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Sebastiano Messineo

Dottorato di ricerca in Biomarcatori


delle Malattie Croniche e
Complesse XXII ciclo
Sovrappeso ed obesit sono definite come un accumulo
anormale o eccessivo di grasso che presenta un rischio per
Obesit la salute (WHO).

Il tessuto adiposo non pi considerato come una mera


riserva di lipidi ma come un organo endocrino in grado di
produrre biomolecole (adipochine)

Lespressione differenziale delle adipochine caratterizza


lobesit sotto il profilo dellinsulino resistenza,
dellinfiammazione e della angiogenesi.

Introduzione
Il tessuto adiposo pu essere scarsamente ossigenato.

Ipossia Ipertrofia vs Iperplasia negli adipociti.

Gli Hypoxia Inducible Factors (HIFs) hanno ruolo chiave rella


regolazione della risposta adattativa allipossia.

Trayhurn Annu. Rev. Nutr. 2014. 34:20736

Introduzione
E un fattore architetturale di trascrizione

HMGA1 Prende parte a svariati processi cellulari

Ha un ruolo attivo nel differenziamento adipocitario

Viene indotto da ipossia ma la relazione con HIF1 non


stata ancora chiarita.

Introduzione
SCOPO DELLO
STUDIO
Lo studio si propone di approfondire la
regolazione trascrizionale dei geni della
visfatina e del fattore di crescita vascolare
endoteliale (VEGF) da parte di HMGA1.

HIF1 gi stato descritto come fattore


attivante la trascrizione di questi due geni;
abbiamo ipotizzato che linterazione di
HMGA1 sia necessaria per il corretto
assemblaggio del macchinario proteico di
trascrizione.

Introduzione
Colture cellulari

HEK 293a in coltura con DMEM + FBS al 10%

3T3L1 in coltura con DMEM + FBS al 10% (preadipociti).


Differenziate in adipociti seguendo il metodo proposto da
Jang et al. Proc Natl Acad Sci USA (2000)

Ipossia chimica ottenuta mediante somministrazione di


CoCl2 100M

Incubazione con O2 al 2% mediante incubatore New


Brunswick Galaxy 48R, Eppendorf

Materiali e metodi
qRtPCR
Tecniche
Molecolari Western Blot/CoIp

ChIP

Trasfezione di vettori plasmidici/ siRNA

pGl3- pcDNA3- pGl3-VEGF


vis2025 HIF1

Atsunori Gregg Noreen


Fuckuhara Semenza Sheehy
Osaka University John Hopkins Scool University College
of Medicine Dublin

Materiali e metodi
Studio dei
promotori

Risultati
Espressione
genica

Risultati
Attivit del
promotore

Risultati
Interazione HIF1-
HMGA1

Risultati
ChIP

Collas,
Risultati
2010
Regolazione
promotore del
VEGF

HIF1

POL
HMGA1

+1

Conclusioni
Regolazione
promotore della
Visfatina

HIF1

HMGA1
POL
HIF1

+1

Conclusioni
Ergo.
HMGA1 e HIF1 interagiscono fisicamente.

Tale interazione non ha uno schema fisso ma si differenzia


nei due geni presi in esame.

Lidentificazione dei networks di espressione genica


coinvolti nella disfunzione della cellula adiposa
rappresentano un difficile ambito di ricerca che pu
migliorare la conoscenza della fisiopatologia dellobesit e
delle sindromi ad essa associate.

Conclusioni
Fernando Botero
Family scene
1969