UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU- CAMPUS

MINISTRO REIS VELOSO

PS GRADUAO EM BIOTECNOLOGIA
BIOLOGIA MOLECULAR APLICADA A BIOTECNOLOGIA
DOCENTE: GEOVANY REBOUAS PINTO

Sensores electroqumicos de hibridao de DNA

aplicados a amostras biolgicas reais e complexas.
David Rufino Ferreira

BIOSENSORES

Novidade em
relao a
tratamentos
clnicos

Equipamentos
eletroqumicos
portteis

Desenvolvimento
+ recursos
financeiros =
melhora na
velocidade de
diagnsticos
(point of care)

Facilidade de
Implementao
para
minituriazao e
automatizao

Testes Point-of-care:
so exames mdicos
simples que podem ser
realizados no paciente
beira do leito.

Tiras de teste de urina

Ultra-sonografia porttil

Oximetria de pulso
(saturao arterial)

Funcionamento- Bio sensor

Leitor ou
processador
de sinais
Elemento
biolgico
sensvel

Elemento
detector

Bio
sensor

Bio-sensor Funcionamento

 Exemplo de um bio-sensor primitivo e eficaz?

 Uso de canrios em minas de carvo.

Bio-sensor- Funcionamento
O componente biolgico interage especificamente com o analito que produz uma
mudana fsica perto da superfcie do transdutor. Esta mudana fsica pode ser:

1. Calor liberado ou absorvido pela reao (calorimetric biosensors)

2. Produo de um potencial eltrico (potentiometric biosensors).

3. Movimento de eletrons por reao redox(amperometric biosensors).

4. Absoro ou produo de luz(optical biosensors).

Bio-sensor-aplicaes
Monitoramento de glicose em pacientes com diabetes.
Deteco de pesticidas contaminantes como ons de metais pesados

na gua de rios.
Sensoriamento remoto de bactrias no ar (contra-terrorismo)
atividades sensoriamento remoto da qualidade da gua em guas

costeiras.
Deteco de patgenos nveis de determinao de substncias

txicas, antes e depois da bioremediao.

Deteco de metablitos txicos como micotoxinas.

ESTRATGIA DE DETECO EM BIOSENSORES

REAGENT LESS:
Dispensa a adio de reagente
e realizao do processo de
lavagem
Maior rapidez

Mais barato

REAGENT-BASED.

Dependem de
espcies eletroativas
que se ligam
especificamente a
ssDNA ou dsDNA.

BIO-SENSORES
(Wang et al., 1998) Deteco por oxidao de guanina.
Fan et al. (2003) foi o primeiro a descrever o uso de

sondas imobilizadas de Dna parcialmente auto

complementar, rotuladas com um sinalizador eletroativo.

BIOSENSORES

BIOSENSORES

Mtodos baseados em
reagente geralmente
dependem de espcies
eletroativas que se ligam
especificamente a ssDNA ou
dsDNA.

Azul de metileno como

indicador redox

BIOSENSORES- PROVANDO O CONCEITO.

Novo conceito de
deteco proposto

Experimentos inicias
com nucleotdeos
sintticos

Nucleotdeos
Complementares e
no complementares
as sondas de
deteco.

Avaliao e
Comparao com
amostras reais.

Problemas em amostras reais e complexas.

Sequencia alvo
impedida de
hibridizar, levando a
falso negativo;

Juno de
componentes da
matriz por
hibridizao cruzada
com a sonda.

Problemas em amostras reais e complexas.

Hibridizao
ocorre
normalmente
mas o sinal pode
ser suprimido

Quando RNA,
a Sequncia
alvo pode ser
degradada.

Deteco de RNA de amostras sem amplificao do alvo

Detection of ribosomal 16S/18S rRNA
Grande quantidade de cpias
Dispensa amplificao in-vitro
Gau et al., 2001 criou um sistema (MEMS) capaz de

detectar 1000 Clulas de Escherichia coli(E. coli) sem

amplificao por PCR.

Deteco de Dna genmico sem amplificao de alvo

Deteco de Dna genmico sem alvo de amplificao
Taxa de interferncia varia de acordo com o tamanho do

genoma.
Genes duplicados e sequencias conservadas podem ser

usadas nas sondas de captura.

Danio rerio

 Diante do exposto, e considerando o contexto atual do

Brasil, quais seriam os bio-sensores que possivelmente

poderiam ser desenvolvidos para atender uma demanda
urgente em se tratando de sade publica?

Observaes finais
Embora o campo

dos genosensores eletroqumicos tenha

crescido consideravelmente nos ltimos 10 anos e um grande
nmero de estratgias e mtodos de deteco diferentes
estejam disponveis, a maioria dos artigos de pesquisa so
baseados na utilizao de solues puras de oligonucleotides
sintticos para abordar parmetros analticos relevantes, tais
como sensibilidade e seletividade do ensaio de deteco.

O problema reside no fato que isto d apenas informaes

preliminares, como o desempenho do sensor pode ser

totalmente diferente na presena de amostras biologicamente
relevantes, onde a seqncia do alvo est num meio com
excesso de cidos nucleicos no complementares, protenas,
molculas orgnicas, sais e outros componentes indefinidos.

Observaes finais
Em relao ao desenvolvimento industrial e perspectivas

futuras no desenvolvimento de bio-sensores,

requeridos mais estudos em relao a:

so

Automao.
Miniaturizao
Traduo do sinal
Performance dos sensores com amostras biolgicas reais.