Universidad Nacional Andrs Bello

Facultad de Ecologa & Recursos Naturales

Departamento de Ecologa & Biodiversidad

REVIEW
Zebrash as a Model Vertebrate for Investigating Chemical Toxicity
Pez Cebra como modelo para investigacin de toxicidad qumica en vertebrados
Adrian J. Hill,* Hiroki Teraoka, Warren Heideman,*, and Richard E. Peterson*,,1
*School of Pharmacy, University of Wisconsin, Madison, Wisconsin, 53705; Department of Toxicology, School of
Veterinary Medicine, Rakuno Gakuen University, Ebetsu, Japan; and Molecular and Environmental Toxicology Center,
University of Wisconsin, Madison, Wisconsin, 53705.

Viviana Ahumada
Agustn Cartes
Camilo Pacheco

Introduccin

Valor por su genoma

Infancia y tcnicas de avance y reversa
Identificacin de end points y mecanismos de
toxicidad

Objetivos
La presente revisin tiene como objetivo

demostrar por qu el pez cebra (Danio rerio) es

un buen modelo para la investigacin de
toxicidad en vertebrados, con la practica de
distintas pruebas, que muestran cmo se ve
afectado bajo distintos txicos y experimentando
distintas patologas que sern marcadas como
endpoints.

 Similitudes en Phylum

Principales
Beneficios

 Fecundidad y embriones

End points

transgeneracionales

Prevencin de la

pigmentacin con 0,003%

feniltiourea

 Genoma del pez cebra

Uso de trangenicos

Estrategias con Morfolino

Genetica Inversa Sustitucion de
Nucleotidos.

Oligonucleotidos Morfolinos
Acidos nucleicos artificiales.

Objetivo ARNm.
Morfolino + Peces Zebras

Mutantes Definicion de los

genes funcionales requeridos
para el normal desarrollo.

Peces Cebras Mutantes: Uso en

estudios de toxicidad y
enfermedades humanas
Comparaciones entre normales y mutantes End Points.
Resistentes.
Limitaciones fenotipos claramente visibles.
ENU (N-etil-N-nitrosourea) : Morfogenesis,
Organogenesis, Diferenciacion.

Modelos enfermedades humanas

Fenotipos Mutantes
Lonely atrium
Bypass
Soni you
You Too
You
Kurzschluss
Chameleon
Viper
Weak atrium
Heart attack
Slop
Slinky
Still Heart

Defectos en sistema
circulatorio

Debilidad en contraccion
en 1 o 2 camaras

Fenotipos Mutantes
Breakdance
Hip Hop
Leg long
Slip Jig

Milesapart
Fausto
Casanova
Natter
One eye
pinhead

Ritmo cardiaco anormal

Cardiobifida

Pikwik Titina Cardiomiopatias

Silen Heart TNNT2 Cardiomiopatias
String Heart TbX5 Sindrome de Holt Omam

Cultivo de Celulas y Tecnologia de

Microarrays
Lineas celulares Adultos y
Embriones

Transfeccion COS7,

elementos de respuesta a
dioxinas por luciferasa

Microarrays Genoma
completo Pez Cebra

Toxicidad aguda y efectos

adversos en el pez cebra (adultos
y jovenes)
Limitados
Plomo, Uranio, Malatin, Metronidazol,
Anilinas, Colchicina.

Se utilizan por su genetica y biologia

Ejemplos:
Peces expuestos a lindano, deltametrina y
atrazina por 35 dias para observar
anomalias morfologicas y supervivencia.
Peces expuestos a 17a-etinilestradiol y 17betinilestradiol , diferenciacion sexual
juvenil y caracteristicas sexuales adulto

A tener en cuenta antes de usar el

modelo de Pez Cebra
Cronico, Subcronico y Agudo
Aromaticos, pesticidas,

disruptores endocrinos, acido

retinoico y ciclopamina.

2,3,7,8-tetraclorodibinzeno-pdioxina (TCDD)

Como responde a la exposicion

de TCDD el Pez Cebra?
Huevos recien fertilizados
edema saco pericardico,
tamao de corazon
reducido, alteracion funcion
cardiovascular (reduccion
gasto cardiaco), isquemia
tejido perisferico, desarrollo
de mandibula deteriorada,
hemorragias y vejiga
natatoria desinflada que
culminan con mortalidad.

Sensibilidad.
Eclosion.

Mediacin de la toxicidad por DDTC

Algunas dibenzo-p-dioxinas (PCDD), dibenzofuranos (PCDF),

y bifenilos (PCB) han ejercido una accin toxica a travs de

la va AHR en el pez cebra.
Uso de clulas COS-7 para investigar genes del pez cebra
por ensayos de transactivacin con un reporte de luiferasa.
zfAHR2= forma de AHR involucrada en la mediacin del
desarrollo de toxicidad de DDTC en el pez cebra.
Conclusiones respaldadas con inyeccin de un
oligonucleotidos morfolinos contra zf AHR2 como
prevencin de la manifestacin de toxicidad.
Se usaron anticuerpos CYP1A para mostrar induccin en
varios tejidos como en vasculatura embrionaria, pero fallo,
mostrando el desarrollo de endpoints.

FIG. 2. Morpholino targeted against zfAHR2 rescued embryos fromTCDD

toxicity, whereas an ARNT2 mutant zebrafish shows the typical endpoints of
TCDD toxicity. These results helped determine that AHR2 (not AHR1) and
ARNT1 (not ARNT2) were the key dimerization partners required for AHR
mediated TCDD developmental toxicity in zebrafish. Wild type embryos
exposed to a vehicle control (A) and embryos injected with zfAHR2-MO
exposed to 0.4 ng/ml TCDD (C) show no endpoints of TCDD toxicity, whereas
wild type (B) and ARNT2 mutant embryos (D) exposed to 0.4 ng/ml TCDD
show typical endpoints of toxicity such as P: pericardial edema, and C:
craniofacial malformations. Embryos were exposed at 2 hpf for 1 h to TCDD
and then allowed to develop in TCDD-free
water prior to observation at 96 hpf.

Modelos alternativos al pez cebra

El modelo ms cercano al pez cebra es Medaka (Oryzias latipes).
Diferencias, euritermal (0-40C) y expectativa de vida.
Primer pez en el que se estableci una lnea transgenica estable.
Lneas transgenicas de hoy en da tienen mas ventajas respecto

al pez cebra, ya que permiten una efectiva visualizacin de GFP,

por lo que tambin sirve para estudios toxicolgicos.

Especies de peces modelos

complementarios
Algunas especies ya han sido

establecidas como un buen

modelo para disciplinas como
la Toxicologa, como por
ejemplo las carpas.
Esta y otras especies al tener
una gentica similar, se
pueden usar para corroborar
los hallazgos en el pez cebra.
Pez Globo, ntimamente
relacionado con el pez cebra,
por lo que es un importante
modelo complementario para
el pez cebra.

Discusin

Creemos que la utilizacin del pez cebra como modelo

biolgico es una alternativa totalmente favorable, debido a
que esta casi totalmente descifrado su genoma, tiene una
biologa muy simple por lo cual criarlo en cautiverio es muy
sencillo y no requiere grandes costos de mantencin. A
dems su alta capacidad de presentar fenotipos mutantes
ayuda entre otras cosas a estudiar, entender y homologar
enfermedades en modelos humanos tales como las
cardiomiopatias o afecciones vasculares sin necesidad de
hacerlo en modelos biolgicos mas complejos y caros. Se
debiesen realizar ms estudios toxicologicos con el fin de
determinar la real naturaleza de estos y como pueden
afectar nuestra integridad y la de otros seres vivos.

Conclusin
El pez cebra, como vertebrado modelo para estudios de

toxicologa, farmacologa, desarrollo de la biologa, solo esta

comenzando.

Ser mas comn establecer endpoints nuevos para txicos

y terapias en el pez cebra, por nuevas tecnologas.

Estos avances ayudaran a proporcionar buenas ideas en el

mecanismo de los qumicos en toxicologa, y a descubrir
nuevas drogas para el tratamiento en enfermedades
humanas.