CONTADOR HEMATOLOGICO

CONCEPTOS BSICOS DE HEMATOLOGA

La sangre que circula por nuestras venas, corazn, arterias y capilares

contiene varios elementos.

Nuestra sangre est compuesta por un 22% de elementos slidos y un 78% de

agua.
Glbulos rojos (eritrocitos)
Glbulos blancos
(leucocitos) incluyendo:
A granulocitos:
Linfocitos
Monocitos
Granulocitos:
- Eosinfilos
- Basfilos
- Neutrfilos
Plaquetas (trombocitos)

Plasma

CONTADOR HEMATOLOGICO
No existe un mtodo nico para contar clulas, lo cual implica que hay en
el mercado varios modelos de contadores hematolgicos.
Un contador hematolgico debe contar, como mnimo:
La serie blanca (glbulos blancos) y la serie roja (glbulos rojos), A
esto se le llama CBC (Complete Blood Count).
Aparte de esta cuenta, un contador hematolgico tambin debe
proporcionarnos la cuenta de toda la serie blanca:
Diferenciacin entre los componentes de la poblacin blanca. Esto
es lo que se llama Modo Diff (White Blood Differential, Diferencial).
Medir la seria plaquetaria
Medir una diferenciacin mayor entre clulas maduras de
inmaduras (VCM, HCM, CHCM)
Medir el valor de hemoglobina y hematocrito.

CONTADOR HEMATOLOGICO
Se emplean para hacer el recuento celular
sanguneo y realizar la frmula leucocitaria
capaces de contar:
1. Los eritrocitos
2. Los leucocitos
1. Diferencia
2. No diferencial
3. Con o sin histogramas
3. Las plaquetas
4. Los reticulocitos
5. Los eritrocitos nucleados

CONTADOR HEMATOLOGICO
Utiliza
varios
independientes:

mtodos

de

medicin

Medida de la variacin de impedancia o

resistencia elctrica (principio Coulter)
Medicin de la cantidad de luz dispersada
(mtodo ptico)
Tcnicas inmunolgicas mediante anticuerpos
monoclonales (AcMo) acoplados a fluorocromos
(citometra de flujo)

IMPEDANCIA ELCTRICA

Las clulas no son buenos conductores

elctricos debido a sus resistividad de la
membrana.
El principio de medida consiste en rellenar un
recipiente con un liquido conductor, dentro de
el introducimos un segundo recipiente (no
conductor) del mismo liquido.
Ambos se comunican mediante un pequeo
orificio.
Si aplicamos una corriente constante y
aspiramos liquido de uno de los recipientes se
producen variaciones en la diferencia de
potencial entre ambos recipientes cuando el
orificio que comunica ambas recipientes es
atravesado por una clula, tambin se produce
un aumento del voltaje.
Mediante la medida de la amplitud del pulso
nos hacemos una idea del tamao de la clula.

Una marcada reproducibilidad, rapidez y

disminucin del error estadstico.

DIFERENCIACIN CELULAR
SISTEMA PTICO

Haz laser
central

Alimentacin de
muestra

Varios ngulos
de dispersin
de luz

Corriente de
muestra

DETERMINACIN DE LA
CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA
La mayora de mtodos
cianometahemoglobina.

emplean

el

mtodo

de

la

La dilucin original, realizada a partir de la sangre completa, se

conduce a una cmara de mezcla en donde se aade un agente ltico
para lisar y convertir la Hb en cianometamehoblodina

CITOMETRA DE FLUJO

Estas tcnicas integran la dispersin de luz con

la emisin de fluorescencia.

La combinacin de la tecnologa ptica con la

deteccin de fluorescencia mediante el uso de
AcMo marcados con fluorocromos, ha supuesto
un claro avance en la discriminacin de las
distintas
subpoblaciones
celulares
hematolgicas.

En la tcnica de citometra de flujo las clulas en

suspensin se hacen pasar alineadamente una a
una, por delante de un haz de luz lser
monocromtico, previo marcaje de las
estructuras
celulares
con
anticuerpos
monoclonales acoplados a fluorocromos.

La interaccin de haz lser con cada clula

marcada produce 2 tipos de seales: de
dispersin y de fluorescencia.

QU ES LO QUE NOS MUESTRA UN CONTADOR

HEMATOLGICO?

HISTOGRAMAS

En el histograma se utilizan grficas de

frecuencias de volmenes celulares
representados en el eje X graficado
contra un numero relativo representado
en el eje Y; por ser relativo, no tiene un
equivalente numrico real. El eje X se
expresa en femtolitros (fl.).

FORMULA LEUCOCITARIA
AUTOMTICA

La formula leucocitaria se puede realizarse por los

siguientes principios:
Anlisis digital de imagen.
Citoqumica celular
Anlisis de volmenes celulares.

FORMULA LEUCOCITARIA
AUTOMTICA
Anlisis digital de la imagen

Citoqumica celular

Se basa en el reconocimiento de los

leucocitos por medio del anlisis
computarizado de las imgenes que
proporciona un microscopio a partir
de extensiones sanguneas con
tincin pantptica.
El ordenador analiza:
El tamao celular
El contorno celular
La coloracin y presencia de
granulaciones

La Citoqumica celular obtienen

la formula leucocitaria de
acuerdo con el tamao de los
leucocitos y su tincin con
determinados colorantes.
En cada espcimen se cuentan
muchas clulas (10.000).
Este sistema utiliza dos
canales:
1. El de la peroxidasa
2. El de basfilos/loburalidad

CITOQUMICA CELULAR
El de la peroxidasa

EL DE BASFILOS/LOBURALIDAD

La enzima peroxidasa se encuentra en

presente en varios leucocitos.

En presencia de H2O2 y de un cromgeno

aceptor de electrones (4-cloro-1-naftol), la
peroxidasa da lugar a un material colorado
oscuro que precipita en las clulas.

La intensidad de al tincin depende la

actividad de la peroxidasa:
Eosinfilos
intensa

actividad

peroxidasa

Neutrfilos, una gran actividad.

Monocitos actividad dbil
Linfocitos, basfilos y los LUC. No
contienen peroxidasa, no se tien
Los detecta por absorbancia y por
dispersin de la luz

Permite un recuento exacto de los

basfilos y una medida de la
loburalidad celular.

A la sangre se aade un cido y un

surfactante que hemolizan los GR y se
separan las membranas
de los
Neutrfilos, eosinfilos, linfocitos y
monocitos y el ncleo queda desnudo,
a excepcin de los basfilos.
El sistema de deteccin se mide la
dispersin de la luz a dos ngulos

DETERMINACIN DE LA
CONCENTRACIN DE LA
HEMOGLOBINA
Mtodo de la cianmetahemoglobina.
La sangre completa se conduce a una cmara de mezcla en donde se
aade un agente ltico para lisar los GR y convertir la Hb en
cianmetahemoglobina.
Se mide la absorbancia a 540 nm y se obtiene la concentracin de Hb
a partir de la curva de calibracin.
Errores principales:
Hemlisis in vivo
Hiperlipemia
Hiperbilirrubinemia
Recuentos leucocitarios superiores a 50.000/ul
Coagulacin de la sangre

DETERMINACIN DEL
HEMATOCRITO
Los analizadores hematolgicos suelen determinar el hematocrito
mediante calculo matemtico a partir del producto del VCM y del
recuento de eritrocitario

Fuentes de error:

Exceso de anticoagulante EDTA

Alteraciones proteicas o electrolticas
Alteraciones del equipo
Leucocitosis intensa

RECUENTO DE RETICULOCITOS
Los mtodos automatizados para contarlos se basan
en la fluorescencia (naranja de tiazol, auramina O y
otros colorantes) o la absorbancia (oxacina 750 y azul
de metileno reciente) o en colorantes que interaccionan
con el ARN de los reticulocitos.
Se obtienen ndices celulares reticulocitarios, que
pueden emplearse para diagnosticar y tratar
enfermedades hematolgicas.

DETERMINACIN DE LOS NDICES

CORPUSCULARES ERITROCITARIOS
Y DE OTRAS MAGNITUDES
DERIVADAS

NDICES CORPUSCULARES ERITROCITARIOS

El Volumen corpuscular medio VCM:
Impedancia elctrica, el pulso generado es proporcional al
volumen del GR.
Dispersin de luz, la cantidad de luz dispersada proporciona
una medida del volumen del GR.

Concentracin de Hb corpuscular media CHCM:

Lo realiza a partir de la dispersin de la luz
Otros lo hacen a partir del calculo de la concentracin de Hb y
del Htc

NDICES PLAQUETARIOS
Los analizadores hematolgicos proporcionan otros parmetros
plaquetarios como:
El plaquetocrito (PCT): indica el volumen plaquetar con
respecto al volumen total de sangre.
El volumen plaquetario (VPM): tamao de las plaquetas 7-11 fl
Amplitud de distribucin de plaquetas (PDW o ADP):
distribucin de la poblacin de plaquetas, cuyo dato de
referencia no ha sido establecido.

ALARMAS EN LOS ANALIZADORES

HEMATOLGICOS
Las alarmas pueden
agruparse en:
Cualitativas
Cuantitativas
tiles
Deseables

problemasson
clnicos
Alarmas
Cualitativas
Alarmastiles:
cuantitativas:
deseables:
se de:
menores,
tiles
para
el control
de
basan
corresponden
en
datos
a:
del
recuento:

Blastos
calidad
interno. Afectan
Anemia/policitemia
La
eosinofilia
adversamente
al recuento
Clulas
anormales
sanguneo:
Leucopenia/leucocitosis
(variantes de
linfocitos)
Eritrocitos
nucleados
Anisocitosis (Ancho de
Trombopenia/trombosito
Desviacin
a la izquierda
Clulas
drepanocticas
Distribucin de Eritrocitos ADE).
sis
Granulocitos
inmaduros
La
esferocitosis
Tamao
de las plaquetas
(ADP)
Otras
derivadas
de los
Dos
poblaciones
de eritrocitos
Fragmentos
de
ndices
eritrocitarios.
Aglutinacin
de plaquetas y
eritrocitos
AGR.
menudo se obtiene
C
resultados positivos falsos.
Hb anormales.

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR

(VSG)

Hay sistemas para medir la VSG con

aspiracin neumtica de la sangre y
cierres hermticos de las partes inferior
y superior.

Cargan muchos especmenes y un reloj

avisador seale el tiempo para
proceder a la lectura.

Utilizan tubos al vacio.

El tubo se inserta en el aparato, un

lector
ptico,
que
se
mueve
verticalmente, detecta el nivel de
sedimentacin.

Se realizan las lecturas a los 20 min

MEJORA INTRODUCIDAS EN LOS LTIMOS AOS

Ampliacin de la LINEALIDAD
como consecuencia de avances
de los programas informticos y
de los sistemas de lectura.

Trabajar con grandes recuentos

de leucocitos, sin necesidad de
diluciones.

Mejorar en la deteccin de
reticulocitos, clulas inmaduras,
el nmero de granulocitos
inmaduros

A futuro los
analizadores
hematolgicos
tengan la
posibilidad de
analizar la
mdula sea,
LCR, lquido
pleural y el
asctico