APLICACIN DEL HONGO

PLEOROTUS OSTREATUS
COMO ALTERNATIVA PARA
LA BIOREMEDIACION DE
SUELOS CONTAMINADOS
CON METALES PESADOS

ANTECEDENTES Y JUSTIFICACION
Los contaminantes como metales
pesados (Cd, Hg, Pb, Cu, Ni, Sb, Bi)
tienen la capacidad de provocar
cambios evolutivos debido a sus
efectos dainos. Son potencialmente
contaminantes devastadores ya que
contaminan el aire, el agua y la tierra.

Entre las contaminaciones ms

severas se consideran a aquellas
producidas por los Metales Pesados
porque tienden a bioacumularse.

En la actualidad las actividades de las

transnacionales
mineras
y
de
hidroelctricas
privadas
estn
causando
conflictividad
social.
Amenaza la vida y el ambiente.

La minera en pequea escala ha

sido fuente del deterioro del medio
ambiente local

La explotacin minera a gran

escala produce un impacto
directo en el suelo, flora, fauna y
el agua. En la fase de
prospeccin y exploracin

La Agencia de Proteccin Ambiental

(EPA) de los Estados Unidos ha
determinado una serie de lmites para las
concentraciones de metales pesados.

Actualmente para disminuir los

impactos de la bioacumulacin existen
alternativas de manejo y de
eliminacin o fijacin de dichos
metales a travs del uso de
microorganismos propios del entorno
que permiten disminuir por medio de
sus procesos bioqumicos la presencia
de dichos metales pesados.

Pleurotus Ostreatus

El residuo producido puede ser utilizado de

numerosas formas tales como produccin de
biogs, produccin de papel o cartn,
mejoradores de suelo, lombricultura, etc. .
Es un gran colonizador capaz de desplazar otros
organismos, lo cual requiere menos energa para eliminar
probables contaminantes
Sus principales substratos de crecimiento son
residuos vegetales ricos en ligninas
(lignvoros) como maderas, cscaras y p ajas
de cereales.

Desarrollo del cultivo a menores

costos en diferentes regiones
geogrficas, debido a que se
pueden utilizar cepas que resultan
adecuadas para las diversas
temperaturas reinantes en dichas
regiones siempre que estas sean
ms o menos constan es.
El residuo producido puede ser utilizado de
numerosas formas tales como produccin de
biogs, produccin de papel o cartn,
mejoradores de suelo, lombricultura, etc.
Desarrollo del cultivo a menores costos en
diferentes regiones geogrficas, debido a que se
pueden utilizar cepas que resultan adecuadas
para las diversas temperaturas reinantes en
dichas regiones siempre que estas sean ms o
menos constan es.

METALES PESADOS
ELEMENTOS METALICOS DE ELEVADA DENSIDAD
ALGUNOS OTROS NO METALES O METALOIDES
EN CONJUNTOS, SE DEFINEN COMO AQUELLOS
ELEMENTOS QUE SON MUY TOXICOS, AUN EN
CONCENTRACIONES MUY MUY PEQUEAS
ALGUNOS EJEMPLOS COMO EL PLOMO Y EL CADMIO

CONTAMINACION DE SUELOS
POR METALES PESADOS
ESTA ES GENERALMENTE PRODUCIDA POR LA ACTIVIDAD
MINERAA E INDUSTRIAL
ESTO SUCEDE CUANDO SE SOBREPASA UN UMBRAL DE
SEGURIDAD AMBIENTAL ES EXCEDIDO, PRODUCTO DE UNA
EMISION CONTINUA DE CONTAMINANTES AL SUELO
LOS CONTAMINANTES PUEDEN BIOMAGNIFICARSE Y
ACUMULARSE EN EL SUELO POR TIEMPOS MUY PROLONGADOS
EL IMPACTO OCASIONADO DEBE SER MEDIDO EN TERMINOS DE
REVERSIBILIDAD, MAGNITUD Y EXTENSIN

EFECTOS DE LA
CONTAMINACION POR
METALES PESADOS
PUEDEN GENERARSE LOS SIGUIENTES EFECTOS

GENERAR ESTRESS OXIDATIVO

COMPITEN CON METALES ESENCIALES

Los metales y metaloides

pueden generar estres
oxidativo
Daos en lpidos de
membrana
Daos en protenas
Daos en cidos nucleicos
Daos metablicos que
pueden conducir a la
muerte
Mutagnico

Los metales y metaloides

compiten con metales
esenciales
Compiten por los sistemas
de transporte, disminuyendo
la concentracin efectiva del
metal esencial
Activan receptores de
membrana
desencadenando
reacciones en cadena
Reemplazan a metales
esenciales en biomolculas,
alterando su funcionamiento
Reaccionan con grupos
funcionales de
biomolculas, alterando su
funcionamiento

BIOREMEDIACIN DE METALES
PESADOS
Surge como alternativa a los procesos fsico qumicos de remediacin ,
debido a los altos costos, la baja especificidad del los mismos y su
dificultad de aplicacin in situ
Uno de los objetivos de la bioremediacin es aumentar y mejorar la
biodegradacin por organismos nativos, que se conoce como
bioremediacin intrnseca, o por medio de la adicin de organismos
(bioaumento)
La biorremediacin usando hongos de la putrefaccin es una tecnologa
muy prometedora la cual est siendo estudiada. Muchos estudios se
enfocan en la habilidad que tienen con la degradacin de compuestos
persistentes, principalmente los de la familia Phanerocaete donde se
encuentra el hongo Pleurotus Ostreatus, degradador de lignina

GENERO PLEUROTUS
Las sets de este gnero son saprofitas, se alimentan de
materia muerta. Son de alto contenido protenico. Es una seta
variable, el sombrerillo tiene un tamao que depende de la
edad y de las condiciones de desarrollo. Oscila de 5 a 20 cm
de dimetro. La forma tambin depende de la edad.

CLASIFICACIN
Pleurotus ostreatus
Reino:
Subreino:

Fungi
Fungi superior

Divisin:

Basidiomycota

Superclase:

Holobasidiomycia

Clase:

Hymenomycetes

Orden:

Agaricales

Familia:

Tricholomataceae

Gnero:

Pleurotus

Especie:

Pleurotus ostreatus

Pleurotus ostreatus como

biorremediador
Pleurotus ostreatus es un hongo de pudricin blanca, capaz de
romper una gran cantidad de enlaces diferentes y por tanto
degradar una gran variedad de compuestos orgnicos.
Dentro de las enzimas constituyentes del complejo multienzimatico
ligninolitico de Pleurotus spp. se encuentra la lacasa, enzima
presenten en hongos de pudricin blanca, esta enzima cataliza la
oxidacin, polimerizacin, depolimerizacion, metilacin de
compuestos fenlicos.
La enzima lacasa degrada lignina. Para catalizar estas
reacciones poderosas la enzima requiere perxido de hidrogeno,
la cual el hongo produce.
Poseen hifas que penetran el suelo contaminado y producen
enzimas para degradar el contaminante.
Buenos en la acumulacin de metales pesados como Cd, Cu,
Hg, Pb y Zn.

LIGNINASAS: ENZIMA LACASA

OBJETIVOS
OBJETIVO
GENERAL
Comprobar
la
eficacia
como biorremediador el
hongo
Pleurotus
ostreatus
en
suelos
contaminados por metales
pesados.

OBJETIVOS
ESPECIFICOS

Estudiar las concentraciones de los

residuos, segn relacin tiempo,
despus de aplicar el hongo Pleurotus
ostreatus.

Estudiar la absorcin del hongo Pleurotus

ostreatus para cada metal pesado
estudiado.

PRINCIPALES IMPACTOS

La aplicacin de una
alternativa de remediar
los impactos
ambientales producto
de actividades de
explotacin minera con
ayuda de agentes
biolgicos

-Se evitaran
enfermedades que el
hombre contrae por el
uso de estos suelos en
la agricultura, y el
consumo de agua
contaminada, los costos
de salud publica
disminuye.
- Mejora de los suelos
para la agricultura.

- Disminuye la
proporcin de metales
pesados, producto de la
actividad humana.
- Ingresar un hongo
ser capaz de realizar
colonizaciones
primarias y secundarias
permitiendo ser un
tratamiento perenne en
el tiempo.

REA DE ESTUDIO

Situacin Geogrfica:

CANTON: Zaruma

CANTON: Portovelo

SUPERFICIE: 643.5 Km2

SUPERFICIE: 286.2 Km2

POBLACION: 25.000

POBLACION: 15.000 Habitantes

DENDIDAD POBLACIONAL: 38.85 DENSIDADPOBLACIONAL:52.41H

ab/Km2

Mapa de Susceptibilidad de Riesgos Geodinamicos de Zaruma y Portovelo

Escala 1:30.000

MATERIALES Y MTODOS:
Los puntos de muestreo sern seleccionados en base
de una red homogneo en forma de cuadricula 100
X100m diseada sobre un mapa topogrfico de la
zona (Zaruma Portovelo) Ajustndose algunos de
los puntos en base a las cantidades de bocaminas
existentes.

Obtencin de las muestras de suelo.

Se tom 12 puntos.
En cada uno de los puntos de muestreo se escogi muestras de suelo
de aproximadamente de 2 Kg.
Son 12 muestras de suelo de cada rea para tener suficiente muestra
con 3 rplicas para cada metal estudiado.
Luego el remanente se pulverizo con un mortero y se guard en bolsas
estriles.
Para colectar la muestra se utiliz cucharas y bolsas plsticas, ambas
estriles.
Para no alterar la composicin de microorganismos del lugar.
En el lugar con equipo multiparmetro se midi los parmetros
abiticos: Temperatura (C), Humedad relativa (%) y pH.

Extraccin de Metales

Primero

Segundo

Se inciner los crisoles en el horno, por 2 h. a 600C

Se aadi 1g de tierra (P1),se coloc al horno durante 18-20 horas a
110C (H)
Hs=P1-P2

Los crisoles nuevamente al horno por 3 h. a 600C, enfriar en el

desecador
Se transfirieron a un vaso de precipitado de 600ml. Se aadi 3
porciones de 1ml de HCl concentrado y de ah, el cido con los
residuos de la muestra se pasaron al vaso de precipitado que
contena la muestra de suelo.
Luego se aadi 1ml de cido ntrico al crisol. La misma accin se
realiza con 3 porciones de 1ml de cido clorhdrico al 10%.

Tercero

Cuarto

Quinto

Se utilizaron cristales de reloj para tapar los vasos de precipitado los que se calentaron en
un hot plate (~350C) por aprox. 15 min.
Se dej enfriar a temperatura del saln para luego agregar las mismas porciones de cido
clorhdrico y ntrico, pero esta vez directo al beaker de la muestra.

Se calent en el hot plate, se dej reposar para que se enfriaran y todo el contenido del
beaker se filtr
Durante el proceso de filtracin se lav el residuo con HCl 10% (incoloro).
El papel filtro tambin se enjuag varias veces con HCl 10% hasta que se removi
completamente todo el residuo.

Por ltimo el filtrado se transfiri a botellas plsticas debidamente rotuladas y con tapa
para ser almacenadas hasta el momento de la lectura con el Espectrofotmetro de
Absorcin Atmica

Comprobacin, obtencin y mantenimiento

de Pleurotus

Antes de comenzar el tratamiento, se verifico que el suelo

a remediar no contenga el hongo Pleurotus Ostreatus.
Para esto, se diluy 20g de tierra en 20ml de agua estril
y se homogeniz y se deposit en 10 cajas Petri, estos se
dividieron en dos grupos: 5 en medio de cultivo SDA
(Saboraud Dextrose Agar) y 5 en medio de cultivo MEA
(Malt Extract Agar).

Posteriormente se incubaron a 25C por una semana,

esto dar la aprobacin al suelo a tratar para luego aplicar
el hongo.

Preparacin del Inoculo

El hongo liofilizado Pleurotus Ostreatus, se transfiri a
otros platos Petri con diferentes medios de cultivo: SDA
y MEA para su multiplicacin y mantenimiento; para ello,
se prepar 5 cultivos en medio SPA y 5 cultivos en
medio MEA.
Los cuales se incubaron a 25C por 7 das hasta que el
micelio crezca y cubra el plato Petri completamente.

Este proceso se llev a cabo cada dos semanas

despus del crecimiento total del micelio.

Tratamiento
En 12 tubos de ensayo se coloc aprox. 1g de muestra del suelo,
6 fueron seleccionados para tratamiento
6 para control

-Tubos del tratamiento:

2 fueron rotulados al tiempo inicial,
2 a 15 das
y los 2 restantes a 30 das,
Se les coloco inoculo 5ufm/ml del hongo Pleurotus a los platos Petri
con micelio obtenido de los medios SDA posteriormente tratamiento y
control fueron incubados a temperatura ambiente.

Extraccin y
lectura (15 y
30 dias)

Metales pesados de los

tubos inoculados

Capacidad de remocin
de los metales pesados
presentes en el suelo
tratado, grupo control

Presencia
del hongo
Pleurotus

Realiz previamente
una extraccin de la
muestra del suelo
sembrado donde se
inocul con micro pipeta
el sobrenadante en
medios SDA y MEA

Respectivamente que
fueron incubados a
temperatura ambiente y
ledos 15 das
posteriormente.

Anlisis de datos
De los datos obtenidos del grupo control y del tratamiento
se realiz una prueba Anova de dos vas en donde se midi
el efecto del hongo a base del tiempo, del rea y de la
interaccin del tiempo-rea.
Tambin se realiz una prueba Tukey para determinar en
donde se encontraban las diferencias significativas con
relacin al tiempo-rea y la interaccin tiempo-rea.

Actividades y Costos

Distribucin del Presupuesto

Cromatografa

 Los valores obtenidos al momento de recoleccin de la muestra de los

parmetros de temperatura, humedad relativa y pH fueron los siguientes :
Para la temperatura 30.8C; humedad relativa fue69.2 y el pH 8.4

Se evalu la eficacia de remocin del hongo en elacin con los diferentes

metales pesados presentes en las muestras siendo ms efectiva la remocin
de Co, CD y en menor proporcin para Pb y Cu

El efecto de la relacin tiempo- concentracin no es directamente

proporcional a la concentracin de los metales ni la concentracin del inoculo

La concentracin del inoculo fue solo eficiente para cierto tipo de metales
pesados

Los parmetros ambientales no afectan directamente a la fijacin del hongo

por metales pesados
RESULTADOS:

CONCLUSIONES:
A travs del proyecto se presentara y se demostrara los beneficios de la
biorremediacion como mtodo de limpieza de suelos contaminados por metales
pesados que es una alternativa viable con el hongo Pleurotus Ostreatus , que
tiene capacidad de remover los metales pesados
A partir de este estudio se da hincapi a la contaminacin minera que existe en
Ecuador y no solo en este pas puesto que es una problemtica mundial, debido
una opcin econmica `para la mejora del ambiente y del cual somos
beneficiados
Es importante considerar que el inoculo propuesto solo es capaz de trabajar
sobre una determinada concentracin de metales pesados pero si esta se ve
incrementada por ms actividades humanas posiblemente sea una causa para
el fallo del tratamiento
La capacidad del hongo no depende directamente de las condiciones
ambientales idneas, ni de la concentracin de los metales pesados, si no que
ste est supeditado a la concentracin del contaminante