FISOLOGA DE

LAS LEVADURAS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL II

INTEGRANTES:
Corona Rodrguez Julieta Ixel
Flores Reyes Brisia
Gil Orozco Hctor
Quechol Ramrez Gerardo

SEMESTRE: 2016-1

GRUPO: 1751

EQUIPO: 11

OBJETIVOS

Conocer las necesidades fisiolgicas de las

levaduras.
Comprender y realizar las tcnicas de
Auxonograma y el Zimograma, para la
identificacin de levaduras.
Conocer la importancia clnica e industrial de
identificar levaduras.

Hongos
Hongos
filamentoso
s

Levaduras

LEVADURAS

Entidades Microbiolgicas
independientes

Unicelulares

Con membrana

Pared celular casi siempre de

quitina

Citoplasma con vacuolas y

ncleo

La pluricelularidd se presenta cuando:

Forma estructuras elaboradas como

seudomicelio (unin de varias clulas)

Candida
albicans

Clamidiospora
s

Blastosporas

FORMA
Globosas
Ovoides
Elongadas
Rectangulares
Cilndricas
Triangulares

REQUERIMIENTOS FISICOS DE
CRECIMIENTO

Rango de pH 2.8 8.5

Optimo 4.5 6.5

Temperatura de crecimiento de O a 47
C
Optima 25C

Necesitan agua para su crecimiento

(al menos 30% de agua en el medio).

El tiempo de crecimiento es de 24 a
48 hrs.

REQUERIMINETOS NUTRICIONALES

Necesitan fuentes de carbono

(azcares).

Carbohidratos de 1 al 10%, sales de

amonio de cidos orgnicos.

Sustancias nutritivas como

compuestos nitrogenados, fosfatos,
vitaminas y sales minerales.

Oligoelementos.

ASIMILACIN Y FERMENTACION DE
CARBOHIDRATOS

Asimilacin: valoran la capacidad de la levadura

para metabolizar en condiciones aerobias,
azcares,
alcoholes
y
cidos
orgnicos.
(Auxonograma)

Fermentacin: estas pruebas demuestran la

capacidad
de
la
levadura,
para
utilizar
determinados carbohidratos, en condiciones
anaerobias. (Zimograma)

ZIMOGRAMA
Prueba bioqumica basada en la
Fermentacin de Carbohidratos

Se realiza en medio de cultivo liquido con porcin de

carbono entre 1-5%

Se agrega un indicador de pH (rojo de fenol o

purpura de bromocresol)

Con campana de fermentacin

Se siembra e incuban a 25oC de 5-15 das

Lectura por viraje del indicador y formacin de gas

AUXONOGRAMA
Prueba bioqumica basada en la utilizacin de
Carbohidratos

Medio solido base peptonado carente de

carbohidratos

se siembra

Posteriormente se agregara el
Carbohidrato a investigar en forma de
penicilindros o discos de papel filtro
impregnados con el sustrato, con una
concentracin del 1-2%

Se incuba a 25oC de 5-15 das

El desarrollo de la colonia alrededor de los

carbohidratos indican (+)

PRUEBA DE LA UREASA
Capacidad de una levadura para hidrolizar la urea en
amoniaco y dixido de carbono por accin de la enzima
ureasa

El amoniaco otorga condiciones

alcalinas al medio y cambia el
indicador (rojo fenol) del amarillo al
rosa
Hongo levaduriforme

Ureasa

Cryptococcus sp

Trichosporon sp

Rhodotorula sp

Malassezia sp

Canida sp

Candida krusei

Geotrichum candidum

Control
Cryptococcus neoformans (+)
Candida albicans (-)

PRUEBA DE UREASA
RPIDA

ALTERNATIVA: Incocular la superficie de un tubo en pico de flauta de

agar-urea de Christensen

PRUEBA DE UREASA RPIDA

SELECTIVA

INCUBACIN

Pasar la punta de un
aplicador de algodn
impregnado con
agar-urea de
Christensen
deshidratado sobre
la superficie de 2 o 3
colonias aisladas del
hongo
INOCULACIN

Colocar el aplicador
inoculado en un tubo
con 3 gotas de cloruro
de benzalconio 1% ( pH
4.86+ 0.01)y rotar en
el fondo del tubo para
depositar el hongo.
Tapar el tubo e inocular
a 45C

Examinar el tubo
despus de 10, 15,
20 y 30 min. El
desarrollo de un
color rojo rosado
indica que el
resultado es
positivo

INTERPRETACIN

REDUCCIN DE NITRATOS

Capacidad de una levadura de reducir

nitritos.
til en la diferenciacin de especies
de Criptococos.

Positivo: El desarrollo inmediato de un

color rosa a rojo intenso
Negativo: Amarillo
Especies de
Cryptococcus

KNO3

C. neoformans

C. Uniguttulatus

C. gastricus

C. laurentii

C. luteolus

C. Albidus var. diffluens

C. Albidus var. albidus

C. terreus

nitratos a

PRUEBA RPIDA DE REDUCCION DE

NITRATO

El aplicador
inoculado se coloca
en un tubo y se
presiona con firmeza
en el fondo del tubo.
El tubo y el hisopo
se incuban durante
10 minutos a 45C.

MEDIO AGAR HARINA DE MAIZ

Composicin
Harina de maiz

2g

Agar

15 g

Polisorbato 80 (Tween 80)

15 ml

Agua destilada

1000 ml

El polisorbato 80 reduce la tensin superficial del

medio
promoviendo
la
produccin
de
clamidoconidios y pseudohifas

Se utiliza para la deteccin

producidas por C. albicans .

Para la diferenciacin de los gneros Cryptococcus,

Saccharomyces, Geotrichum y Trichosporon.

de

clamidosporas

PRODUCCIN DE CLAMIDOSPORAS

Son formas de resistencia, redondas u ovales, de 6-12

m de dimetro y pared gruesa, con aspecto de esporas
laterales o terminales.

Candida
albicans

Candida
dubliniensis

TUBO GERMINAL

Es una prueba til para

diferenciarC.albicans/C.dubliniensi
sdeCndidaNOalbicans.

Se realiza a partir de una colonia

fresca (24-48 h de crecimiento)
utilizando plasma fresco o suero
humano con glucosa incubando a
37 C por mximo 3 horas.

 El tubo germinal es una

extensin filamentosa de la
levadura, sin estrechamiento
(constriccin) en su sitio de
unin con la blastoconidia, que
da lugar a hifas verdaderas.
SloC.
albicans/C.dubliniensisson
capaces de producir
verdaderos tubos germinales

Sin embargo, otras especies

comoC. tropicalispueden
producir seudohifas de aspecto
similar a los tubos germinales
pero con blastoconidias mas
grandes que las deC.albicans.

Para considerar una prueba

como positiva deben observarse
ms de 5 tubos germinales.

Esta es prueba presuntiva ya

que no todos los aislamientos
deC. albicansson tubo
germinal positivo y tambin se
presentan falsos negativos
(hasta 5%C. albicansson
negativas)

Si se utiliza un inoculo
demasiado abundante de
levaduras, tambin pueden
obtenerse falsos resultados
negativos.

CHROMagar

Formula por litro de agua

Cromopeptona

10,0g

Glucosa

20,0

Mezcla
cromgena

2,0

Cloranfebicol

0,5

Agar

15,0

pH 6,0 0,3

Los agares cromognicos son

medios selectivos y diferenciales
disponibles comercialmente.
Contiene una mezcla de sustratos
cromgenos que liberan unos
componentes coloreados diferentes
cuando son degradados por
enzimas especficas producidas por
ciertas especies de Candida.

Este medio permite el desarrollo de las especies ms

comunes deCandiday hongos levaduriformes mediante
la formacin de colonias coloridas diferenciadas:

C. albicans(verde claro),

C. dubliniensis(verde oscuro),

C. tropicalis(azul oscuro),

C. krusei(violeta plido),

C. glabrata(violeta intenso),

Candidaspp. (blanco-crema),

Trichosporonspp. (azul-gris)

Geotrichumspp. (violeta).

CHROMOAGAR

Sirve como medio de cultivos

primarios

Una de las principales

ventajas de estos medios es
permitir diferenciar
fcilmente los cultivos
mixtos.

Permite identificar las

especies clnicamente
importantes del gnero
Candida .

Especie

Tubo germinal

Urea

CHROMagar

C. albicans

Verde claro

C. glabrata

Violeta intenso

C. guillermondii

Violeta plido

C. krusei

Violeta plido

C. parapsilosis

Blanco-crema

C. tropicalis

Azul oscuro

C. dubliniensis

Verde oscuro

Rhodotorulaspp.

No aplica

Saccharomycesspp.

No aplica

Trichosporonspp.

Azul-gris

Geotrichumspp.

Violeta

CRITERIOS PARA IDENTIFICACIN

Macroscpicos (colonias en SabouraudDextrosaAgar)

Microscpicos (Tinciones y Formacin de tubo germinal,

clamidiosporas, hifas, blastoconidias, clamidosporas y artrosporas,
etc. )

Enzimticos (Ureasa, medios cromognicos, Nitrato-reductasa, fenol

oxidasa)

Asimilacin de nutrientes (Auxograma, Zimograma, sustratos

comerciales)

Criterios inmunolgicos ( aglutinacin de particulas de latex con

Anticuerpos especifos)

Sistemas semiautomticos y automticos

Pruebas bioqumicas y enzimticos

Requerimientos de cidos grasos (levaduras lipofilicas)

PRUEBAS COMERCIALES PARA

LEVADURAS

Sistema Uni-Yeast-Tek

API 20C AUX

API-YEAST-IDENT

ID 32 C (bioMrieux)

Sistema Vitek

API 20C AUX

Se compone de 20 cpulas con sustratos deshidratados que permiten

realizar 19 pruebas de asimilacin.

Se inoculan con un medio mnimo semislido, las levaduras slo se

reproducen si son capaces de utilizar el sustrato correspondiente.

Permite identificar un total de 34 especies diferentes.

I
G
O
L
O
D
O
T
E
M
A

PRODUCCIN DE CLAMIDIOESPORAS

Dividir medio agar harina de maz y sembrar

en forma de Z.

Incubar a 37C por 24 a 48 horas.

Observar al microscopio agregando una gota

de solucin salina.

PRODUCCIN DE TUBO GERMINAL

En 2 tubos de ensaye colocar

aproximadamente 1mL de suero de
conejo, carnero o humano
Inocular asada de cepa de hongo en
tubo con suero e incubar a 35C por
3h

Colocar una gota en portaobjetos,

cubrir y observar al microscopio

AUXONOGRAMA.
Suspender la levadura en solucin salina
estril
Sembrar masivamente cada levadura en su
caja correspondiente
Humedecer los discos con c/u de las
soluciones de los carbohidratos, secar el
exceso y colocar los discos en las cajas de
Petri
Incubar a 37C por 24-48h

Reportar el crecimiento

ZIMOGRAMA

Inocular levadura en cada tubo con

carbohidrato y purpura de bromocresol
e incubar.

Incubar a 37C por 24-48h

Reportar si hay fermentacin.

BIBLIOGRAFA

Koneman E. Micologa: Prctica de Laboratorio. 3 edicin, Editorial Panamericana.

Buenos Aires 1987. P. 175-191.

Bayley and Scotts. Diagnstico microbiolgico. 12 edicin. Editorial Mdica

panamericana. Argentina. 2009

Bonifaz A. Micologa Mdica Bsica. Mendez editores. Mxico, 1994.

Arenas Guzmn Roberto. Micologa Mdica ilustrada. 2da. ed. Editorial Mc Graw Hill.
Mxico. 2003.