Ao de la consolidacin del Mar de Grau

Universidad Nacional Mayor de San

Marcos
Facultad de Farmacia y Bioqumica
E.A.P. Toxicologa

Toxoplasmosis. Identificacin de
anticuerpos de Toxoplasma
gondii.
Curso

: Anlisis Clnicos II

Profesor :
Expositores:
Anaya Caceres, Joselyn Alely
Cabezas Huatuco, Gerardo Manuel
Gonzales Espinoza, Sarai
Vega Caspa, Roberto

Toxoplasmosis

Definicin: Es una zoonosis parasitaria que

puede ser adquirida por va oral o congnita.
Sus nicos huspedes definitivos conocidos

Toxoplasma gondii
Charles Nicolle
Y
Louis Manceaux

estudiaban

la transmisin
de la leishmaniosis

Nicolle sugiri el
nombre de
Toxoplasma (del
griego Toxo:
arco)

no creca en los medios de

cultivo
descritos para Leishmania
spp

e
n

Ctenodactylus gondii
roedor del norte de frica
(Tnez)
observar
on
clulas mononucleares
infectadas por un
microorganismo que
denominaron Leishmania
gondii

Toxoplasmosis
Agente etiolgico: Toxoplasma
gondii.
Formas principales: Taquizoitos
Bradizoitos
Ooquistes
Huspedes definitivos: Gato
domestico y varias especies de
felinos.
Huspedes intermediarios: Especies
de sangre caliente (Hombre, otros
mamferos y aves).

Toxoplasma gondii
Morfologia

Miden 10x12 m
contienen
esporozoito
Slo se producen
forma
ovoide
en
los hospederos
definitivos como
resultado de la fase
sexual del parsito.
Ooquistes

Taquizoitos
produc
Bradizoitos
lisi
Infecta
contienen
miles
de
e
Los taquizoitos
sedeficiencia
transforman
Son la
Ante
una
s undelen
clulas
Poseen
Forma
oval
Entonces
elforma
taquizoito
lacuales
forma
bradizoitos,
los
Miden
de
2inmune,
ao4 es
bradizoitos
para
formar
losse
sistema
pueden
dimetro
infectar
muchos
de
luna
que
induce
la
respuesta
en
losotra
diferentes
mencuentran
de
ancho
y
de
quistes,
una
vez
concluida
la vez
fase
asexual
transformarse
Libera
ms
entre
10
y
tejidos,
entre
ellos
el
creciente
inflamatoria
y
la
destruccin
de
tejidos
(tienen
preferencia
por
4a
8en
m
de
largo.
aguda
la
infeccin.
invasiva
del
Quiste
taquizoitos
ym
causar
Taquizoitos
200
sistema
nervioso
tejidos
asociadas.
cerebro,
msculo esqueltico
parsito.
sintomatologa
central, el ojo,y el
cardaco)
corazn y la placenta

Toxoplasma gondii
Ciclo biolgico
Contaminacin del
medio
Ooquistes

Carnes crudas
Bradizoitos

Taquizoitos
Transfusiones
Transplacentaria
Transplantes

CICLO BIOLOGICO - Toxoplasma

gondii
El parsito tiene ciclo de reproduccin sexuada y
asexuada. La reproduccin sexuada ocurre
exclusivamente en los hospederos definitivos, los
felinos, en tanto que la reproduccin asexuada
ocurre en los hospederos intermediarios (especies
de sangre caliente, incluido el hombre) y en los
definitivos.

Ciclo biolgico en mamferos

husped intermediario
Hombre
Fase proliferativa:zotos
penetran las clulas se multiplican
por endodiogenia, y rompen la
clula liberando taquizotos
Fase qustica: los zotos
penetran a una clula formando
una membrana qustica se
multiplican por endodiogenia,
degeneran la clula formando un
seudoquiste

Ciclo biolgico en felinos

husped definitivo
Fase esquizognica
el zoto penetra las clulas de la pared
intestinal del felino, forma all
esquizontes los que despus se rompen.
Fase gamagnica
el zoto penetra a las clulas de la pared
intestinal del felino formando micro y
macro gametos
Fase esporognica
los gametos se fecundan formando un
cigoto que sale a la luz intestinal
ooquiste.

CICLO DE
REPRODUCCI
ON ASEXUADA

CICLO DE
REPRODUCCI
ON SEXUADA

MTODOS DE IDENTIFICACIN
DE ANTICUERPOS DE
TOXOPLASMA GONDI

El diagnstico de la toxoplasmosis humana puede hacerse por mtodos

directos o indirectos. Los mtodos directos se basan en la
demostracin de formas parasitarias completas o su material gentico
en fluidos o tejidos corporales. Los mtodos indirectos para el
diagnstico de la toxoplasmosis se basan en la demostracin de la
presencia de anticuerpos IgM, IgG o IgA especficos contra el parsito.

MTODOS DIRECTOS
Coloracin de sabin y feldman
Reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR)
MTODOS INDIRECTOS
Tcnica de ELISA en placas
Pruebas de ELISA en las que se
determina la avidez de los
anticuerpos IgG

TCNICAS SABIN
FELDMAN O DYE
TEST (SF)

El SFDT es la primera prueba de laboratorio desarrollada

Positiva
cuando es mayor de 1/1 000. detecta IgG especficos,
La(1948).
OMS
ha estandarizado
lasque
ampollas
de antitoxoplasma
IgG
limitante
delalgunos
SFDT
es
solo es
realiza
en centrosms
de
Considerada
junto
a pruebas
por
de
IgMcomo
especficas
la "prueba
de
la oro"
combinacin
con
una
potencia
de
20
UI
de
anticuerpos
cada
una.
referencia
el mundo.
sensible enen
fase
aguda.

El fundamento de este
test consiste en poner en
contacto
suero
del
paciente a estudiar el
cual posee taquizotos
(antgenos
especficos),
con
plasma
de
un
humano
seronegativo
parat. Gondii, el cual va
a
proporcionar
los
componentes
del
complemento
inmunolgico, se forma el
complejo
antgenoanticuerpo-complemento
y ante la presencia de
azul de metileno se
produce lisis de estos.

SE UTILIZA UNA
SUSPENSIN DE
TOXOPLASMAS
FORMULADO COMO
ANTGENO QUE
AGLUTINAN AL
PONERSE EN
CONTACTO CON LOS
ANTICUERPOS
ESPECFICOS DEL
SUERO

SE UTILIZAN
DILUCIONES
CRECIENTES CON EL
PROPSITO DE
ESTABLECER UNA
REACCI6N
CUANTITATIVA.

FORMANDO EN LOS
CASOS POSITIVOS UN
MANTO DIFUSO Y EN
LOS NEGATIVOS UN
BOTN EN LA BASE
DEL POCILLO DE LA
MICROPLACA.

MEDIANTE EL
TRATAMIENTO
PREVIO DEL SUERO
CON 2MERCAPTOETANOL,
SE PONE DE
MANIFIESTO LA
PRESENCIA DE IGM.

AGLUTINACIN
DIRECTA

HEMOAGLUTINACIN INDIRECTA (HAI)

Se basa en la propiedad que tienen los
anticuerpos anti-t. Gondii de producir
aglutinacin en presencia de glbulos rojos
sensibilizados
con
antgenos
citoplasmticos y de membrana del
parsito. El empleo de ambos tipos de
antgenos incrementa la sensibilidad del
mtodo permitiendo la deteccin precoz de
la infeccin.
Esta tcnica emplea glbulos rojos de
carnero tratados con cido tnico como
soporte del antgeno de toxoplasma gondii.
Los glbulos rojos sensibilizados con el
antgeno aglutinan formando una malla
cuando se les enfrenta a un suero que
contiene los anticuerpos correspondientes

ENZIMOINMUNOENSAY
O (ELISA)
Avidez-IgG es un
ELISA en el cual
un agente
desestabilizante
de puentes de
hidrgeno, disosia
la unin entre las
IgG especficas y
el antgeno.

Agudo: casi
totalmente
disociadas
antgenoanticuerpo,
Crnico: las ms
fuertemente
unidas a los
antgenos.

Estudios dicen que

este mtodo es
seguro y valioso
para diferenciar
infecciones
agudas de
infecciones
crnicas

El suero del paciente se diluye 1/300 y se procesa

por duplicado en paralelo, una de las muestras es
tratada con diluyente slo (N 1) y la otra con un
reactivo disociante (N 2) (urea en solucin buffer),
el cual cumplir la funcin de despegar el Ac IgG
del antgeno presente en el pocillo del ELISA. Si hay
Ac IgG de toxoplasmosis reciente, su propiedad de
baja avidez y alta disociacin dar una baja lectura
en el duplicado N 2.

Indice se multiplica por 100 y se tiene:

Valores
mayores a 30
%: alta avidez

Valores
entre
20 y 30 %:
mediana avidez

Valores
menores a 20
%: baja avidez
(toxoplas-mosis
aguda)

Isaga (Inmunoabsorcin-aglutinacin)
Es una tcnica de inmunocaptura altamente sensible y
especfica. Es la tcnica ms sensible, con un 98% de
efectividad en las primoinfecciones. Se la utiliza tambin para
la deteccin de IgM, IgA e IgE como marcadores de la fase
aguda de la infeccin en la embarazada y en el recin nacido.
El hallazgo de estas inmunoglobulinas, que no atraviesan
placenta, en sangre del recin nacido es indicio de infeccin
prenatal.

 Caractersticas
Una IgM negativacon una tcnica de inmunocaptura (ISAGA o DSELISA) asociada a IgG en baja concentracin,excluye la infeccin
aguda durante el primero y segundo trimestre permitiendo
considerar a estas embarazadas como previamente inmunes.
Una determinacin de IgM negativa en el tercer trimestre no
descarta la posibilidad de una primoinfeccin en los primeros
meses del embarazo
IgM positiva, si bien es indicio de infeccin aguda, requiere solicitar
otras tcnicas diagnsticas para su confirmacin.

QUIMIOLUMINISCENCIA
Se caracteriza por la emisin de luz visible debido a una reaccin qumica
producida por la oxidacin del ster de acridina empleado como marca. Se
realizan ensayos tanto por competencia como por sandwich .
Las partculas paramagnticas empleadas en estos ensayos ofrecen una
mxima superficie de contacto y una rpida separacin magntica, con una
mnima unin inespecfica

Reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR)
Permite detectar fracciones de ADN del parsito en muestras de sangre del
cordn o del lquido amnitico. Es til para diagnosticar infeccin prenatal

PRUEBAS DE LABORATORIO
VN
Plaquetas
(trombocitopenia)

plaquetas 99000

Hemoglobina

11.7 gr/dl

Mujeres: 12-16
Hombres: 14-18 mg/dl

Hematocrito

35.2%

Mujeres: 37-47
Hombres: 42-52 %

Leucocitos

4300 -8500 (A:2, S:39, M:5,

E:5, B:0, L:49)

Linfocitos atpicos

2%

subpoblaciones
linfocitarias

CD4 608/mm3 (23%),

CD8 1338/mm3 (51%)

Basfilos
Eosinfilos
Linfocitos
Monocitos
Neutrfilos

0-3
0-7
12-50
0-12
40-73

%
%
%
%

590-1,120
330-790 clulas/mm3

Anticuerpos IgM para toxoplasma 84.9 ( 0-40 negativo; 40-80 indefinido y

>80 positivo ).

SNDROMES DE MONONUCLEOSIS:
Fiebre, linfadenomegalias, fatiga y linfocitosis.
Sndrome hemofagocitico secundario o reactivo (SHFR):
Proliferacin de histiocitos de morfologa normal con
intensa actividad fagoctica de clulas hemopoyticas

CONCLUSION
ES
Toxoplasma es un patgeno altamente invasivo capaz de infectar y
proliferar en cualquier clula nucleada generando en consecuencia un
quiste tisular, en el cual permanece de forma latente durante largo tiempo e
inclusive durante toda la vida del individuo.
La diseminacin tisular del parsito, es un proceso que le permite alcanzar
sitios inmunolgicamente privilegiados como placenta y cerebro, en donde
desencadena una serie de patologas que ponen en riesgo la vida del
individuo.
El mecanismo por el cual el parsito se disemina a travs del organismo no
es claro.
Dada la capacidad mvil y de virulencia del parsito es posible que ste
posea mecanismos o herramientas tiles para migrar tanto por la va
intracelular as como por la va extracelular, diseminndose dentro de
clulas permisivas propias del organismo infectado, como los leucocitos.

CONCLUSIONES
Es posible tambin que Toxoplasma pueda distribuirse en el organismo
como taquizoto extracelular.
A la fecha no hay reportes que indiquen la forma de diseminacin del
parsito en el individuo infectado. Su conocimiento permitir el diseo
de estrategias farmacolgicas anti-toxoplsmicas.
La prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI) es ms segura y
proporciona ttulos comparables a los de la prueba de tincin y puede
utilizarse para diferenciar anticuerpos IgM e IgG.
La prueba de aglutinacin directa es relativamente rpida y no requiere
instrumental de laboratorio complicado.
La tcnica del enzimoinmunoensayo requiere un equipamiento de
laboratorio algo ms sofisticado pero permite manejar gran nmero de
muestras y no est sujeta a la interpretacin humana de los resultados.

BIBLIOGRAFIA

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Panamericana, 4 edicin; Madrid, Espaa. 1997

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Sanchez E. Pericarditis por Toxoplasma gondii en un Paciente con Enfermedad de

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http://www.scielo.org.pe/pdf/rmh/v9n2/v9n2cc2.pdf

CUIDATE