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Biotecnologa Mdica 2016
Ing.
Betty
Salazar
Pinto
bettysalazar2211@gmail.com
OBJETIVO
Introduccin.
Definicin y objetivos.
Requerimientos.
Etapas.
Caractersticas del proceso.
Variantes del mtodo.
Aplicaciones.
INTRODUCCIN
DEFINICIN Y OBJETIVOS
Amplificacin directa de una
regin especifica: un gen,
fragmento de DNA o cDNA,
presentes en mezclas de muy
diversas fuentes, obtenindose
mltiples copias en corto tiempo.
REQUERIMIENTOS
DNA diana
dNTPs y
Mg
Cebadores
o primers
DNA
polimerasa
o Taq
CARACTERSTICAS DEL
PROCESO
Rendimiento
Duracin
Especificidad
Fidelidad
AUTOMATIZACIN
Uso de termocicladores.
Permite la realizacin de un nmero
elevado de ciclos.
Admite varias decenas de muestras
simultneas con volmenes comprendidos
entre 25 y 100 L.
Se aumenta la precisin del proceso.
Es sencilla y de bajo costo.
VARIANTES DEL
MTODO: qPCR
PCR en tiempo real o PCR cuantitativa
(qPCR), mide la velocidad a la que se va
amplificando el DNA.
RT-PCR
Amplificacin de RNA a
travs de la sntesis
previa de su cDNA, que
despus se amplifica
por PCR.
PCR larga o
L-PCR
Realizar una segunda reaccin de PCR con dos cebadores nuevos que hibridan dentro
del fragmento diana amplificado por el primer par.
PCR anidada
PCR inversa
PCR con
adaptadores
PCR inversa
APLICACIONES
Secuenciacin de cidos nucleicos.
Establecimiento de polimorfismos de secuencia.
Rastreo de mutaciones.
Tipificacin de DNA para trasplante.
Diagnstico de enfermedades genticas.
Resolucin de problemas forenses.
Resolucin de problemas arqueolgicos.
Estudios evolutivos.
Deteccin de clulas tumorales.
Deteccin de microorganismos infecciosos.
MUCHAS
GRACIAS!!