Cintica e

regulao
enzimtica
IST FML
2 Semestre
2007/2008

Trabalho realizado
por:

Miguel Amador
n58484
Joana Nunes n58497
Joo Marques n58513
 Cintica Enzimtica

Estrutura Constituio em
Enzimtica Aminocidos
influencia
m

Mecanismos de Aco
Enzimtica

So difceis de definir
quantitativamente
Pelo necessrio
que

Determinar constantes da reaco

catalisada
 Cintica Enzimtica

Cintica
Enzimtica

Estudo da velocidade de uma reaco qumica que ocorre na

presena de um enzima

Permite elucidar sobre:

Os pormenores do mecanismo cataltico das enzimas
O papel das enzimas no metabolismo
Controle da actividade
Mecanismos de inibio
 Velocidade vs.
Concentrao
A concentrao de substrato influencia a velocidade de
uma reaco
Estudo da relao entre a concentrao e a
velocidade:
. No inicio da reaco a quantidade de substrato
constante, j que a quantidade de substrato muito maior
do que a de enzima.
.Determina-se a velocidade inicial de reaco, V o ,para uma
determinada [S].
.Obtm-se valores para vrias concentraes de substrato,
mantendo constante a concentrao de enzima.

Assim podemos traar os valores num grfico, em que

exprimimos Vo como funo de [S]
 Velocidade vs.
Concentrao

Dados:
Para [S] baixas, Vo aumenta quase linearmente
Para [S] maiores, Vo aumenta mais gradualmente
Para [S] mais elevadas, atinge-se uma velocidade mxima, V mx.
 Equao de Michaelis-
Menten
Comportamento explicado pela formao do complexo
enzima-substrato ES
1. O enzima liga-se ao substrato reversivelmente formando
o complexo ES
Reaco
rpida

2. O complexo ES dissocia-se em enzima livre e produto

da reaco
Reaco
mais
lenta
.A reaco 2, mais lenta, limita a velocidade global da
reaco.
.A velocidade proporcional concentrao do
complexo ES.
.A cada momento o enzima existe na forma livre e no
complexo ES.
.A velocidade mxima (Vmx) da reaco ocorre quando todos os
enzimas esto associadas a molculas de substrato.
 Deduo da Equao Michaelis-
Menten
A curva que representa a relao entre [S] e Vo tem forma
idntica para a maior parte dos enzimas. Esta curva pode ser
descrita algebricamente pela equao de Michaelis-Menten.

A equao de Michaelis-Menten

Hiptese: o passo limitante da velocidade das reaces enzimticas

a desassociao do complexo ES
 Deduo da Equao Michaelis-
Menten
Presuposto: no h transformao de produto em substrato

Reaces de formao e desassociao do complexo ES:

Vo pode ser considerado como a velocidade com que ocorre a

quebra da ligao ES

No fcil determinar [ES]!

[ET] - concentrao total da
enzima
A concentrao de enzima livre , assim, [ET]-[ES]
 Deduo da Equao Michaelis-
Menten
.Passo 1

Velocidade de formao de ES
Velocidade de degradao de ES
.Passo 2
[ES] constante, ou seja, a velocidade de degradao e formao de
ES so iguais.

.Passo 3
 Deduo da Equao Michaelis-
Menten

.Passo 4
Obtemos Vo,
substituindo [ES]

A velocidade mxima quando [ES]=[ET]!

Equao de Michaelis-
Menten
 Anlise da Equao Michaelis-
Menten
A equao de Michaelis-Menten, que nos d a relao
quantitativa entre a velocidade inicial V0, a velocidade mxima
Vmx e a quantidade inicial de substrato [S], todas relacionadas
pela constante de Michaelis Km
Km unidades de
concentrao
No caso de V0 ser exactamente metade de
Vmax:

Km corresponde concentrao de substrato para a qual V 0 metade da

velocidade mxima
 Anlise da Equao Michaelis-
Menten
A equao de Michaelis-Menten muito til para determinar os valores
de Km e Vmx das reaces.

Os enzimas que exibem uma dependncia hiperblica de V0 em funo de [S]

diz-se que seguem a cintica de Michaelis-Menten.

Enzimas cujo mecanismo obedea s duas reaces anteriores podemos dizer

que o valor de Km est relacionado com a afinidade do enzima para o
substrato, e logo diferente de substrato para substrato e de enzima para
enzima.

O Vmx a velocidade mxima que a reaco pode alcanar, na situao

virtual em que todos os enzimas se encontram ligados ao substrato.
 Equao de Lineweaver-
Burk

Podemos transformar a equao de Michaelis-Menten,

invertendo-a:

Esta forma da equao de Michaelis-Menten chama-se equao de

Lineweaver-Burk
 Equao de Lineweaver-
Grfico de 1/[V ] em funo
0
Burk
de 1/[S]

Obtm-se uma
funo linear!

.Esta recta tem um declive Km/Vmx

.A interseco da recta no eixo 1/V0 corresponde ao valor 1/Vmx
.A interseco com o eixo 1/[S] corresponde a -1/Km

Permite uma determinao de Vmx

precisa!
 Inibio enzimtica

Reversvel
Competitiva

Anti-Competitiva

Mista

Irreversvel
 Inibio Reversvel
Competitiva

H competio pelo centro activo do enzi

O inibidor estruturalmente semelhante
substracto
A inibio pode ser contrariada adicionan
mais substracto ao meio

O Km aumenta e o Vmax no se altera

Inibio Reversvel
Competitiva
Inibio Reversvel
Competitiva
Inibio Reversvel
Competitiva
 Inibio Reversvel Anti-
Competitiva

O inibidor liga-se a um local especfico do

enzima (que no o centro activo)

O inibidor liga-se apenas ao complexo ES

formando o complexo ESI

O Km diminui e o Vmax diminui

Inibio Reversvel Anti-
Competitiva
Inibio Reversvel Anti-
Competitiva
Inibio Reversvel Anti-
Competitiva
 Inibio Reversvel Mista

O inibidor liga-se a um local especfico do

enzima (que no o centro activo)

O inibidor liga-se tanto ao enzima livre

como ao complexo ES

Vmax diminui

Km pode aumentar, diminuir ou manter-s

Inibio Reversvel Mista
Inibio Reversvel Mista
Inibio Reversvel Mista
 Inibio Reversvel

Quando = , a Inibio Mista tem o nome de

Inibio No Competitiva
 Inibio Irreversvel

O inibidor combina-se permanentemente

enzima de uma das seguintes formas:

Ligao covalente

Destruio de um grupo funcional essencial ao

funcionamento do enzima

Ligao no covalente particularmente estvel

 Hexocinase

A hexocinase fosforila a glucose para glucose-6-

Reaco ocorre com consumo de ATP juntament

com um io Mg2+

O Km para a glucose 0.1mM, e a concentrao

glucose na clula 4mM

A hexocinase regulada alostericamente pelo

produto da sua prpria reaco
 Hexocinase

A hexocinase uma enzima do tipo indutivo

 Hexocinase

Fosforilao impede a sada de glucose da clu

 Hexocinase

Reaco catalisada pela hexocinase

 Hexocinase

No fgado tambm existe uma hexocinase, mas

menor afinidade para com a glucose

Esta s est activa quando a concentrao de

glucose no sangue muito elevada

Quando a concentrao de glucose no sangue

o fgado no compete com outros tecidos

No fgado, a glucose convertida em glicognio

 Hexocinase

A fosforilao da glucose reversve

A converso da glucose-6-fosfato em
glucose ocorre no fgado durante a
gluconeognese.
 Enzimas Reguladores

Enzimas que aumentam ou

diminuem a sua actividade em
reaco a determinados factores.
Fazem normalmente parte de
sequncias metablicas.

Permitem regular a actividade de toda

a sequncia metablica e possibilitam
clula ajustar-se s suas
necessidades energticas e
biomolculares.
 Tipos de Moduladores

Mecanismos que regulam a actividade

enzimtica:
Variao da concentrao de
substrato
Variao de pH e temperatura
Inibio enzimtica

Modulao alostrica
Modulao
covalente
 Modulao alostrica
Ocorre em enzimas que possuem um local de
modulao alostrico
Heterotropismo Homotropismo
(o modulador (o modulador
diferente do igual ao
substrato) substrato)

Modulador
alostrico

Positivo Negativo
(activam o (inibe o
enzima) enzima)
A ligao entre o modulador e o enzima no-covalente e o local de
modulao especifico para cada modulador, no caso dos enzimas
heterotrpicos
 Modulao alostrica

Indu
z:
Modificaes Modifica a afinidade do
conformacionais na enzima para com os
estrutura espacial do seus substratos
enzima
Modulao alostrica

Um modelo muito comum

de regulao alostrica
a inibio por
retroalimentao, onde o
prprio produto da
reaco actua como
modulador da enzima que
a catalisa.
 Cintica

No seguem a
cintica de Michaelis-
Menten
Comportamento
sigmide
[S] para a qual
V0=Vmx/2 no
corresponde ao Km

O comportamento sigmide explicado pela interaco entre as

subunidades das protenas, j que mudanas estruturais numa
subunidade so transferidas para as adjacentes, atravs de
interaces no covalentes entre elas.
 Cintica

Enzimas homotrpicas pequenas variaes na

concentrao do modulador podem provocar grande
variaes na actividade do enzima.

Enzimas heterotrpicas dificil generalizar a

forma como se comportam . Apresentam uma
grande variabilidade no comportamento.
Cintica
 Modulao covalente

Grupos adicionados ou retirados do enzima

atravs de modificaes covalentes

Fosforilao
Adenilao
Urinilao
ADP-
ribosilao
Metilao
 Fosforilao

Ligao de um grupo Fosforil a determinados resduos

de aminocidos
catalisada por quinases
um processo reversvel
Fosfatase remove os grupos fosforil
adicionados
 Fosforilao

O grupo
fosforil:
Influencia a Permite o
polaridade estabelecimento
dos aminocidos de pontes
hidrogeninicas

Importantes para a
estrutura e conformao
da molcula
 Adenilao

adicionado um grupo Adenil

tirosina
 Uridilao

adicionado um grupo uridil

tirosina
 ADP-Ribosilao
acresentada uma ADP-Ribose, com incidncia nos
resduos Arginina, Glutamina, Cistena e Histidina
alterada (diftamida-a)
 Metilao

adicionado um grupo metil em resduos de

glutamato
 Zimognios

A regulao enzimtica pode passar ainda pela

existncia de um precursor, sem capacidade
cataltica, que, no caso das proteases, so
chamados zimognios.

Zimog Clivagem Enzima

proteoltica
nio activa