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mtodo de Sanger.
Jessica Cortes Pegueros.
Luis Miguel Martnez Hernndez.
Mayra Soleil Ricrdez Vadillo.
Cruz Liliana Velzquez Velzquez.
Secuenciacin
1. Corte de las purinas: las purinas (A y G) se metilan con dimetil sulfato (DMS).
Despus la reaccin es tratada en condiciones alcalinas, la cadena de DNA se
fragmentar en las purinas metiladas.
2. Corte de adeninas: las purinas se tratan con un acido diluido para favorecer el
corte de adeninas metiladas. Despus de un tratamiento alcalino las guaninas son
cortadas.
3. Corte de pirimidinas: Esta reaccin utiliza el reactivo hidracina, que corta las
bases citosina y timina. Posteriormente, se trata con piperidina para completar la
reaccin.
4.- Con este mtodo se generan fragmentos de ADN de todos los tamaos
posibles que se puedan distinguir entre s, por el tipo de marcaje que llevan o
por la incorporacin de un terminador especfico.
Cebador o "primer"
Oligonucletido corto de alrededor de 20 bases
secuencia complementaria al vector empleado
suele marcarse radiactivamente o con fluorescencia
Nucletidos trifosfato
dATP, dCTP, dGTP y dTTP
Nucletidos didesoxi
ddATP, ddTTP, ddCTP y ddGTP
Han perdido el grupo hidroxilo de la posicin 3'
Mtodo electroforesis capilar en gel
Mtodo electroforesis en gel de acrilamida
Preparar 4 tubos diferentes Se separan por tamaos
con: 4 nucletidos trifosfato, Produccin de molculas de
mediante electroforesis en
ADN polimerasa I ADN de nueva sntesis de
geles verticales de
diferente longitud marcadas
un cebador marcado acrilamida muy finos (0,5
todas radiactivamente por el
radiactivamente mm de espesor) y de gran
extremo 5
un nucletido didesoxi longitud (cerca de 50 cm)