TECNICAS DE

CONFIRMACION
CATEDRATICO: Luis Soltero
ALUMNOS: Samantha Camacho
Jonatn Lpez

ESPERMATOZIODE
El

liquido
espermtico
contiene de 70 a 150
millones por ml.

Tienen un promedio de vida

de 4 a 6 das.
El tiempo de vida en la

cavidad anal, es menor de

21 horas.
En

cadveres lo mas
recomendable es hacer el
anlisis lo mas pronto
posible.

TINCION DE GRAM
PREPARACION DE LOS REACTIVOS:
Colorante de Cristal violeta

Solucin A
Cristal violeta.. 2 gr.
Alcohol etlico absoluto20 ml.
Solucin B
Oxalato de amonio.. 0.8 gr.
Agua destilada.. 80 ml.
Mezclar las soluciones A y B, luego envasar en un gotero color
mbar.

 Solucin iodo iodurada (Lugol).

Iodo metlico...................................................... 1 gr.
Iodo de potasio 2 gr.
Agua destilada 300 ml.

Diluir 1:15 en agua destilada antes de usarla.

Decolorante
Alcohol etlico absoluto (95%)

Colorante de safranina
Safranina (2.5 % en alcohol etlico)10 ml.
Agua destilada. 100 ml.

PROCEDIMIENTO
Utiliza guantes.

Lava el portaobjetos.

Coloca la muestra en el
porta objetos , si tienes la
muestra en un hisopo
pasalo ligeramente por
encima del porta objetos.

Tambin se puede fijar con

metanol
agrega una o dos
gotas sobre la mancha seca,
drena el exceso de metanol y
deja que seque con el aire.

Coloca el portaobjetos en
una bandeja para tincin,
para que los lquidos que
vallas a usar puedan
drenarse sobre la bandeja.

Usa una pipeta para

empapar la muestra
con cristal
violeta.

Inclina el porta objetos y utiliza

un matraz
de lavado para rosear un
pequeo
chorro
de
agua
destilada. (no roces el agua
directo a la mancha).

Usa una pipeta para cubrir

la macha con lugol, se
deja reposar durante un
minuto; se enjuaga con el
mismo mtodo anterior.

Agrega el decolorante
hasta que no se vea el
color violeta

Empapa la mancha con

colorante de safranina gota a
gota.

Seca la muestra con

papel filtro.

Observa al microscopio
con aceite de inmersin.

INTERPRETACION:
Las clulas

espermticas
aparecern teidas:
La cabeza de color

rosa y el resto del

cuerpo y cola en color
azul.

TECNICA CON AZUL DE

METILENO
Colorante de azul con metileno:

Azul de metileno..1 gr.

Alcohol etlico absoluto (95%) 30 ml.
Agua destilada 100 ml.
Acetico glacial. 5 ml.

Disolver en el azul de metileno en el etanol, aadir el

acido actico y el agua destilada.

PROCEDIMIENTO:

INTERPRETACION:
Los espermatozoides se
observaran
coloreados
tanto como la cabeza como
el cuerpo y cola de color
azul.

TECNICA DE
CHRISMAS TREE
Colorante rojo rpido nuclear:
Rojo rpido nuclear. 50 mg.
Sulfato de aluminio... 2.5 gr.
Agua destilada. 100 ml.

Calentar a ebullicin el agua destilada y disolver en ellos el

sulfato de aluminio; adicionar el colorante rojo rpido nuclear,
mezclar con agitador mecnico, hasta disolucin completa.
Enfriar y filtrar en papel wathman No. 1 y almacenar en gotero
mbar a temperatura entre 2 y 8 C.

 Colorante de ndigo carmn:

Acido pcrico 1.3 gr.
ndigo carmn..0.23 gr.
Agua destilada... 100

ml.
Disolver el acido pcrico con los 100 ml. De agua; aadir
los 0.23 gr. De ndigo carmn; mezclar perfectamente con
agitador mecnico.
Guardar en frasco gotero mbar.

PROCEDIMIENTO:
Una vez fijado el frotis aadir dos gotas de rojo rpido

nuclear y dejarlo reposar en cmara hmeda durante

quince minutos, (tambin se puede utilizar una caja de
Petri colocando en la base y el interior de la tapa, un
papel filtro hmedo).
Lavar con agua desionozada, durante cinco segundos,

aadir una gota del colorante ndigo carmn y dejarlo

reposar durante 15 a 30 segundos
Lavar con etanol absoluto para decolorar, secar por 5

minutos.

INTERPRETACION:
Al

observar al microscopio, el ncleo del

espermatozoide, aparecer en color rojo, el
acrsima y la cola de color verde.