A descoberta do Material

gentico, sua estrutura

e replicao

Material gentico

Duas cepas de Streptococcus pneumoniae

Griffith e o princpio da transformao

Tratamento 1 - controle

Tratamento 2 - controle

Griffith e o princpio da transformao

Tratamento 3

Tratamento 4

Avery, MacLeod e McCarty: o princpio

da transformao era o DNA

Hershey e Chase: DNA vs protena

Hershey e Chase: DNA vs protena

Hershey e Chase: DNA vs protena

Agitao e
centrifugao

Outras evidncias
Guthrie e Sinsheimer purificaram DNA de um pequeno fago e infectou
bactria
DNA em clulas eucariontes no ncleo, cloroplasto e mitocndria
DNA em clulas eucariontes no ncleo, cloroplasto e mitocndria
O espectro de absoro da luz UV de DNA comparvel ao espectro de
ao da luz UV como agente mutagnico
Direta: tecnologia do DNA recombinante

Blocos de construo do DNA

Nucleotdeo

Tipos de base nitrogenada

Purinas

adenina

guanina

Pirimidinas

timina

citosina

Tipos de acar

desoxirribose

Nucleotdeos vs nucleosdeos

Nucleosdeos difosfato e trifosfato

DNA
Como a sua estrutura foi determinada?

Estrutura do DNA
Chargaff:

Estrutura do DNA
Willian Astburg: periocidade de 3.4 Angstrom
Franklin e Maurice Wilkins

Watson e Crick e a estrutura do DNA

Watson e Crick e a estrutura do DNA

DNA uma dupla hlice voltada para direita
formado de 2 cadeias polinucleotdica antiparalelas
3.4A

As bases se distanciam em 3.4 Angstrom

As bases so perpendiculares ao eixo fosfato-acar
34A

Cada volta completa de 34Angstrom

Uma volta composta por 10 pares de bases
A dupla hlice tem 20Angstrom em dimetro

Watson e Crick e a estrutura do DNA

Watson e Crick e a estrutura do DNA

Outras formas do DNA

B- DNA

Z- DNA

Replicao do DNA

Modelo de replicao semi-conservativa

Nova

Velha

Velha

Nova

Outros Modelos de replicao do DNA

Qual modelo entre os trs propostos

corresponde ao modelo atual de
replicao do DNA ?

Experimento realizado por Meselson e Stahl

Replicao do DNA em procariontes

(Arthur Kornberg)

Cadeia
crescente

Ligao
fosfodiester

dNTP
precursor

Replicao do DNA e DNA polimerase I

Mutante deficiente na atividade de DNA polimerase I

Capaz de replicar DNA e deficiente no reparo

Quais seriam as concluses retiradas dessas

observaes?

DNA polimerases I, II e III

Todas requerem pequeno segmento complementar a fita de
DNA parental para iniciar a sntese (iniciador) e pertencem a
grandes complexos
DNA polimerase I responsvel pela remoo do iniciador
sntese de DNA e possui atividade exonuclease 3 5 e 5 3
DNA polimerase II reparo de DNA
DNA polimerase III sntese de DNA e atividade exonuclease
3 5

DNA polimerase III e suas subunidades

Pol III famlia C - bacteria
core ou ncleo da enzima
polimerizao de nucleotdeos
atividade exonuclease 3 5
ainda discutido
complexo carregamento da enzima no molde de DNA
(5 subunidades) carregador do grampo e une as
subunidades da holoenzima e se liga aos SSB
previne retirada da enzima do molde de DNA grampo
tem formato de anel e liga-se a subunidade da pol III

Direo de sntese do DNA

DNA molde

Primer ou iniciador RNA

Novo DNA

Sumrio da replicao do DNA

Sntese contnua e descontnua do DNA

Incio da replicao do DNA(procariontes)

Hidrolise de ATP

Hidrolise de ATP

Helicases

Sumrio da replicao do DNA

DnaA se liga ao Ori C rico
em AT 13bp 5X
Helicase DnaB 5- 3
lagging + polIII+ primase!
DnaB pode formar novos
primers na leading
Primase DnaG permanece
ligada ao DNA atravs de
SSB e se dissocia deste
depois de ligao da polIII
Na presena de ATP o
carregador do grampo se
liga ao grampo e o abre

Sumrio da replicao do DNA

Complexo se liga ao DNA.
Hidrlise do ATP faz o
carregador do grampo se soltar
Subunidade da polIII se
liga ao grampo e comea a
sntese
Leading replicao semi
contnua forquilha salta
DNAss danificado
Lagging replicao discontnua
complexo dissocia ao trombar
com 5do Okazaki

Sumrio da replicao do DNA

Fragmentos de Okazaki de 1 2 Kb

Trmino da replicao do DNA

Replicao do DNA bidirecional Cairns,

1963
Aps 2 meses

Replicao do DNA bidirecional

Replicao de DNA em eucariotos

Taxa de sntese de DNA
Mltiplas origens de replicao

DNA em eucariotos - Cromatina

Intermediria
Menos condensada

Mais condensada
Horn e Craig, 2002

Replicao de DNA em eucariotos

Replicao de DNA em eucariontes

Levedura- sequncias de replicao autnoma (ARS) AT
ORC complexo de reconhecimento da origem de
replicao do DNA
Polimerases (replicao do DNA nuclear), (reparo do
DNA) e (sntese de DNA mitocondrial)
Polimerase primase, elonga primer e baixa processividade,
reponsvel pelo primer da leading and lagging strand
Polimerases alta processividade e atividade exonuclease
3 5 responsvel pela sntese da leading strand

Replicao de DNA em eucariontes

Lagging strand sintetizada ou por ou por polimerases
RF-C e PCNA anlogos ao carregador do grampo (clamp
loader) e ao grampo (clamp)

RFC e carregador do grampo

Replicao de DNA em eucariotos

e ciclo celular

ORC complexo Orc1-6

Orc 1 (AAA ATPase) + cdc 6 (AAA ATPase) hidrolisa ATP e
aumenta a especificidade de ORC-cdc6 -DNA
Cdc6 necessria para ligao de cdt1-MCM no ORC-cdc6-DNA
MCM helicase desenrola o DNA na direo 3-5,
portanto MCM diferente de DnaB est na leading strand

Replicao de DNA em eucariotos

e ciclo celular

Cdc6 e cdt1 se dissociam e a hidrlise de ATP completa o

carregamento do MCMc
Cdc6 fosforilada em levedura degradada e em mamferos
exportada para fora do ncleo. Para que?
Geminin inibe cdt1. Para que?

Replicao de DNA em eucariotos

e ciclo celular

DDK fosforila MCM e libera domnio A de mcm5; CDK

fosforila Sld2 e Sld3
Dpb1 se liga a origem com cdc45 que se liga ao MCM e a
ativa junto com as GINs. Cdc 45 tb se liga as SSB (RPA)

Replicao de DNA em eucariotos