUEDEN ENTONCES SER PROCESADOS AL LADO DE LA
MUESTRA
CUANDO ESTA PIEZA DE HUESO EST TOTALMENTE ADAPTADA, EL

MODELO DE ESTUDIO HISTOLGICO DEBER TAMBIN SER
DESCALCIFICADO
MUESTRAS NUNCA DEBEN SER PROBADOS INTRODUCIENDO AGUJAS

EN ELLOS
LOS AGUJEROS PERSISTAN EN LOS CORTES
MTODO QUMICO
TOMAR DEL FONDO DEL FRASCO CON
MUESTRA, 5 mL DE SOLUCIN
DESCALCIFICADORA QUE EST EN CONTACTO
CON HUESO POR 3-12HRS
CONTROL DE AGREGAR 5 mL DE OXALATO DE AMONIO 5%
AGREGAR 5 mL DE HIDRXIDO DE AMONIO 5%
LA MEZCLAR Y OBSERVAR A LOS 15-30 MINUTOS
DESCALCIFICA
SOLUCIN ENTURBIADA POR FORMACIN DE
OXALATO DE CALCIO
DESCALCIFICACIN INCOMPLETA
CIN CAMBIAR LQUIDO DESCALCIFICADOR
CONTINUAR DESCALCIFICANDO HASTA OBTENER

TEST QUMICO NEGATIVO (NO SE ENTURBIA)
SI SE OBTIENEN RESULTADOS DE ALTA CALIDAD, ES IMPORTANTE DETERMINAR EL PUNTO EN
EL QUE SE HA ELIMINADO TODO EL CALCIO
A PARTIR DE ESTE PUNTO EL DAO TISULAR PARECE OCURRIR A UN RITMO CRECIENTE.
SOBREDESCALCIFICACIN, PARTICULARMENTE CON LOS DESCALCIFICADORES CIDOS

FUERTES, ESTROPEA LA TINCIN DE ELEMENTOS BASFILOS
NCLEOS DE CLULAS
EN ALGUNAS CIRCUNSTANCIAS PUEDE CAUSAR MACERACIN DE LOS ELEMENTOS DE TEJIDO

MS BLANDOS.
ESPECMENES INCOMPLETAMENTE DESCALCIFICADOS PUEDEN SER DIFCILES O IMPOSIBLES

DE SECCIONAR.
PRUEBA RADIOGRFICA
MEJOR MTODO, PARTICULARMENTE CON MUESTRAS GRANDES
TALES COMO CABEZAS FEMORALES, ES RADIOGRAFIAR LA MUESTRA.
RADIOGRAFA DE BUENA CALIDAD REVELAR CLARAMENTE

PEQUEOS DEPSITOS RESIDUALES DE CALCIO
PERMITIR UN TRATAMIENTO ADICIONAL SI ES NECESARIO.
MTODO EXCELENTE PARA SEGUIR EL PROCESO DE

DESCALCIFICACIN DE ESPECMENES GRANDES TALES COMO
CABEZAS FEMORALES).
Una serie de rayos X siguiendo el proceso de descalcificacin de una cabeza
femoral con descalcificador de cido frmico / citrato. Las radiografas se
produjeron utilizando un Faxitron de Hewlett-Packard y permiten que el proceso
se siga con precisin y que el punto final se identifique correctamente.
RAYOS X
PERMITE VISUALIZAR DEPSITOS DE CALCIO DEL TEJIDO
NO APLICABLE EN MUESTRAS FIJADAS CON SALES METLICAS, RADIOOPACAS
BICLORURO DE MERCURIO
MTODO MANUAL
SLO SE USA CUANDO SE TIENE SUFICIENTE EXPERIENCIA EN
DESCALCIFICACIN
DOBLAR SUAVEMENTE LA MUESTRA
SI PUEDE HACERSE CON POCA RESISTENCIA: MUESTRA DESCALCIFICADA
PRESIONAR SUAVEMENTE CON UA
PINCHAR CON AGUJA
PRUEBAS FSICAS
REQUIEREN MANIPULACIN, FLEXIN DE LA SONDA O RECORTE DE LA MUESTRA PARA
"SENTIR" PARA LAS REAS RESTANTES CALCIFICADAS.
AUNQUE ESTE MTODO PUEDE TENER XITO EN MANOS EXPERIMENTADAS,

GENERALMENTE SE CONSIDERA QUE NO ES FIABLE.
DAO MECNICO PUEDE OCURRIR DURANTE LA FLEXIN O EL SONDEO

DEPSITOS PEQUEOS DEL CALCIO SE PUEDEN FALTAR FCILMENTE.
TAMBIN SE HA DESCRITO UN MTODO PARA DETERMINAR EL PUNTO FINAL PESANDO

CUIDADOSAMENTE EL ESPCIMEN DESPUS DEL ENJUAGADO Y EL BORRADO.
ESTE PUEDE SER UN MTODO EFICAZ PARA ESPECMENES GRANDES.

PRUEBAS QUMICAS
PRUEBA QUMICA PUEDE APLICARSE CUANDO SE USAN ALGUNOS DECALCIFICADORES
CIDOS (PARTICULARMENTE CIDO FRMICO).
SE AADE UNA SOLUCIN DE OXALATO DE AMONIO A UNA MUESTRA DEL CAMBIO

FINAL DE DECALCIFICADO QUE HA SIDO NEUTRALIZADO CON HIDRXIDO DE AMONIO.
SI EL CALCIO EST PRESENTE, SE FORMAR UN PRECIPITADO DE OXALATO DE CALCIO

INDICA QUE LA DESCALCIFICACIN ES PROBABLEMENTE INCOMPLETA
SE REQUIERE UN TIEMPO MAYOR EN DESCALCIFICACIN.
ESTA PRUEBA SE HACE MEJOR EN UN CAMBIO RELATIVAMENTE RECIENTE DE

DESCALCIFICADOR (EXPUESTO AL TEJIDO POR EJEMPLO, UNA HORA SOLAMENTE).
TEST DE OXALATO
UNA DE LAS PRUEBAS MS
EXACTAS
OXALATO DE CALCIO
SOLUBLE EN CIDOS
MINERAES
INSOLUBLE EN AGUA Y
LCALIS EN SOLUCIN
ACUOSA
SOLUCIN FUERTE DE AMONIO 5%
HIDRXIDO DE AMONIO SG 0.9 5
mL
PROTOCOL AGUA DESTILADA
100 mL
O PRUEBA
DE SOLUCIN DE OXALATO DE AMONIO
5%
OXALATO OXALATO DE AMONIO 5
mL
AGUA DESTILADA
100 mL
AADIR GOTAS DE SOLUCIN FUERTE DE AMONIO A 5 mL DE
LQUIDO DESCALCIFICANTE USADO HASTA QUE LA MEZCLA SE
TORNE ALCALINA AL EVALUAR CON PAPEL TORNASOL (pH >7)
AADIR 5 mL DE OXALATO DE AMONIO EN SOLUCIN ACUOSA

SATURADA
APP 3% (NH4)2C2O4*H2O
LA SOLUCIN PUEDE DURAR VARIOS AOS
DEJAR REPOSAR AL MENOS MEDIA HORA

AUSENCIA DE IONES CALCIO: NO SE FORMA PRECIPITADO BLANCO
DESPUS DE TIEMPO DE EVALUACIN
PERMITE DETERMINAR PUNTO FINAL DE LA DESCALCIFICACIN

MEDIANTE EDTA, INCLUSO AUNQUE LAS SOLUCIONES NO CONTENGAN
IONES DE CALCIO (EGGER Y GERMAIN,1979)
[CaEDTA]2- PRESUNTAMENTE DISOCIADO EN OXALATOS ALTAMENTE

INSOLUBLES
ROSEN (1981): AJUSTAR SOLUCIONES EDTA A pH 3.2-3.6 PARA
MAXIMIZAR SENSIBILIDAD DE LA PRUEBA DE OXALATO
ES IMPORTANTE EVALUAR PUNTO DE TRMINO DE
DESCALCIFICACIN
USO SOLUCIONES HCL O CIDO NTRICO 1M
EXPOSICIN EXCESIVA PUEDE HIDROLIZAR PROTENAS,

CARBOHIDRATOS MACROMOLECULARES Y CIDOS
NUCLEICOS
DAO ESTRUCTURAL ASOCIADO
SI CREE QUE EL PUNTO FINAL DE LA DESCALCIFICACIN EST CERCA Y DESEA
DISMINUIR EL PROCESO PARA EVITAR LA EXCESIVA DESCALCIFICACIN Y EL
CONSIGUIENTE DAO TISULAR
FINES DE SEMANA LARGOS
ESPECMENES PUEDEN SER RETIRADOS DEL DESCALCIFICADOR , ENJUAGARSE Y

VOLVER A COLOCAR EN FORMALINA (IMPORTANTE SI SE EST USANDO CIDO
CLORHDRICO).
DESCALCIFICACIN PUEDE REANUDARSE CUANDO SEA CONVENIENTE.
ALTERNATIVA: REFRIGERAR LA MUESTRA A 4C EN SU DESCALCIFICADOR PARA

RALENTIZAR EL PROCESO.
TRATAMIENTO POST DESCALCIFICACIN Y ANTES DEL
PROCESAMIENTO
VARIOS MTODOS PARA NEUTRALIZAR EL DESCALCIFICANTE CIDO

RESIDUAL ANTES DEL PROCESAMIENTO
INCLUYENDO LAVADO EXTENSIVO EN AGUA DEL GRIFO
APLICACIN DE SOLUCIONES ALCALINAS.
GENERALMENTE, UN LAVADO CORTO Y EFICAZ EN EL AGUA DEL GRIFO

DEBE SER SUFICIENTE
CUALQUIER CIDO RESTANTE SE ELIMINAR DURANTE EL PROCESAMIENTO.
ES IMPORTANTE ELIMINAR LA MAYOR PARTE DEL DESCALCIFICADOR

EVITAR CONTAMINAR REACTIVOS DE PROCESAMIENTO Y PROCESADOR CON CIDO.
ELECCIN DE UN HORARIO ADECUADO PARA EL HUESO
DESCALCIFICADO U OTROS TEJIDOS DESCALCIFICADOS
UNA VEZ QUE EL MINERAL SE HA ELIMINADO UN CALENDARIO DE PROCESAMIENTO
ESTNDAR PUEDE SER UTILIZADO.
DEBE TENERSE EN CUENTA QUE A PESAR DE LA DESCALCIFICACIN COMPLETA, EL

HUESO, ESPECIALMENTE EL HUESO COMPACTO, CONTENDR REAS DENSAS QUE
REQUIEREN UN PROCESAMIENTO COMPLETO.
ES MEJOR USAR UN PROGRAMA QUE ES DEMASIADO LARGO O DEMASIADO CORTO.

ELECCIN DEPENDER DE LA NATURALEZA Y TAMAO DEL ESPCIMEN.
APLICACIN DE VACO DURANTE LA INFILTRACIN DE PARAFINA DEBE MEJORAR LA

CALIDAD DE LOS BLOQUES ACABADOS.
Una seccin de parafina
descalcificada de
peron (H & E). Observe
el tamao de la
muestra. Se descalcific
con un agente de cido
frmico usando una
prueba de punto final
qumico y luego se
proces a parafina
utilizando un programa
extendido. El macho de
13 aos de edad sufri
una fractura patolgica
de su peron derecho
despus de una cada.
La radiografa mostr
un aumento seo del
eje medio del peron
(R). El diagnstico
patolgico fue quiste
seo con fractura
patolgica. La seccin
Seccin de una muestra de granuloma en
la que se encontraron depsitos de calcio
inesperados (azul). Se podran haber
preparado secciones de mejor calidad si
se hubiera aplicado descalcificacin
superficial a este bloque.
SOLUCIONES Y
MEZCLAS
ABLANDADORAS
TIPO DE MATERIAL
CARTLAGO (VERTEBRADOS)
QUITINA (ARTRPODOS)
COMPOSICIN:
ABLANDAMIEN CARBOHIDRATOS MACROMOLECULARES
SALES DE CALCIO INSOLUBLES
TO DE PUEDE ABLANDARSE A MENUDO MEDIANTE
TCNICAS DE DESMINERALIZACIN EN
MATERIAL CIDOS O AGENTES QUELANTES
NO CALCREO EN EL CASO DE LA CAPA MS DURA DEL

EXTERIOR DE LA CUTCULA DE LOS
INSECTOS PUEDE ABLANDARSE CON
SOLUCIN DE HIPOCLORITO ALCALINO Y
REMOVIDA MEDIANTE DISECCIN
CUIDADOSA (HAAS, 1992)
PROTOCOLO MTODO PARA CORTES EN SERIE DE PARAFINA
DE DE 5 m DE INSECTOS U
ARTRPODOS CON UNA CUTCULA DURA.
OTROS
PROCESAMIEN FIJACIN DE CABEZAS Y ABDMENES DE Apis

TO DE mellifera, Eristalomyia tenax Y Tenebrio
molitor CON LQUIDO DE SCHAFFER
INSECTOS CON FORMALDEHDO 37-40% 40 mL
ETANOL 80-96% 80 mL
CUTCULA TIEMPO DE FIJACIN: 1-2 DAS
NO SE RECOMIENDA FIJAR MS TIEMPO
DURA (HAAS, TRANSFERIR TEJIDOS A ETANOL 80%
1992)
PROTOCOLO DESHIDRATACIN CON ETANOL AL 80%
DE ETANOL 90%
PROCESAMIEN DOS CAMBIOS DE 100% DE ISOPROPANOL (2

H CADA UNO)
TO DE MEZCLA ISOPROPANOL:PARAFINA (PUNTO DE

FUSIN 58C) A 60C 1:1 POR 12 H
INSECTOS CON INCLUIR EN PARAFINA DESPUS DE 12 HORAS
DE INFILTRACIN BAJO VACO PARCIAL A 60C.
CUTCULA SELLAR GRANDES ABERTURAS CORPORALES
DURA (HAAS, DE INSECTOS CON PARAFINA PARA EVITAR LA
INFILTRACIN DE SOLVENTES.
1992)
RETIRAR MANUALMENTE Y CON XILENO (15 MIN) PARAFINA
EXTERIOR
REHIDRATAR CUTCULA CON ISOPROPANOL 100% 15 MNUTOS
SEGUIR REHIDRATACIN CON ETANOL 100% (15 MIN).
TRATAR MUESTRAS CON SPUTOFLUOL (MERCK, MEZCLA DE

NaOH Y NaClO)
NaOH 5-10% ACUOSO (5-10 g EN 100 mL DE AGUA DESTILADA)
NaClO 5-10% ACUOSO (5-10 g EN 100 mL DE AGUA DESTILADA)
PREPARAR A PARTES IGUALES
LOS PREPARADOS SE VOLVERN BLANCOS O SU ENDOCUTICULACIN
INCOLORA SE PUEDE TEIR CON AZUL DE ANILINA HIDROSOLUBLE (C.I.
42755) DESPUS DE ENJUAGAR EN UNA SOLUCIN DE CIDO ACTICO AL
50% (V / V).
DESHIDRATAR CON ETANOL AL 100% (15 MIN)

CONTINUAR CON ISOPROPANOL AL 100% (15 MIN)
REINCLUIR EN PARAFINA.
MOLDEAR, CORTAR, TEIR Y MONTAR SEGN PROTOCOLOS

CONVENCIONALES
PROCESAMIENTO DE MADERA
COMPOSICIN MADERA:
CELULOSA
LIGNINA
DEPSITOS DE SLICA (SiO2)
DIFICULTAN EL CORTE EN OTROS TEJIDOS TAMBIN (HOJAS DE PASTO)
CIDO FLUORHDRICO (HF)

DISUELVE SLICA
PUEDE USARSE COMO ABLANDADOR DE TEJIDOS DUROS VEGETALES
CONCENTRACIN 15-60% SEGN GRADO DE DUREZA
TIEMPO DE USO: 12-36HRS (RUZIN, 1999)
PRESENCIA DE SILICATO DE CALCIO

AGREGAR UNA CANTIDAD PEQUEA DE CIDO SULFRICO (TOMASI Y ROVASIO, 1997)
PRECAUCIN EXTREMA EN EL USO DE SOLUCIN CONCENTRADA:
ANTIPARRAS
MASCARILLAS
GUANTES DE NITRILO O LTEX
DELANTAL
PREPARANDO EN CAMPANA DE EXTRACCIN DE GASES
TENER CARBONATO DE CALCIO O HIDRXIDO DE CALCIO EN POLVO PARA NEUTRALIZAR

DERRAMES
FLUORURO DE CALCIO ES INSOLUBLE Y NO ES PELIGROSO
SE REQUIERE PERSONAL CAPACITADO PARA MANEJO DE HF
CARLQUIST (1992) PREFIERE UNA SOLUCIN DE ETILENDIAMINA
SE DESCONOCE SU MECANISMO DE ACCIN
ORIGINALMENTE SE USA ETILENDIAMINA 4% PREVIO A DESCALCIFICAR MADERAS MUY DURAS
CON HF 24% (KUKACHKA, 1977)
ETILENDIAMINA [H2N(CH2)2NH2] 10 mL
SOLUCIN DE AGUA DESTILADA 90 mL
ETINELDIAMI

AGREGAR ETILENDIAMINA A AGUA
AGITAR Y ENVASAR EN FRASCO CON TAPA HERMTICA
NA PARA
ETILENDIAMINA ES LCALI CUSTICO
MANTNGASE TAPADO PARA REDUCIR LA ABSORCIN
DE CO2ATMSFRICO
ABLANDAR HERVIR MADERA O FIJARLA EN ALCOHOL
MADERA COLOCARLA EN ETILENDIAMINA POR 3 DAS

DESHIDRATAR Y ACLARAREN TER BUTANOL
(CARLQUIST,
INCLUIR EN PARAFINA
EXISTEN MLTIPLES PROTOCOLOS PROPORCIONADOS

1982) POR BERLYN Y MIKSCHE (1976), CARLQUIST (1982) Y
RUZIN (1999) PARA PROCESAR MUESTRAS DE TEJIDOS
DUROS VEGETALES
DESCALCIFICACIN:
PROCESO SENCILLO
PARA TENER XITO REQUIERE
CUIDADOSA EVALUACIN PRELIMINAR DEL

CONCLUSIO ESPCIMEN
NES FIJACIN MINUCIOSA
PREPARACIN DE REBANADAS DE GROSOR

RAZONABLE PARA SU FIJACIN Y
PROCESAMIENTO
ELECCIN DE UN DECALCIFICADOR
ADECUADO CON UN VOLUMEN ADECUADO,
CAMBIADO REGULARMENTE
CONCLUSIO CUIDADOSA DETERMINACIN DEL PUNTO
NES FINAL
PROCESAMIENTO MINUCIOSO UTILIZANDO UN

PROGRAMA ADECUADO.
SOLUCIONES Y MEZCLAS
ABLANDADORAS PARA
USO EN TACOS
HISTOLGICOS
DESCALCIFICACIN SUPERFICIAL
MTODO PARA TRATAR CON PEQUEOS DEPSITOS INESPERADOS DE CALCIO

QUE PUEDEN ENCONTRARSE EN BLOQUES DE PARAFINA.
NORMALMENTE DESPUS DE RECORTAR EL BLOQUE EN EL MICRTOMO

EXPONE PRESENCIA DE CALCIO EN LA MUESTRA TRAS DESBASTE Y CORTE.
IMPORTANTE
TRATAR DE EVITAR LA INTERRUPCIN DE LA SUPERFICIE DEL BLOQUE EXTENSIVAMENTE.
DESPUS QUE EL TEJIDO HA SIDO EXPUESTO

BLOQUE PUEDE RETIRARSE DEL MICROTOMO Y COLOCADO BOCA ABAJO EN UN
DESCALCIFICADOR CIDO DURANTE 15 - 60 MINUTOS.
TRATAMIENTO SUPERFICIAL PERMITIR QUE EL DESCALCIFICADOR PENETRE
UNA PEQUEA DISTANCIA EN EL BLOQUE Y DISUELVA EL CALCIO.
LAVADO POSTERIOR DEL BLOQUE EN AGUA

ELIMINA EL CIDO RESIDUAL, ENFRIAR Y SECCIONAR.
ENFRIAR Y CORTAR
SE REQUIERE REALINEAMIENTO CUIDADOSO DEL BLOQUE

DESCALCIFICADOR PENETRAR A UNA DISTANCIA MUY PEQUEA DENTRO DEL BLOQUE
PERMITE SLO TOMAR UN PAR DE CORTES.
ABLANDAMIENTO DE MUESTRAS
INCLUIDAS EN PARAFINA
TEJIDOS BLANDOS INCLUIDOS EN PARAFINA PUEDEN TENER ENDURECIMIENTO
EXCESIVO
CAUSAS:
DESHIDRATACIN INCOMPLETA
ACLARAMIENTO INCOMPLETO
DIFICULTAD DE CORTE POR RAZONES INDESCIFRABLES

PUEDE ENCONTRARSE MATERIAL ENDURECIDO EN LOS PREPARADOS AL MOMENTO
DE CORTAR EN MICRTOMO
SUMERGIR LA CARA DE CORTE EN AGUA POR 15-30 MINUTOS

AGUA INGRESA EN TEJIDOS Y PRODUCE ABLANDAMIENTO EN UN ESPESOR DE 500 m DEL
BLOQUE
PREFERIBLE USAR AGENTES ABLANDADORES (WYNNCHUK, 1992)
ETANOL
GLICEROL
FENOL
AGENTE ABLANDADOR DE HOME

ETANOL 95% 476 mL
GLICEROL 160 mL
ACETONA 40 mL
FENOL LQUIDO (SOLUCIN ACUOSA 80%) 40 mL
CONSULTAR PAPER DE SANDERSON 1994
USO DE AGUA O MEZCLAS ABLANDADORAS A BAJA TEMPERATURA (0- 4 C)

ENDURECIMIENTO PARAFINA
FACILITA CORTE
AGUA ACETIFICADA 1-2%
CIDO ACTICO GLACIAL 1-2 mL
AGUA DESTILADA 98-99 mL
AGREGAR EL CIDO ACTICO AL AGUA DESTILADA

AGITAR Y ENVASAR EN FRASCO CON TAPA HERMTICA
PUEDE UTILIZARSE A TEMPERATURA AMBIENTE O A 0-4 C
TIEMPO DE USO : 2-5 MINUTOS
SE UTILIZA PARA ABLANDAR SUPERFICIE DE TACOS HISTOLGICOS CON

MICROCALCIFICACIONES
DURACIN: APP 1 MES
RENOVAR CUANDO APAREZCAN SIGNOS DE CONTAMINACIN CON HONGOS
HIDRXIDO DE SODIO 0.1 N ACUOSO
(ABLANDADOR ALCALINO DE TEJIDOS DENSOS,
MIOMAS)
HIDRXIDO DE SODIO KOH (P.M. 56,0156 g/mol) 5,6 g
AGREGAR EL HIDRXIDO DE SODIO AL AGUA DESTILADA
DISOLVER AGITANDO Y ENVASAR EN FRASCO CON TAPA HERMTICA
PUEDE UTILIZARSE A TEMPERATURA AMBIENTE O A 0-4 C
TIEMPO DE USO : 2-5 MINUTOS
SE UTILIZA PARA ABLANDAR SUPERFICIE DE TACOS HISTOLGICOS DE TEJIDOS

FIBROSOS, MIOMAS
DURACIN: APP 1 MES
RENOVAR CUANDO APAREZCAN SIGNOS DE CONTAMINACIN CON HONGOS
REFERENCIAS
RDENES G, ALLIENDE C (2017). TCNICAS DE HISTOQUMICA. UNIVERSIDAD DE
CHILE
LEIVA S, ALIENDE C, GRAAF M E (1983). MANUAL DE TCNICAS HISTOLGICAS.

UNIVERSIDAD DE CHILE.
Kiernan, J A (2015). HISTOLOGICAL AND HISTOCHEMICAL METHODS. 5TH

EDITION. SCION
KUMAR, GL; KIERNAN, J A (2010). SPECIAL STAINS AND H&E. DAKO
BANCROFT, (2013). THEORY AND PRACTICE OF HISTOLOGICAL TECHNIQUES.

ELSEVIER
ROLLS, G (2013). DIFFICULT BLOCKS AND PROCESSING. LEICA
HTTP://STAINSFILES.INFO LTIMA CONSULTA 01-05-2015 22:05 HRS
KUKACHKKA B F (1977). SECTIONING REFRACTORY WOOD FOR

ANATOMICAL STUDIES.
CALLIS G, STERCHI D (1998).DECALCIFICATION OF BONE: LITERATURE

REVIEW AND PRACTICAL STUDY OF VARIOUS DECALCIFYING AGENTS,
METHODS, AND THEIR EFFECTS ON BONE HISTOLOGY. THE JOURNAL
OF HISTOTECHNOLOGY VOL 21 N 1. PP 49-58

Descalcificación y Desmineralización

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DESCALCIFICACIN Y

AS MEC AMORFA RETIENE AGUA Y

. NO MUESTRA UNA APARIENCIA

REFLEJA ESTRUCTURA LAMINAR DEL

CANALES DE RESORCIN EN HUESO

EJES MAYORES ORIENTADOS EN LA MISMA

ESPACIOS CONTNUOS DENTRO DE

EN UN HUESO VIVO, ESTN

Degenerative processes such as

Dentina: 70% inorgnica

Cemento: 45-50% inorgnica

CADA TCNICA DEBE SER ENSAYADA Y EVALUADA PARA PRESERVAR LA MORFOLOGA Y

DESCALCIFICACIN: PRIMER MTODO POST-FIJACIN, EN ORDEN CRONOLGICO DE LA

PRECAUCIN: ASEGURARSE DE QUE EL TEJIDO HA SIDO ADECUADAMENTE FIJADO Y BIEN

SE LLEVA A CABO DESPUS DE QUE LA MUESTRA HA

AL ELEGIR UNA TCNICA Y UN MTODO DE PROCESAMIENTO, DEBE

POR EJEMPLO, SI SE EST INVESTIGANDO UNA ENFERMEDAD SEA

DESPUS DE LA FIJACIN SE PUEDE ASERRAR DIRECTAMENTE EN OBLEAS FINAS Y LUEGO

TAMBIN ES POSIBLE PREPARAR ESPECMENES SEOS INFILTRNDOLOS CON RESINAS

A CONTINUACIN, PUEDE PRODUCIR SECCIONES DE TIERRA DE LOS ESPECMENES

EXPOSICIN PROLONGADA A AGENTES DECALCIFICANTES

ES IMPERATIVO LAVAR EL CIDO DEL TEJIDO

PREFERIR AGENTE QUELANTE A UN CIDO

DECALCIFICACIN POR EDTA:

MUCHO MS COMNMENTE EL HUESO Y OTROS ESPECMENES CALCIFICADOS SON

LAS SECCIONES DESCALCIFICADAS SE UTILIZAN PARA EL EXAMEN DE LA MDULA

LOS ESPECMENES PUEDEN ESTAR EN FORMA DE TRPANOS DE CRESTA ILACA O

APARTE DEL HUESO, OTROS TEJIDOS PUEDEN SUFRIR CALCIFICACIN

SI LAS REAS CALCIFICADAS EN LAS MUESTRAS DE TEJIDO SON SUSTANCIALES,

EL PROCEDIMIENTO DE DESCALCIFICACIN ES RELATIVAMENTE

SIN EMBARGO, SI SE OBTIENEN RESULTADOS DE ALTA CALIDAD,

EN LA MATRIZ EL CALCIO EST EN FORMA DE CRISTALES DE

ESTOS CRISTALES SE DISUELVEN DURANTE EL PROCESO DE

EL HUESO ESPONJOSO, TRABECULAR O ESPONJOSO TIENE UN ARREGLO MUCHO MS DELICADO QUE

SE LOCALIZA EN LA VRTEBRA Y EN LA EPFISIS DE LOS HUESOS LARGOS (FIGURA 4).

TANTO EL HUESO COMPACTO COMO EL HUESO ESPONJOSO SE DESARROLLAN EN CAPAS O LMINAS

POR EJEMPLO, LA MUESTRA DE TRPANO DE LA CRESTA ILACA CONSISTE EN UN

EL HUESO CORTICAL SER EL LTIMO EN RENUNCIAR A SUS SALES DE CALCIO

ES IMPORTANTE PROPORCIONAR UN ACCESO FCIL PARA QUE EL FIJADOR PENETRE EN EL

SE DEBEN USAR SIERRAS DE ALTA CALIDAD PARA PREPARAR TROZOS DE HUESO.

LAS SIERRAS GRUESAS PUEDEN CAUSAR UN DAO MECNICO CONSIDERABLE Y FORZAR

LA FORMALINA TAMPONADA ES UN FIJADOR SATISFACTORIO PARA EL HUESO, PERO

ESTOS PROCEDIMIENTOS REQUIEREN EXPECIENCIA Y

ABLANDAMIENTO DE MATERIAL DURO RICO EN SILICA O QUE

EXISTEN MTODOS DE PROCESAMIENTO VEGETAL

LA CONCENTRACIN DE AGENTE ACTIVO SE AGOTAR, YA QUE SE COMBINA CON CALCIO

CIDOS FUERTES PUEDEN SERVIR COMO

NO SE RECOMIENDA UTILIZAR AQUELLOS QUE

LA REACCIN SE DESPLAZA DE IZQUIERDA A

SI EL LQUIDO QUE RODEA A LA MUESTRA

LA REACCION EST DESPLAZADA DE

RECAMBIO FRECUENTE DE SOLUCIN DESCALCIFICADORA

RED CRISTALINA HIDROXIAPATITA SEA Y DENTARIA

EN TEJIDO MINERAL HAY UN PEQUEO PORCENTAJE DE

LA FRMULA MUESTRA SU DISOLUCIN POR CIDOS

GENERALMENTE NO PRODUCEN SIGNOS DE DAO VISIBLE AL MICROSCOPIO

MAYORA DE ENZIMAS SON INACTIVADAS POR DESCALCIFICANTES CIDOS

ESTRUCTURA TISULAR LEVEMENTE ALTERADA

INMUNOHISTOQUMICA ES AFECTADA POR DESCALCIFICACIN

REDUCCIN O PRDIDA DE TINCIN CITOPLASMTICA POR COLORANTES CATINICOS

REMOCIN DE PURINAS Y PIRIMIDINAS DESDE EL ESQUELETO DE FOSFATOS Y

DEBE SER PRECEDIDO DE UNA ADECUADA FIJACIN Y

NO DEBEN PRESENTAR CAMBIOS EN LA PRESIN OSMOTICA

CAMBIO DE SOLUCIN DIARIAMENTE