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MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS DE CULTIVO

Mezcla de sustancias
nutritivas que permiten el
crecimiento de
microorganismos a partir
de muestras biolgicas
En el mercado se encuentran
en forma deshidratada.
Se preparan de acuerdo a
las normas del fabricante.
Se sirven en placas o en
tubos.
MEDIOS DE CULTIVO
MEDIOS DE CULTIVO
En el cultivo de grmenes adems de los
nutrientes, se tiene en cuenta factores
ambientales externos de crecimiento.

El xito en el aislamiento de microbios,


depende de la eleccin adecuada del
medio de cultivo, de los factores externos
de incubacin, de la calidad de la muestra
y a la pericia del procesador.
COMPONENTES DE LOS MEDIOS
DE CULTIVO
Sustancias Orgnicas: las mas comunes
son: azucares, aminocidos, vitaminas,
factores estimulantes, factores de
crecimiento.
Sustancias Inorgnicas: los minerales :
Macro nutrientes: Ca, Na, Cl, K,
Mg , S, P. Micronutrientes: Cu, F, Co, Zn, Fu,
Cr, Mn, Sn.
Agar Agar : carbohidrato obtenidos de
algas marinas, se usa como gelificante.
FACTORES AMBIENTALES DE LOS
MEDIOS
Temperatura: Cada grupo de germen tiene su
temperatura optima de crecimiento, los grmenes
patgenos crecen a 35 C, +- 2C.
Humedad: el agua disponible optima para el
crecimiento de las bacterias es de 0.93, para las
levaduras: 0.90 y mohos:0.75.
Oxigeno: muchas bacterias necesitan O2.
PH: el optimo es de 6.8 a 7.5.
CO2: algunos grmenes necesitan entre 2 y 10
%.
Luz: la mayora de grmenes crecen en
oscuridad
CLASES DE MEDIOS DE
CULTIVO

A los medios de cultivo se los


clasifica segn:
Segn su origen.
Segn su consistencia.
Segn su utilidad
MEDIOS: SEGN SU
ORIGEN
Medios Artificiales: llamados sintticos o
definidos: se conoce sus componentes.
Estos medios se fabrican en laboratorios adecuados
por molienda y deshidratacin, se los envasa en
frascos para la venta en el mercado.
Hay diversidad de este tipo de medios, lo cual
depende del grupo o tipo de bacteria que se quiere
aislar.
Medios Naturales: Son preparados de sustancias
naturales, se desconoce su composicin qumica.
Medios Semisintticos: en su composicin lleva
sustancias conocidas como sustancias desconocidas
SEGN SU
CONSISTENCIA
Medios lquidos: son los caldos , en su
composicin no lleva agar, contiene productos
crnicos o proteicos con un PH adecuado,
ejemplo: caldo nutritivo, tioglicolato, selenito,
agua peptonada, caldo enterococo.
Medios Slidos: Llevan en su composicin
agar, sustancia gelificante; los grmenes crecen
formando colonias circulares, estos medios se
sirven en placas petri o en tubos de ensayo.
Medios Semislidos: son blandos en su
composicin llevan poca cantidad de agar.
Ejemplo SIM, MIO.
CLASIFICACION: SEGN SU
UTILIDAD
Medios de aislamiento Primario.
Medios Diferenciales
Medios de Transporte.
Medios de Conservacin
MEDIOS DE AISLAMIENTO
Medios Comunes: llamados multipropsito, crecen
grmenes no exigentes, tanto gram positivos como
Gram negativos, hongos filamentosos y levaduras:
agar comn, caldo nutritivo, agua peptonada.
Medios de Enriquecidos: llevan en su
composicin suplementos que favorecen el
crecimiento y desarrollo de bacterias exigentes:
agar sangre, agar chocolate,
Medios Selectivos: Llevan en su composicin
sustancias que inhiben el desarrollo de ciertos
microorganismos favoreciendo el desarrollo de otros
ejemplo: agar MacConckey, SS, agar Azida, agar
TCBS, agar manitol.
MEDIOS DIFERENCIALES
Llamados tambin identificadores, sirven
para identificar a las bacterias a nivel de
genero o especie; en su composicin llevan
sustratos especficos y un indicador; si la
bacteria utiliza el sustrato por tener la
enzima respectiva, produce una serie de
metabolitos lo cual se evidencia por cambio
de color del medio o por el crecimiento del
germen.
Ejemplo: TSI, LIA, urea, citrato , SIM, Manitol
MEDIOS DE TRANSPORTE
Conservan y aseguran la viabilidad de las
bacterias en las muestras biolgicas, cuando
no se las cultiva al momento o cuando se las
tiene que transportar de los lugares de toma
de muestra hasta el laboratorio.
Estos medios, son pobres en nutrientes,
semislidos y altamente re ductivos, hay
nula o baja multiplicacin de las bacterias.
Cary Blair, Amies, Stuart.
MEDIOS DE CONSERVACION

Mantienen la viabilidad y estabilidad


fenotpica y genotpica de las bacterias por
largos periodos de tiempo.
Se guardan a temperatura ambienten o a
temperatura de refrigeracin o
congelacin.
Ejemplo: Caldo Glicerol, Agar Soya
Tripticasa, Agar Papa, Agua estril, Leche
Descremada.
PREPARACION DE MEDIOS DE
CULTIVO
Los pasos de la preparacin de medios
son:
Disolucin del medio.
Esterilizacin.
Adicin de suplementos.
Medida del pH.
Dispensacin o vertido.
Almacenamiento.
Control de Calidad.
Eliminacin
PREPARCION DE MEDIOS DE
CULTIVO
1- DISOLUCION DEL
MEDIO
Los medios de cultivo vienen deshidratados
Prepararlos de acuerdo las indicaciones del
fabricante (instrucciones del inserto).
Pesar exactamente la cantidad requerida.
Disolver en agua destilada neutra (pH: 7),
utilizando calor con agitacin continua.
Distribuir los medios en balones, tubos o
petris, empacarlos y rotularlos
adecuadamente.
DISOLUCION DEL MEDIO
DISOLUCION DEL MEDIO
2- ESTERILIZACION

El mtodo empleado es por calor hmedo


(auto clavado), salvo contraindicacin.
Debe de respetarse las instrucciones de
esterilizacin del fabricante
Generalmente la temperatura usada es de
121C , 15 libras de presin y T: 15
minutos.
3- ADICION DE ENRIQUECEDORES
Y SUPLEMENTOS

Los factores de crecimiento y suplementos


lbiles al calor se agregan despus de la
esterilizacin para evitar el deterioro.
La temperatura a la cual se agrega estas
sustancias a los medios slidos es de 50 a
45 C. y a los medios lquidos es a
temperatura ambiente.
4- MEDIDA DEL pH
El pH de los medios de cultivo se mide
despus de la esterilizacin y cuando alcanzan
un temperatura de 45 a 50 C.
El pH se mide sacando una muestra de 50 ml
del medio estril y cuando alcanza
temperaturas de 45 a 50 C atreves de un
electrodo de arrastre.
El pH indicado es de 7.2 a 7.4 si hay exceso o
defecto agregar gotas de NaOH o HCl 0.1 N,
hasta alcanzar el pH exacto; sacar las
cantidades de estas sustancias para aadir
exactamente al frasco original del medio.
5- DISPENSACION O
VERTIDO
Los medios de cultivo slidos se sirven a
temperaturas de 40 a 45 C.
Los medios se vierten en placas y tubos
estriles en cantidades estndares, segn
sus dimensiones.
Para placas de 9 cm de dimetro se emplea
28ml de medio, para placas de 10 cm, 30
ml, para tubos de TSI se emplea 5 ml, para
tubos de SIM 3 ml y para tubos de urea y
citarto 3ml de medio.
DISPENSACION DE MEDIOS DE
CULTIVO
DISPENSACION DE MEDIOS DE
CULTIVO
6- ALMACENAMIENTO
Los medios de cultivo se conservan a
temperaturas de 2 a 8 C. ( refrigeracin ).
Los slidos se guardan invertidos par evitar
ser mojados con el agua de evaporacin.
Colocar los medios en bolsas plsticas y
sellarlas para alargar el tiempo de vida.
Los tubos con tapa de algodn duran 3
semanas, con tapa rosca 3 meses, las placas
petri 3 semanas con bolsa plstica 2 meses.
7- CONTROL DE LOS MEDIOS
DE CULTIVO
Control de la Esterilidad: Se toma una
muestra del 5 al 10 % del lote preparado, se
incuba a 35 C por 48 horas, el nmero de
colonias que crecen debe ser menor al 10 % del
lote controlado (-de 2 colonias ).
Control del Rendimiento: se siembra una
cantidad cuantificada de bacterias conocidas, se
hace un suspensin de la bacteria a testar igual
a la turbiedad del tubo 0.5 de la escala de Mac
Farland, se siembra con asa calibrada el
crecimiento debe ser bueno a excelente,
comparado al de un medio conocido.
CONTROL DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO
8- ELIMINACION DE LOS
CULTIVOS
Los medios de cultivo usados, se eliminan
inactivados, para evitar la contaminen
ambiental.
Los mtodos usados para inactivar medios
de cultivo con crecimiento bacteriano son:
Sustancias desinfectantes: se emplea 10
ml para placas y 5 ml para tubos se deja 3 a 6
horas los mas usados son fenol al 5 % y lega.
Auto clavado: usar bandejas de metal.
Cremacin: se realiza en incineradores.
MEDIOS DE PRINCIPALES MEDIOS
CULTIVO

NUTRITIVOS gua peptonada, agar nutritivo, caldo


nutritivo.

ENRIQUECIDOS Agar sangre, agar chocolate.

SELECTIVOS Mac Conkey, telrica, agar Saboraud,


Lowenstein-Jensen, Selenita F , SS,
Corazon-cerebro, Tayer Martin, TSI, LIA.
DIFERENCIALES Carbohidratos, agar con urea, agar con
citrato, gelatina, descarboxilasa,

TRANSPORTE Stuart, Amies, Tansgrow, Cary y Blair.


Control de calidad de medios de cultivo
Probar cada lote de medio con cepas conocidas.
MEDIO ORGANISMO REACCIONES
CONTOL ESPERADAS
AGAR MAC Escherichia coli Colonias rojas
CONKEY
Proteus mirabilis Colonias incoloras

Agar Salmonella Salmonella Colonias incoloras


Shigella enteritidis con centros
Agua peptonada Escherichia coli negros
Siempre rojo
(Indol)
Klebsiella No rojo
neumona
Motilidad Proteus Mirabilis Mvil

Klebsiella No mviles
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS
DE CULTIVO SEGN EL INDICADOR
MEDIOS DIFERENCIALES: Clasificados Segn el Indicador

Triple Sugar Iron Agar (TSI) Rojo Fenol

Triple Hierro Lisina( LIA) Purpura Bromocresol

Urea Rojo Fenol

SIM Sulfuro, indol y movilidad

Citrato de Simmons Azul de Bromotimol


MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS
SEGN MUESTRA BIOLOGICA:
HOSPITAL ALMENARA

Protocolos de siembra de muestras


biologicas utilizados en el Servicio de
Microbiologa del Hospital Nacional
Guillermo Almenara Irigoyen Lima
Per, ao 2011.
ORINA HERIDAS
Agar Sangre Agar Sangre
Agar Mac Conkey Agar Mac Conkey

SECRECIN FARINGEA SECRECIONES TRACTO


Agar Sangre de Carnero RESPIRATORIO
INFERIOR
(Esputo, aspirado endotraqueal,
SECRECIN FARINGEA en Fibrosis BAL y otros)
Qustica Agar Sangre de Carnero
SENOS PARANASALES Agar Chocolate
Agar Sangre de Carnero Agar Mac Conkey
Agar Chocolate
Agar Mac Conkey

SECRECION OCULAR,
SECRECION NASAL: Cultivo CONJUNTIVAL,
especifico para: SECRECION DE OIDO
Staphylococcus aureus : AS Agar Sangre de Carnero
Klebsiella rhinoscleromatis : MC Agar Chocolate
Klebsiella ozaenae : MC Agar Saboraud (en lcera corneal)
LCR LIQUIDO PLEURAL
Agar Sangre de Carnero Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Chocolate
Agar Mac Conkey (condicional a Gram) Agar Mac Conkey (condicional a Gram)
Agar Saboraud Caldo de enriquecimiento (1) (2)
Caldo de enriquecimiento (1)

LIQUIDO PERITONEAL, ASCTICO LIQUIDO SINOVIAL


LIQUIDO DILISIS PERITONEAL LIQUIDO PERICARDICO
Agar Sangre de Carnero Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Chocolate
Agar Mac Conkey (condicional a Gram) Agar Mac Conkey (condicional a Gram)
Caldo de enriquecimiento (1) (2) Caldo de enriquecimiento (1)

SECRECION BILIAR ABSCESOS


Agar Sangre (heptico, cerebral, pleural)
Agar Azida Sangre Agar Sangre
Agar Mac Conkey Agar Azida Sangre
Caldo Thioglicolato (2) Agar Mac Conkey
Caldo Thioglicolato (2)
SECRECION VAGINAL en mujeres PUNTA DE CATETER
adultas Agar Sangre (por rodamiento)
Agar sangre. Agar Saboraud
SECRECION VAGINAL en nias SEMEN, SECRECION PROSTATICA,
Agar Sangre SECRECIN URETRAL
Agar Chocolate Agar Sangre
Agar Mac Conkey Agar Chocolate
Agar Saboraud

BIOPSIAS y TEJIDOS COPROCULTIVO


Agar Sangre Agar XLD Agar SS
Agar Chocolate Caldo Selenito Agua Peptonada
Agar Mac Conkey Agar Campylobacter (con Suplem.
Caldo Thioglicolato (2) Butzler y Filtro 0.4 m):Diarreas en nios
Agar MacConkey Sorbitol: Diarrea
con sangre
MIELOCULTIVO Agar TCBS: Diarreas como agua
Frasco de Hemocultivo para de arroz
aerobios
Frasco de Hemocultivo para
hongos/micobacterias