Enzimas

Concepto de enzima
Los enzimas son generalmente protenas
o asociaciones de protenas y otras
molculas orgnicas e inorgnicas que
actan catalizando los procesos qumicos
que se dan en los seres vivos.
Qu es catalizar?
Acelerar las reacciones qumicas
Disminuir la energa de activacin
Energa de activacin Es la energa necesaria para que una sustancia
A se transforme en otra B

Para que una reaccin se lleve a cabo

las molculas deben alcanzar un estado
energtico determinado (energa de
activacin).
Puede conseguirse esta energa, de dos
formas:

B) CON ENZIMAS

Aumentando la temperatura.
Sin embargo, las enzimas se
desnaturalizan a esa T. Adems,
esa energa debe proceder de
otra reaccin, lo que aumenta el
gasto energtico.

Con enzimas
Las enzimas
rebajan la energa
de activacin

PROPIEDADES GENERALES

AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIN

De 106 a 1012 veces vs sin enzima.
An ms rpido que los catalizadores qumicos.

CONDICIONES DE REACCIN
Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)
pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5
Presin atmosfrica normal

CAPACIDAD DE REGULACIN

Por concentracin de sustrato

Por concentracin de enzima
Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato)
Por inhibidores no competitivos (no semejantes al sustrato)
Por regulacin alostrica

ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIN

Interaccin estereoespecfica con el sustrato
No hay productos colaterales

Caractersticas de las Enzimas

1. Especificidad. Cada enzima cataliza un solo tipo de reaccin, y casi siempre
acta sobre un nico sustrato o sobre un grupo muy reducido de ellos.
2. No forman nunca parte del producto o productos.
3. No se consumen.
4. Son necesarios, por tanto, slo en una pequea cantidad.

Las enzimas actan como un catalizador:

Disminuyen

la energa de activacin.
Energa de activacin
sin la enzima

No cambian el signo ni la cuanta

de la variacin de energa libre.

Al finalizar la reaccin quedan

libres y pueden reutilizarse.

Energa

modifican el equilibrio de la
reaccin.
Aceleran la llegada del equilibrio.

Energa de activacin
con la enzima

No

Energa de los
reactivos
Variacin
de la
energa
Energa de los
productos
Progreso de la reaccin

Mecanismo de la accin enzimtica

1.- se forma un complejo enzima- sustrato
2.- los restos de los aminocidos que configuran el
centro activo catalizan el proceso. Para ello
debilitan los enlaces necesarios para que la
reaccin qumica se lleve a cabo a baja
temperatura y no se necesite una elevada
energa de activacin.
3.- los productos se separan del centro activo y la
enzima se recupera intacta para nuevas catasis

Centro activo: Regin del enzima que se une al

sustrato y donde se realiza la catlisis

Es un bolsillo o hendidura
tridimensional compuesto por
residuos de aminocidos de
diferentes partes de la
molcula que producen un
microambiente especfico.
Es relativamente pequeo en
comparacin con el volumen
total del enzima.
Los sustratos se unen
mediante mltiples
interacciones dbiles. Las
interacciones proveen de la
energa necesaria para reducir
la energa de activacin.
Proporciona la especificidad a
la enzima.

Esquema general de la reaccin enzimtica

Complejo enzimasustrato (ES)

Enzima (E)

Enzima (E)

Sustratos (S)

Productos (P)

E+S

ES

E+P

Modelo de Llave y Cerradura (Emil Fischer)

Substrato y enzima se
acoplan
de
forma
estereospecfica,
de la misma manera que una
llave se ajusta a su
cerradura.
Modelo aceptado durante
mucho tiempo; hoy se
considera insuficiente al no
explicar algunos fenmenos
de la inhibicin enzimtica

Sustrato
Enzima

Complejo enzimasustrato

Modelo de Ajuste Inducido (Koshland)

Tanto la enzima como el
substrato sufren una
alteracin
en
su
estructura por el hecho
fsico de la unin.
Est mucho ms de
acuerdo con todos los
datos
experimentales
conocidos
hasta
el
momento.

Sustrato

Enzima

Complejo enzimasustrato

Nomenclatura
Nomenclatura histrica:
SUSTRATO + ACTIVIDAD + SUFIJO(asa)
(v.g. glucoquinasa)

SUSTRATO + SUFIJO(asa)
(v.g. ureasa)

DONADOR + ACEPTOR + ACTIVIDAD + SUFIJO(asa)

(v.g. oxalacetilaminotransferasa)

Nomenclatura IUB (1972): 6 grupos segn la reaccin

catalizada. Cdigo numrico encabezado por las letras
EC( enzyme commission). Cuatro nmeros separados por puntos

Clasificacin de enzimas por Grupos

EC 1.x Oxidorreductasas
EC 2.x Transferasas
EC 3.x Hidrolasas
EC 4.x Liasas
EC 5.x Isomerasas
EC 6.x Ligasas

1. OXIDORREDUCTASAS
Sin transferencia de hidrgenos

Regulan reacciones REDOX

Con transferencia de hidrgenos

AH2 + B A + BH2

Existen dos tipos esenciales:

Con transferencia de
hidrgenos
Sin transferencia de
hidrgenos

2. TRANSFERASAS

3. HIDROLASAS

Transfieren grupos funcionales

Rotura de enlaces por medio de

agua

4. LIASAS

Rotura o formacin de
molculas sin intervencin de
agua.
Suele producirse adicin a
dobles enlaces: C=C, C=O,
C=N

5. ISOMERASAS
Cambio de posicin de grupos
dentro de la molcula

6. LIGASAS O SINTETASAS

Formacin de enlaces con

rotura de ATP

Factores que influyen en la

actividad enzimtica
Influencia del pH y la temperatura en la actividad enzimtica
Pepsina

Tripsina

pH ptimo

pH ptimo

Cada enzima acta a un pH ptimo.

Los cambios de pH alteran la estructura
terciaria y por tanto, la actividad de la
enzima.

T ptima

Cada enzima tiene una temperatura ptima

para actuar.
Las variaciones de temperatura provocan
cambios en la estructura terciaria o
cuaternaria, alterando la actividad del enzima.

Efecto del pH
Todas
las enzimas presentan un pH ptimo de
actividad. El pH puede afectar de varias maneras:
El centro activo puede contener aminocidos con
grupos ionizados que pueden variar con el pH.

El sustrato puede verse afectado por las variaciones

del pH.

Algunas enzimas presentan variaciones peculiares. La

pepsina del estmago, presenta un ptimo a pH=2, y
la fosfatasa alcalina del intestino un pH= 12

Efecto de la temperatura
Influye en la actividad. El punto ptimo
representa el mximo de actividad.
A temperaturas bajas, las enzimas se hallan
"muy rgidas" y cuando se supera un valor
considerable la actividad cae bruscamente
porque, como protena, la enzima se
desnaturaliza.

Factores que influyen en la actividad

enzimtica
Algunas enzimas requieren la presencia de una molcula no proteica para
la catlisis: son las protenas CONJUGADAS u HOLOENZIMAS

APOENZIMA: parte proteica

COFACTOR: parte no proteica
Segn la complejidad de la
porcin no proteica:
In
Coenzima
Grupo prosttico

Cintica de la reaccin enzimtica

La velocidad de una reaccin enzimtica aumenta de forma lineal hasta alcanzar

un mximo en el que se produce la saturacin de la enzima

Baja
concentracin
de sustrato

ALTA
concentracin
de sustrato
SATURACION

.
.
.
.
.

Efecto de la concentracin de substrato

.
[s]

Representacin directa

Vmax

100

80

60

40

V
K

m x
m

20

s
0
0

20

Km

40

60

80

100

Representacin Lineweaver-Burke

1/Vmax
-1/Km

1
K m 1
1

v V mx s V mx

La concentracin de sustrato a la que la velocidad de reaccin es la mitad de la

velocidad mxima es la constante de Michaelis (Km).
El valor de Km tambin indica la afinidad de la enzima por el sustrato o eficacia
cataltica

Clculo de Actividad
Enzimtica
La velocidad de reaccin catalizada por 0,1ml de
una dilucin 1:100 de Fosfatasa Alcalina es
0,3umoles / min. de producto. Cul es su
actividad enzimtica?
0,1ml-------- 0,3umoles producto / min.
1,0ml------------3,0umoles producto / min.
dil 1:100-------------300umoles
producto / min.
Respuesta: 300U/ml

Inhibicin enzimtica

Inhibidor:
Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de
interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).
Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inactivan a
la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula enzimtica
De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:
I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo
II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la
molcula, causando un cambio conformacional con
repercusin negativa en la actividad enzimtica.

Inhibicin enzimtica
isostrica

Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:

1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,

con el complejo enzima-substrato o con ambos:
E+I

EI

ES + I

ESI

2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la enzima:

E+I

Inhibicin reversible
(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,
impidiendo la fijacin del substrato: Inhibicin Competitiva
(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo
haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijacin del substrato a la enzima, pero s impide la accin
cataltica: Inhibicin No Competitiva
(c) El inhibidor se fija nicamente al complejo enzima-substrato
una vez formado, impidiendo la accin cataltica; este tipo
se conoce como Inhibicin Anticompetitiva

Inhibicin Competitiva

Inhibidores Competitivos
Compiten con el sustrato por el sitio
activo de la enzima
Se une solo a la enzima libre
V mx no se altera y K M cambia

Inhibicin competitiva
Al aumentar la cantidad
de
SUSTRATO
el
inhibidor competitivo es
desplazado y se forma
producto

S
E

ES

E+P

I
EI

Se define una constante de

equilibrio de disociacin del
inhibidor:

[E] [I]
Ki =
[EI]

Caractersticas:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibicin
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo qumico del
substrato.
- El inhibidor es tan especfico como el substrato

En condiciones de equilibrio rpido, llamando y a la concentracin

del complejo EI, para la inhibicin competitiva obtenemos el sistema de ecuaciones

(e0 x y )s
Km
x
(e0 x y )i
Ki
y
Que resuelto para x nos da

e0s

i
Km 1
s
Ki

De donde

s
v

i
Km 1
s
Ki

m x

Por tanto, en la inhibicin competitiva,

1. El efecto cintico del inhibidor es el aumento aparente de la

Km, que aparece multiplicada por el factor (1 + i/Ki)
2. La Vmax no aparece modificada; para concentraciones muy
altas del substrato, v = Vmax, igual que en ausencia de inhibidor
3. Cuanto ms pequeo sea el valor de Ki mayor ser la potencia
del inhibidor competitivo.

Sin inhibidor

Con inhibidor
El inhibidor competitivo
aumenta la Km

Km
Km
Sin
con
inhibidor inhibidor

Inhibicin competitiva - Representacin recproca doble

0.07

1/v

0.06
0.05
0.04

1/Vmax

0.03
0.02

-1/Km

0.01

1/s

0.00
-0.3

-0.2

-0.1

0.0

0.1

0.2

0.3

-1/(Km(1 + i/Ki))

0.4

0.5

0.6

Ejemplo Inhibidor Competitivo

cido succnico + FAD == cido
fumrico + FADH2
El inhibidor competitivo es el cido
malnico
Es un anlogo estructuralmente
parecido al cido succnico

cido Flico y Sulfanilamida

La sulfanilamida es un anlogo estructural
del cido p - aminobenzoico (PABA)
PABA es el punto de partida para la sntesis
de cido flico en las bacterias
El cido flico es una vitamina esencial para
la proliferacin (divisin) bacteriana
Sulfanilamida se usa en el tratamiento
algunas infecciones

Metotrexato y Dihidrofolato
El cido flico en sus formas de dihidro y
tetrahidrofolato es coenzima de la reaccin
catalizada por la dihidrofolato reductasa
Esta reaccin es parte del metabolismo de
los nucletidos para la sntesis de DNA
Metotrexato se usa en la terapia de algunos
cnceres, inhibiendo la sntesis de DNA

Inhibidor competitivo
su estructura es similar a la del sustrato

Noseformaproducto

Inhibicin No Competitiva

Inhibidor No Competitivo
Se une a un lugar diferente del sitio
activo la enzima
Se une a la enzima libre y tambin al
complejo enzima-sustrato
Por accin del inhibidor disminuye la
Vm pero el valor de Km no se altera

Inhibicin NO competitiva

Inhibidor NO competitivo
El inhibidor NO competitivo se une a la enzima en un
sitio diferente del sitio activo

S
E

ES

Inhibicin
No Competitiva

S
EI

E+P

ESI

El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre E

y al complejo enzima-substrato ES; ni el complejo EI
ni el complejo ESI son productivos

Inhibicin Anticompetitiva o
Incompetitiva

Inhibidor Incompetitivo
En este tipo de inhibicin el inhibidor se enlaza al centro activo
pero solo despus de que el sustrato lo haya hecho y, por tanto,
inhibidor y sustrato no compiten. De esta manera, aunque todo
el sustrato est saturando la enzima y toda la enzima est como
complejo ES, el inhibidor puede enlazarse produciendo un
complejo inactivo ESI.
Como I solo se une a ES estimula la formacin de ES y, por
tanto, incrementa la unin del sustrato a la enzima,
disminuyendo Km . Sin embargo, el complejo ESI no conduce a
productos y Vm disminuye.

Inhibidor Incompetitivo
Se une a un lugar diferente del sitio
activo de la enzima
Se une slo al complejo enzimasustrato
Los efectos que tiene: disminuye el
valor de Km y tambin el de Vmx

S
E

ES
ESI

E+P
Inhibicin
Anticompetitiva

El inhibidor slo puede fijarse al complejo ES;

el complejo ESI no es productivo

Determinacin de parmetros cinticos de inhibicin

Modelo
Inh comp
Inh no comp total
Inh anticomp

Kap

Vap

Km(1+i/Ki)

Vm

Km

Vm/(1+i/Ki)

Km/(1+i/Ki)

Vm/(1+i/Ki)

Inhibicin Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
qumico de la enzima, modificndola covalentemente
- Su accin no se describe por una constante de equilibrio Ki,
sino por una constante de velocidad ki:

E+I

- A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los

inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuacin
del inhibidor.
- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente
txicos.

Inhibidores Irreversibles
Producen inactivacin permanente de
la actividad enzimtica
Se interfiere con el normal desarrollo
de una reaccin o va metablica
Ejemplos:
p-cloromercuribenzoato,
yodoacetato, diisopropilfluorfosfato

Algunos tipos de inhibidores irreversibles

1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfricos
3. Ligandos de metales
4. Metales pesados

Inhibicin enzimtica alosterica

Enzimas Alostricas
Son enzimas cuya estructura proteica est formada
de varias subunidades
No se rigen por la cintica de M - M
Adems del sitio o centro activo tienen sitios
alostricos o de regulacin
Sitio activo/sustratos;
Sitio alostrico/moduladores o reguladores
La relacin entre la velocidad de reaccin y la
concentracin de sustrato sigue cintica sigmodea

Enzimas alostricas
Las enzimas alostricas
presentan
estructura
cuaternaria.
Tienen diferentes sitios
activos, unen mas de una
molcula de sustrato
La unin del sustrato es
cooperativa
la curva de velocidad
presenta
una
forma
sigmoidal

Concepto de Cooperatividad
La unin de los sustratos al sitio activo de
una subunidad produce un cambio
conformacional que por contacto fsico se
transmite a las subunidades vecinas,
facilitando las interacciones
Modelos de unin: secuencial y concertado
Ejemplos: unin Hb-O2, enzimas alostricas
y sus sustratos

Moduladores Alostricos
Tambin reciben el nombre de efectores
y pueden ser positivos o negativos
Se unen al sitio alostrico que puede
estar en la misma subunidad que tiene al
sitio activo o en las subunidades
regulatorias
Su
unin
produce
un
cambio
conformacional que afecta al sitio activo

Aspartato Transcarbamilasa
c L-asp + Carbamil-P === Carbamilasp + Pi . Primera reaccin en la
sntesis de pirimidinas
Efector positivo: CTP
Efector negativo: ATP
Tiene dos subunidades catalticas para
los sustratos y tres subunidades
regulatorias para los efectores

Modificacin covalente de las enzimas.

En los enzimas de vas degradativas la forma fosforilada es ms activa que la
desfosforilada. En los procesos biosintticos ocurre exactamente lo contrario.

Rutas metablicas

Tipos de sistemas multienzimticos:

Isoenzimas o Isozimas
Son formas moleculares diferentes de una
misma enzima
Catalizan la misma reaccin
Ejemplo: Lactato deshidrogenasa
Lactato + NAD ==== Piruvato + NADH
M4, M3H1, M2H2, M1H3 y H4
Se diferencian por su movilidad electrofortica
Usadas en clnica: sueros normales y sueros
con alguna patologa

 EXCEPCIN:

RIBOZIMAS. En 1982, Thomas Cech,

y Sidney Altman las descubrieron. No eran
protenas, sino ARN.
En 1989 les concedieron el premio Nobel de Qumica