BASES

INMUNOHEMATOLOGICAS
DE LAS PRUEBAS DE
COMPATIBILIDAD PRE
TRANSFUSIONAL
Analicia Rodriguez Berton

Los grupos sanguineos son sistemas de

antigenos
y
anticuerpos
que
tienen
implicancias
geneticas,
bioquimicas,
inmunitarias y antropologicas.

Los antigenos de grupo sanguineo se

encuentran bajo control genetico, ubicados
en la membrana celular del eritrocito
mientras que los anticuerpos existen en la
fraccion inmunoglobulinas
de las proteinas plasmaticas.

Richard Lower 1665

Francia, JeanBaptiste Dennis, medico de la

corte del rey Luis XIV.
Transfusion de sangre corderos en sujetos
humanos
y
describio
lo
que
es
probablemente la primera evidencia
registrada de los signos y sintomas de una
reaccion hemoltica. (1667)

Adolf
en
public un
dond
Creite,
trabajo dele
establec
que1869 las a proteinas
e
suero tienen
la de
propieda
and clustering
eritrocitosdissolving
(hemolisis y aglutinacion)
con en
lo
cual
se anticipa
d
los el descubrimiento de los
anticuerpos un cuarto de siglo.

La diferencia en la compatibilidad de la
sangre entre las diferentes
especies
fueron publicadas por Leonard Landois:
tratado titulado Die Transfusion des
Blutes (1875)
Describe que la mezcla de celulas
sanguineas de un animal con el suero de
otras especies frecuentemente resulta en
lisis en menos de dos minutos.

1898
JULES BORDET
Teoria:La
union
en
proporciones variables, la
cantidad de anticuerpos
unidos a una cantidad
determinada de antgenos,
vara segn los reactivos
en presencia.
Demostro que eritrocitos
ajenos se rompan en el
suero de otra persona.
Este hecho lo designo con
el nombre de hemlisis.

En 1900, Shattock describe en el Hospital St

Thomas de Londres la aglutinacion de los
eritrocitos de un individuo con el suero de
otro de la misma especie, pero lo relaciona
con infecciones agudas.

Paul Ehrlich introduce el analisis

microscopico
de
la
sangre
y establece
que la aglutinacion de la sangre humana con
suero humano debe ser denominada
isoaglutinacion.

En 1901Karl Landsteiner,
asistente
del
Pathological
bacteriologoaustriaco,
Anatomical
Institute de
Viena
reacciones
describio
que se producan
las
al mezclar
los sueros y eritrocitos de 22 individuos
normales y de cinco cientificos que
trabajaban
con
el
incluyendo
su
propia sangre.

Describio las reacciones que se

producian
al mezclar los sueros y
eritrocitos de 22 individuos sanos y de
cinco cientificos que trabajaban en su
equipo, incluyendo su propia sangre.

En el tercer grupo C el suero aglutinaba los

eritrocitos del grupo A y B pero no los del grupo C.
Landsteiner establecia entonces que existian
al menos dos diferentes tipos de isoaglutininas:
una en el grupo A, otra en el B y ambas
en el grupo C.

En 1930 Karl Landsteiner recibe el Premio Nobel

de Medicina. Levine su discipulo lo describe
perfectamente.
La Asamblea Mundial de la Salud, maximo organo
de decision de la Organizacion Mundial de la
Salud OMS, designo que el 14 de junio de cada
ao se celebre el Da Mundial del Donante de
Sangre como muestra de reconocimiento y
agradecimiento hacia los donantes de sangre de
todo el mundo. La fecha conmemora el
nacimiento de Karl Landsteiner (Viena, Austria, 14
de junio de 1868 Nueva York, 26 de junio de

A pesar del descubrimiento delsistema ABO

seguian apareciendo
episodios hemoliticos.
Recien un cuarto de siglo despues, en 1928
Landsteiner y Levine
que era
su alumno en el
Rockefeller Institute, describen los sistemas MN y P
inyectando eritrocitos humanos a conejos. Con el
suero obtenido observaron que reaccionaba o no con
otras muestras de sangre humana.

Reubin

Ottenberg realizo la
primera
transfusion
1907.
Determinacion del
grupo sanguineo AB0 y la
prueba cruzada (crossmatching) entre DR
Usarsangre
grupo 0 como
donante
universal
sobre todo en situaciones de
urgencia.

En 1939 Levine y Stetson describieron el caso

de una madre que dio a luz un hijo muerto y estuvo
a punto de fallecer tras una transfusion de sangre
isogrupo ABO de su marido. Demostraron entonces
que de 80 donantes sobre
104 estudiados al azar el suero de la mujer
producia hemolisis de los hemates en cuestion.

Una nueva etapa en el estudio de la individualidad de

la sangre
Constituye el descubrimiento del factor
Rh por Landsteiner y Wiener en 1940.
Estos autores inmunizaron un conejo o
cuy con sangre de otro animal (Macacus
Rhesus).Basandose en que la sangre de
algunos animales tiene relacion con los
aglutinogenos de la especie humana,
emplearon el mo'no para su investigacion.
Del suero inmune que obtuvieron fueron
capaces de aislar una aglutinina que era
activa en 85 de cada 100 enfermos del
Jewish Hospital de Nueva York.

El macaco rhesus o (Macaca

mulatta) tiene la distribucion
mas amplia de los primates
despues de la del hombre.
Est muy extendida en el
norte de Afganistn, norte de
la India, Nepal, Bangladesh,
Butn,
Laos,
Myanmar,Tailandia, Vietnam
y
el
sur
de
China.
Esta presente en una amplia
gama de hbitats, desde
zonas semideserticas densos
bosques tropicales, desde el
nivel del mar hasta 2.500
m.s.n.m.

En 1940 Landsteiner y Wiener denominan al

cuarto sistema de
grupo
sanguineo
Rh
(iniciales) con cuyos eritrocitos se realizaron
las primeras experiencias de aglutinacion
inmunizando conejos y con sangre del mono.
El heteroanticuerpo aglutinaba no solo los
hemates del mono sino tambien el 85% de los
eritrocitos de individuos blancos de la poblacion
de New York.

La prueba de Coombs permite demostrar la presencia de tales

anticuerpos.El principio de esta prueba fue descrito por
Moreschi en 1908, pero Coombs, Mourant y Race la introdujeron,
en 1946, en el estudio de los grupos sanguineos y anticuerpos,
cuando el suero fue usado para la inoculacion de animales con
el fin de inmunizarlos con proteina humana, utilizando el
anticuerpo obtenido en la deteccion de los llamados anticuerpos
incompletos.

Hasta
nuestros
das han aparecido
una gran cantidad de otros sistemas de
grupos sanguneos.
En algunos el nombre del sistema deriva del
individuo en el cual el anticuerpo fue
seleccionado por primera vez.
Asi, la seoras Kell, Lutheran,Duffy y la
seorita
Kidd han prestado sus apellidos a los sistemas
conocidos en la actualidad.

ISBT International Society of Blood

Transfusion

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5
9
ISBT International Society of Blood
Transfusion

Esta avalancha de terminologa hizo que en

1980 la ISBT creara
un grupo de
trabajo con el fin
de uniformizar
la nomenclatura de los antgenos eritrocitarios
(Working Party on Terminology for Red Cell
Surface Antigens).
La ISBT (www,isbtweb.org), fundada
en
1935,
con
sede
actualmente
en
Amsterdam.

Los antgenos de alta incidencia en la poblacin, en

su mayora con una incidencia
superior al 99%
90
son
denominados
antgenos
pblicos
0)
(serie

Antgenos de alta incidencia

Kp > k > Jsb >
Lub > Ge, Tj >
Vel > Yt >Dib >
Coa > U.
Estos antgenos
se encuentran en
ms del 99% de
la poblacin.

De los 300 antigenos de grupo sanguineo

que fueron encontrados; algunos de ellos
son
sumamente
raros,
unicamente
encontrados en algunos miembros de
ciertas familias.

Antgenos de baja frecuencia

Cw >,V, Kpa >
Jsa > Lua >, Dia
>Wra >, Cob
Estos antigenos
se
encuentran
en menos de 1%
de la poblacion.

La inmunogenicidad de un antigeno de
grupo sanguineo puede ser definida como
el factor determinante que posee para
que, si los hemates que lo portan son
transfundidos, sean capaces de provocar el
desarrollo
de
los
correspondientes
anticuerpos en el receptor.

NOMBRE DEL ANTIGENO

POTENCIA ANTIGENICA

1,00

0,35

0,21

Cw

0,19

Lea

0,15

0,11

Lua

0,094

Fya

0,090

0,080

Jka

0,077

P1

0,074

0,073

Leb

Fyb

Jkb

PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD
PRE TRANSFUSIONAL

Domingo 6 marzo, 2016

Al menos 60 personas murieron y decenas ms resultaron heridas en un
atentado suicida contra un puesto de control militar en la ciudad iraqu de
Hillah, al sur de esta capital, cuya autora se responsabiliz el grupo
extremista Estado Islmico (EI).
Explosin en Ankara
En los ltimos meses se han registrado diversos ataques terroristas en Turqua,
siendo el del 13 de marzo del 2016 uno de los ms sanguinarios, al haber
dejado un saldo de 37 muertos y 122 heridos.

Fallecen 171 nios

En septiembre del 2004 un grupo terrorista musulman sembr el pnico en la Escuela d
El enfrentamiento entre los terroristas y las fuerzas armadas rusas dej un saldo de 330
fallecidos, de los cuales 171 eran nios.

Mltiples ataques

de noviembre 2008 es uno de los meses ms tristes para los habitantes de Bom
en India, a causa de los 10 atentados que ocasionaron la muerte de
173 personas, mientras que 327 resultaron lesionadas.

jueves 8 de mayo de 2014 - 12:00 a.m.

Al menos 100 muertos en un atentado con camin bomba al sur de Bagdad

Bagdad 24 NOV 2016 - 17:22
La explosin de un camin bomba en una gasolinera
cerca de la ciudad iraqu de Al Hala, situada a 100 kilmetros al sur de
Bagdad, ha causado al menos 100
muertos este jueves, segn fuentes policiales y mdicas citadas por Reuters.

Con el conocimiento de que existen cada vez

mas sistemas de grupo sanguineo, los test de
compatibilidad pre transfusional pretenden
ser mas sensibles.
Los pioneros en
bancos de sangre
mezclaban el suero del paciente con las
celulas
del
receptor
para
observar
aglutinacion/hemolisis.

Evolucin Pruebas
Transfusionales

Practicas actuales en bancos

de sangre
Numerosos cambios, desde 80 se han ido eliminando
test que no se consideraban necesarios.
Evaluar el costo efectividad de pruebas
vs la
seguridad del paciente . Cualquier modificacion debe
considerar:
Seguridad del paciente
Eliminacion de reacciones transfusionales
Disminuir el tiempo de procesamiento de las pruebas

Administracin CORRECTA

Una vez que se ha tomado la decision de la

transfusion sanguinea, todos los involucrados en
el proceso clinico tienen la responsabilidad de
asegurar que la sangre o hemocomponentes
CORRECTOS, lleguen al PACIENTE CORRECTO en
el TIEMPO CORRETO.

Siguiendo
idealmente aquellas guias de
transfusion sanguinea establecidas por el COMITE
DE TRANSFUSIONES HOSPITALARIO.

TIEMPO CORRECTO
Manual del Uso Clnico de la sangre
plantea la siguiente terminologa:
TERMINO A
EMPLEARSE
Extremadamente
urgente
Muy urgente

TIEMPO
10-15 minutos

Dentro de 1 hora
Dentro de 3 horas

Urgente
8 /11/2016
El mismo dia
En la fecha y hora

8/11/2016 A 08:00

SINNIMOS?
Los
terminos
pruebas
de
compatibilidad
y
pruebas
cruzadas
son
comunmente
utilizados como sinonimos, sin
embargo,
deben
ser
claramente diferenciados.

46

PRUEBAS DE
COMPATIBILIDAD
Pueden dividirse en
tres etapas:
1. Procedimientos Preanaliticos
2. Pruebas
Propiamente dichas
3. Procedimientos
post-analiticos

1. FASE PRE - ANALITICA

1.1 Identificacion del paciente
1.2 Toma de Muestra
1.3 Revision de la Historia Clinica

1.1 IDENTIFICACIN DEL

PACIENTE
Muy importante !!!
Confirmar la identidad del
paciente (preguntas)
Nombres completos nmero
de historia clinica
Verificar nombre del medico
tratante

Tubos para toma de muestra

Suero

Plasma

IDENTIFICACION DE LA MUESTRA

Tubos de ensayo con los

nombres completos, codigo
de referencia.
Fecha, hora, iniciales del
flebotomista.
Mismos datos en la orden de
toma de muestra, registros.

TUBOS DE ENSAYO
VOLUMENES PEDIATRICOS
SI

NO

1.2 TOMA DE MUESTRA

La muestra debe ser colectada en un
tubo con y sin anticoagulante (10 ml)
Si se obtendra la muestra a partir de
una via de infusin, debera ser
detenida 5-10 minutos antes de
colectar la muestra y los primeros 10
ml deben descartarse.
Muestras hemolizadas NO deben
utilizarse.

MS QUE IMPORTANTE
El mayor nmero de fatalidades asociadas a la
transfusion son debidas a errores clericales tipificacin de grupos sanguineos mayores.
La
causa
mas
comn
de
accidentes
transfusionales son errores en la identificacion
del paciente, de los tubos de ensayo, de las
etiquetas en los hemocomponentes e incluso al
momento
de
la
transfusin
por
una
equivocacion en la identificacin del paciente
transfundido.

Post-transfusion
prpura
Acute lung injury
Graft vs host
disease

2%

Delayed
transfusion
reaction

3%

Transfusion-transmitted
infections

6%
8%

14%

53%

Incorrect blood/
component
transfused

15%
Acute
transfusion
reaction

Based on 366 spontaneously-reported

deaths/major complications between
October 1996 and September 1998
in the UK and Ireland.

TIEMPO DE ALMACENAMIENTO
DE LAS MUESTRAS
Las muestras del receptor y del donante
deben ser almacenadas hasta 7 dias despus
de la transfusin.
La temperatura de almacenamiento sera de 4
+/- 2C, cuidadosamente etiquetadas, y
considerando un volumen adecuado para
poder repetir las pruebas de compatibilidad
en caso de reporte de reaciones adversas.

PROCEDIMIENTO
CLASIFICACION Y
RETENER
Significa que una vez que el personal
del
Servicio
de
Transfusion
ha
procesado la muestra del paciente
(ABO A& Rh, DAI), muestra es
congelada a 20 centgrados y
almacenada por 7 das.
Si el paciente requiere sangre en este
periodo, la muestra es descongelada y
utilizada para efectuar pruebas de
compatibilidad urgentes, asi solo se
necesitaran de 15 a 30 minutos para
tener unidad
lista
para ser
despachadas al paciente.

EN DETALLE
Pruebas
a
la
unidad
de
sangre/hemocomponente
Grupaje ABO : Hemtica y Srica
Grupaje Rh : incluyendo en D neg la variedad (Du)
Deteccion
e
identificacin
de
anticuerpos
irregulares IAT
Pruebas al receptor
Grupaje ABO : Hemtica y Srica
Grupaje Rh : que no incluye la variedad (Du)
Deteccion
e
identificacion
de
anticuerpos
irregulares IAT
Cross match: Mayor & Menor

1.3 REVISION DE LA HISTORIA

CLINICA

Grupo sanguneo del paciente si se conoce

Presencia de algn anticuerpo

Historia de transfusiones previas
Historia de reacciones transfusionales
Numero
de
embarazos
previos,
incompatibilidad feto/materna
Medicacin actual
Patologia en curso, motivo de la transfusin
sanguinea

2.PRUEBAS
PRETRANSFUSIONALES

2.1 ABO/Rh
2.2 Deteccin e identificacin de
anticuerpos irreg
2.3 Pruebas Cruzadas

PROPOSITO DE LAS PRUEBAS

TRANSFUSIONALES
Seleccionar
la
sangre
o
hemocomponentes ms seguros para la
transfusin
1) Con
un
porcentaje
alto
de
supervivencia en el receptor
2) Con la mnima posibilidad de la
destruccion de los hematies del
receptor
3) Prevenir
que
una
transfusion
incompatible cause una reaccin
transfusional

2.1 DETERMINACION DEL GRUPO

SANGUINEO ABO&Rh
La prueba inversa debe confirma el
tipaje ABO de la prueba directa
En el tipaje Rh, el rhesus control
debera ser SIEMPRE NEGATIVO
Solo ante la realizacin de estas
pruebas debe registrarse el grupo
sanguineo.

2.2 DETECCION E IDENTIFICACION

DE ANTICUERPOS IRREGULARES
El panel celular
detectar la presencia de
cualquiera de los anticuerpos inesperados en el
suero del paciente.
Si se detectan anticuerpos, la identificacion debe
llevarse a cabo utilizando celulas del panel que
varan entre 11, 16 o ms (autocontrol) .

IgG Antibody

IgM Antibody

(Monomer Structure)

(Pentamer
Structure)

Images provided by textbook: Figure 14.3, page 97, Kuby

Immunology, 4th Edition, W.H. Freeman and Company

1. Reaccionan en frio
2. Buenos activadores de
complemento

Anticuerpos IgM

3. Pentmeros

1. Reaccionan a 37 grados
4. ABO, Ii, Lewis, MN, & P
2. Pobres activadores de
complemento

Anticuerpos
IgG

3. Monmeros
4. Rh, Kell, Kidd, Duffy, and
Ss

DETECCION E
IDENTIFICACION AI
Asegurar que posibles anticuerpos
en el receptor destruyan hemates
del donante.
Prevenir
que PFC, PC, CP,
CRIOPRECIPITADO
no
contengan
anticuerpos
que
sensibilicen
hemates del receptor.
Transferencia pasiva.

2.3 PRUEBAS CRUZADAS

Detectar la presencia antigenos y
anticuerpos
Confirmar la compatibilidad ABO & Rh
Detectar aloanticuerpos irregulares o
inesperados de significacion clinica
(auto anticuerpos)

SELECCIONANDO LA UNIDAD CORRECTA

Siempre utilizar los

segmentos o
pilotos anotando
el numero/codigo
con marcador
indeleble, con
especial cuidado si
se trata de ms de
una unidad.

PROCEDIMIENTO
Crossmatch LADO
MAYOR
Testar las celulas del
donador con el suero del
receptor para detectar
anticuerpo irregulares en
el paciente

Crossmatch LADO
MENOR

Testar
las
celulas
del
receptor con el plasma de
CP<
PFC<PC<CRIO<
ST
para detectar la presencia
de anticuerpos irregulares
en las unidades
Incluir autocontroles para
detectar:
Auto anticuerpos, Alo
anticuerpos, Rouleaux

Prueba IS
Comunmente conocida como la prueba
cruzada spin crossmatch".
Se utiliza principalmente como un medio
rapido para detectar la incompatibilidad ABO.
No se puede confiar en detectar la
incompatibilidad ABO en los pacientes con una
debil anti-A o anti-B.
No es un sustituto adecuado para una prueba
cruzada IAT porque no detecta incompatibilidad
debida a anticuerpos IgG.

POTENCIADORES DE
REACCIN

Permiten magnificar la segunda etapa de

la reaccin de aglutinacin.
Actuan disminuyendo la carga negativa de
la
superficie
de
los
hematies,
disminuyendo el nivel de hidratacin
alrededor de los mismos o agregando
sustancias
cargadas
positivamente
macromoleculas que agregan los hematies.

LOW IONIC STRENGTH

SALINE SOLUTION (LISS )
Solucin salina con una concentracin ms baja de
cloruro de sodio 20% menos en comparacin con la
solucin isotnica normal.
Al reducir el nmero de sodio (Na +) y cloruro (Cl-) iones
libres en la solucin, la capa inica alrededor de los
eritrocitos se reduce y la distancia entre el anticuerpo y
antgeno en la membrana de glbulos rojos tambin.
Se necesitar menos tiempo de incubacin para la
formacin de complejos antgeno-anticuerpo.

Prueba con ASB 22%-30%

Potencia la reaccion de aglutinacion

DISMINUYENDO
EL
POTENCIAL
ZETA.
INCREMENTANDO
la
constante
dielectrica
CAMBIANDO
LA
COMPOSICION del medio.

Pruebas con enzimas

proteolticas
Son enzimas proteoliticas.
Bromelina, Papaina, Quimotripsina, Ficina,
Pepsina neuraminidasa, Tripsina.
La Bromelina es una enzima que clasifica
dentro de las endopeptidasas (latex de la
pia) - (Bromeliaceae).

BROMELINA CMO ACTUA?

Remueve fragmentos de la membrana del
hematie.
Incrementar la proximidad entre hematies.
Permite un mejor acceso a los anticuerpos
hacia los epitopes.
Remocion del acido sialico directamente
reduce la carga electrica de la superficie
del hematie consecuencia directa DPZ.

TEST DE COOMBS IAT

Test de anti inmunoglobulina humana (COOMBS)

INDIRECTO
El mas utilizado en inmunohematologia puede
detectar la presencia de anticuerpos en suero que
reaccionan con antgenos en la superficie de
glbulos rojos.
La mayoria de anticuerpos incompletos IgG son
detectados por este test.
La prueba de Coombs fue descrita por primera vez
por los cientficos Rob Race, Arthur Morant, y Robin

ANTICUERPOS DE SIGNIFICANCIA
CLINICA
SIEMPRE
ABO Rh

Kell

Duffy Kidd S s U

OCACIONALMENTE
Lea

p Lua Lub Cartwright

CASI NUNCA
Leb Chido/Rodgers (Cha/Rha) York, Sd Xg& Bg

METODOLOGIA

TCNICA EN COLUMNA DE GEL

 Completa automatizacin de la actividad que desarrolla

un Banco de Sangre.
Acceso inmediato a la historia completa de cada una de
las unidades y a la historia completa de cada donante.
Basado en la impresin de etiquetas: cdigos de
barras/agilizar procesos y garantizar la veracidad de la
informacin.
Captura en tiempo real de los resultados obtenidos en
todos los analizadores o dispositivos disponibles en
cada Banco de Sangre.
Centraliza el manejo de la informacin y permite
imprimir reportes que ayudan a auditar los procesos.

Resumen final...