MUESTRA

Orina obtenida en forma asptica a mitad del chorro medio previa limpieza en un frasco
estril proporcionado por el laboratorio.
Orina de un nio obtenida en una bolsita recolectora previa limpieza con agua y jabn del
rea perineal.
Las muestras no deben permanecer mas de dos horas a temperatura ambiente.
Todas muestras sern conservadas a partir de sus entrega al laboratorio a temperatura de
refrigeracin
 Obtencin de muestra
Tipo de muestra

Mtodo Invasivo Mtodo no Invasivo

Puncin supra Cateterizacin Bolsa Sonda

pbica Chorro medio
vesical recolectora urinaria
Conservacin de la muestra

La muestra para urocultivo debe

refrigerarse a 48C inmediatamente
despus de recolectada.
Si el traslado al laboratorio demora
ms de 15minutos, debe colocarse
el recipiente con la orina dentro de
un contenedor con hielo.
Este procedimiento permitir que el
nmero de microorganismos
permanezca relativamente
constante por un tiempo no mayor
de 24horas
 PROCESO ANALTICO DE CULTIVO DE ORINA
Medios de cultivo
Agar Sangre ,A. Macconkey.
Agar chocolate: Orina de rin o muestras colectadas quirrgicamente por cistoscopia.
Medios cromognicos permite la deteccin rpida de los uropatgenos ms comunes, infecciones
mixtas y hongos.

Mtodo del Asa: Uso de nicrom o plstico.

Tamaos
Asa 1 ul recuento de colonias mayores de 1,000 UFC/ml.
Asa 10 ul recuento de colonias entre 100 y 1,000 UFC/ml.

Mtodo de la micropipeta
Usar una micropipeta calibrada de 1 a 10 ul
Puntas de pipetas estriles

Utilizar micropipetas diferentes para cada volumen, porque ir de un extremo al otro del rango, tiende a
descalibrar el instrumento.
 EXAMEN DIRECTO
Colocar 10 ul de orina bien mezclada sin centrifugar sobre una lmina portaobjetos, colocar un
cubreobjetos y observar a 40x.
La presencia de ms de 5 leucocitos por campo es considerado como indicativo de piuria.

Este resultado tiene una especificidad de 90% para predecir una infeccin urinaria asociada a catter con
ms de 105UFC/mL, pero una sensibilidad de solo 37%.

COLORACIN DE GRAM

Colocar 10 ul de orina bien mezclada sin centrifugar sobre una lmina portaobjetos, y deje que se seque al
aire sin extenderla.
Determinar el nmero de organismos por campo de aceite de inmersin. Un organismo observado a 1,000x
correlaciona con un recuento de colonias de 105/ml de orina.

La tincin de Gram determina rpidamente el tipo y el recuento de bacterias y clulas en la orina.

La presencia de una bacteria/campo de inmersin tiene buena correlacin con 100.000 UFC/ml en 85%
de los casos.
La presencia de muchas clulas epiteliales y morfotipos microbianos diferentes sugieren contaminacin
 MTODOS DE INOCULACIN PARA EL RECUENTO DE COLONIAS.

Mtodo del asa calibrada

Usando un asa calibrada flameada y enfriada
o una descartable, mantener el asa
verticalmente, y sumergir solamente el aro por
debajo de la superficie de la muestra de orina,
sin centrifugar y bien mezclada .
 Llevar una asada de la orina
bien mezclada sobre la placa
de agar sangre haciendo una
lnea recta a lo largo y por el
centro del agar y estriar la
orina mediante una serie de
pases en ngulos de 90 a
travs del inculo (mtodo
solo para 1 ul).
 Cuando se utilizan 10 ul de muestra tomar
una asada de orina bien mezclada
para inocular y estriar en cuadrantes las
placas de agar.
 INCUBACION

Incubarse 18 horas a 35 - 37 C, ambiente aerbico.

Incube 48 horas urocultivo negativos con sedimento urinario alterado sembrar en Agar Sangre con estra.
Incubar el A. Sangre en 5% de CO2 para mejorar el desarrollo de los organismos gram (+) y bacterias
dependientes de CO2.

LECTURA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Lectura final es a las 24 hrs.

En los siguientes casos se debe incubar el cultivo hasta por 48 horas:

Paciente inmunosuprimidos incluye pacientes que han sido trasplantados.

Se requiere cultivo para hongos o levaduras ( ejm: cultivos de UCI neonata!).
Existe otras causas de sedimento urinario alterado que no corresponden a ITU o para saber si el
paciente est recibiendo antibiticos.
 UROCULTIVO POSITIVO
Los cultivos (+), examinar los medios de cultivo para la cuantificacin y tipo morfolgico de los organismos
presentes.
0.001ml 1colonia=1000UFC/ml
0.01ml 1colonia=100UFC/ml
Cuando las colonias son demasiado numerosos para contar.
El mximo recuento usando el asa de 1ul es >105 UFC/ ml.
El mximo recuento usando el asa de 10ul es >104 UFC/ml.

ESTUDIO POSTERIOR DE LOS CULTIVOS POSITIVOS:

Determinar el recuento de colonias de cada morfotipo en el cultivo por separado examinando el agar sangre.

Streptococcus agalactiae debe ser reportado en mujeres en edad frtil y de diabticos.

E. coli representa el 80% de los patgenos en cultivos de orina, utilizar mtodos de identificacin rpida.

Mantenga las placas con cultivo positivo a T ambiente hasta 48.

Mantener las muestras de orina 24 hrs para resolver cualquier problema con la muestra o resultados.

No informar recuento en levaduras

 FASE POST-ANALITICA

REPORTE DE RESULTADO
a) Reporte de la Tincin Gram: resultados de bacterias y clulas.
b) Cultivos Negativos,
Reportar: de acuerdo al asa calibrada utilizada.
Negativo dil 1/100 UFC/ml
Negativo dil 1/1000 UFC/ml. por 24 o 48 horas.

c) Cultivos positivos, reportar: Si solamente se observa microbiota urogenital o de la piel, reportar

como cultivo negativo y el recuento ser de "10,000 UFC/ml de microbiota urogenital normal.
Los cultivos mixtos son reportados con el recuento en UFC/ml, seguido por "mltiple morfotipos
bacterianos presente, posible contaminacin; se sugiere nueva muestra.
Reportar el recuento de colonias de cada patgeno por separado.
Cuando se observa inhibicin por antimicrobianos, reportar: Se detect inhibidor antimicrobiano con su
recuento respectivo.
INTERPRETACION
El criterio de >_ 105 UFC/ml para significancia puede ser aplicado a la mayora de las muestras enviados
para cultivo. Sin embargo, lo siguiente ser cierto.

Un cultivo mixto en un paciente ambulatorio no complicado probablemente indica contaminacin.

Recuentos menores (<104/ml) de bacterias comnmente encontrados sobre la piel y genital interno y
externo son considerados ser contaminantes, pero en circunstancias especiales, un recuento de
Enterobacteriaceae de 102 UFC/ml o ms, pueden ser considerado significativo.

Recuento de colonias <105 UFC/ml en muestras emitidas con presencia de disuria y sntomas de ITU
puede ser significativo.
 TENER EN CUENTA LOS SIGUIENTES CRITERIOS PARA LA INTERPRETACIN DE RESULTADOS

Generalmente, el aislamiento de tres o ms especies bacterianas indican que la muestra se ha

contaminado por recoleccin inadecuada o demora en la siembra.

En pacientes con sonda vesical, cuentas bacterianas menores de 105 UFC / ml pueden tener significado,
as tambin se pueden encontrar bacteriurias polimicrobianas hasta en casi 15% de enfermos.

En muestras obtenidas por puncin suprapbica, el desarrollo de una sola colonia en el medio de cultivo
indica infeccin del tracto urinario.

Cuando el urocultivo es positivo y el paciente est asintomtico, es necesario repetir el estudio.

DETERMINACIN DE SUSTANCIAS ANTIBACTERIANAS RESIDUALES
EN ORINA
Determinar la presencia de sustancias antibacterianas residuales en orina.

Materiales
Pinzas
Discos de papel de filtro estriles de Papel filtro.
Placa de Agar Muelle Hinton 100 x 15 mm.
Tubo con solucin salina estril x 2 ml.
Cepa de Bacillus subtilis.

Procedimiento
suspensin de B. subtilis con solucin salina similar al tubo 0,5 de la escala de Mc Farland.
Sembrar la placa de A. Mueller Hinton con la suspensin de bacterias de manera similar a un
antibiograma.
Dejar secar a temperatura ambiente aproximadamente 15 min.
Tomar con la pinza un disco de papel filtro y colocarlo en la placa sembrada.
segn una plantilla numerada o colocando el nmero en la parte posterior de la placa.
Colocar 10 L de orina con una asa calibrada o una micropipeta
La placa ser incubada a 35C por 18 horas en aerobiosis.
Interpretacin
Se buscar la presencia de un halo de inhibicin alrededor del disco con la orina.
Cualquier dimetro de halo se considerar como prueba positiva. La ausencia de halo se considera como
prueba negativa.

Report de resultados
El resultado se informa como "Actividad antimicrobiana: Positiva o Negativa
Comentario
El medio de cultivo debe estar a temperatura ambiente y la superficie debe estar seca.
Mantener la cepa de Bacillus subtilis en un tubo o placa de agar Mueller Hinton, todas la semanas hacer una
resiembra para la prueba.