TEMA: COLORACIONES USADAS EN CITOLOGA

DOCENTE: LIC. TM. CELSO COTRINA

PRESENTADO POR:
HUANCA TAPARA JHON JOS
HERRERA ESPINOZA GUSTAVO
ROMERO TROCIOS EVELIN

INTRODUCCIN:

LA TINCIN:
Proceso de coloracin
de clulas o
componentes celulares
para que sea posible su
observacin bajo el
microscopio.

OBJETIVO:
Visualizacin de clulas
por medio de la
coloracin.

COLORACIONES

CIDOS:

Sales cuya base es incolora y su

acido es coloreado (eosina o
eosinato de Na).
Tienen apetencia por sustancias
bsicas, sobre todo estructuras
proteicas localizadas en el
citoplasma celular y tambin
por el colgeno de la matriz
extracelular
Colorantes citoplasmticos.

BSICOS:

Sales cuya base es coloreada y

el cido es incoloro (AzMe o
clorhidrato de AzMe.
sustancias cidas del tejido
como
el
ADN
o
ciertos
componentes de la matriz
extracelular
como
los
glicosaminoglicanos. As, ponen
de manifiesto el ncleo y el ARN
Colorantes nucleares.)

NEUTROS
poseen una porcin cida y otra bsica, ambas
con capacidad para aportar color. Por tanto un
mismo colorante puede teir tanto las partes
bsicas como las cidas de los tejidos. Por
ejemplo, el eosinato de azul de metileno.

MTODOS DE COLORACIN

Coloracin directa: afinidad entre

colorante y objeto.
Coloracin
indirecta:
uso
de
mordientes para coloracin.
Coloracin progresiva: acta en
colorante hasta un punto optimo.
Coloracin regresiva: primero sobre
coloracin y luego eliminar el resto
de colorante.
Coloracin simple: colorea algunos
elementos.
Coloracin combinada: uso sucesivo
de colores bsicos y cidos.
Coloracin panptica:
colorantes
neutros.
Coloracin pancrmica: en un solo
bao colorante actan todos los
colorantes neutros que necesiten.

OBJETIVOS:
Visualizacin optima de
la clula.
Diferenciacin de los
tipos celulares.
Anlisis y evaluacin
especifica de la
estructura nuclear.
Anlisis citoplasmtico.

TINCIN PAPANICOLAOU

Usa
colorante
nuclear
(hematoxilina).
Colorantes citoplasmticos
(Orange G, eosina, verde
luz SF y pardo Bismark
(EA)).
Tcnica
diferencial
(policroma). Usada para
visualizar
estadios
madurativos
de
cel.
Vaginales.

Posee tres colorantes:

SECUENCIA DE LA TINCIN
1. Alcohol 96 por 1 min. 30 seg.
2. Alcohol 70 por 1 min. 30 seg.
3. Agua destilada 1 miin. 30 seg.
4. Hematoxilina 1 min. 30 seg.
5. H20 1 min. 30 seg.
6. H2O 1 min. 30 seg.
7. Alcohol acido 1 min. 30 seg.
8. H20 1 min. 30 seg.
9. H2O 1 min. 30 seg.
10. Alcohol 50 130 segundos
11. Alcohol 70 130 segundos
12. Alcohol 96 130 segundos

13. OG-6 130 segundos

14. OG-6 130 segundos
15. Alcohol 96 130 segundos
17. EA-50 130 segundos
18. Alcohol 96 130 segundos
19. Alcohol 96 130 segundos
20. Alcohol 96 130 segundos
21. Alcohol absoluto 130
segundos
22. Alcohol absoluto 130
segundos
23. Xilol 130 segundos

FUNCIN DEL REACTIVO

HEMATOXILINA:
tincin
nuclear
OG
y
EA
50:
tincin
citoplasmtica, penetra al
citoplasma
y
tie
el
citoplasma
del
epitelio
escamoso simple maduro y
queratinizado.
Alcohol
absoluto:
deshidratacin total

HEMATOXILINA
La ms utilizada es la
hematoxilina de Harris.
Es el colorante de las
estructuras nucleares,
que se ponen de un
tono azul oscuro.
Los
nuclolos
se
colorean
rosados
o
rojos, debido a la
tincin selectiva, que
proporciona la eosina,
utilizada
como
colorante
citoplasmtico.

PRINCIPIO

Se extrae del palo de Campeche.

La hematoxilina en s, es un compuesto sin propiedades

colorantes.

Es un producto de su oxidacin, la hematena, la que le

confiere dichas propiedades.

Esta oxidacin puede producirse de forma espontnea o

inducida.

La primera opcin es lenta pues implica la oxidacin natural

debida al aire y la luz.

La segunda, muy rpida o instantnea, implica el uso de algn

agente oxidante como el mercurio o el yodo, sin embargo,
esto provoca que la durabilidad de la tincin se vea reducida,
ya que la hematena tambin puede ser oxidada.

SECUENCIA DE
TINCIN

NARANJA G
Es
el
colorante
del
citoplasma junto a la
solucin de pardo de
Bismark.
La preparacin de la
solucin
se
puede
realizar tanto en el
laboratorio
como
encontrarse como OG-G,
que va a teir de colora
naranja los citoplasmas
celulares que poeseen
queratina ( clulas del
carcinoma
epidermoide).

MAY GRNWALD

Solucin de Eosinatos de Azul y Azures de

metileno en Metanol-Glicerina, preparadas
a base de colorantes de acentuado poder
policromatfilo y metacromtico.

Tambin denominada como panptico, se

utiliza sobre material secado al aire, en
citologas por puncin - aspiracin.

Esta tcnica consiste en una combinacin

de dos coloraciones sucesivas, la mayGrnwald- giemsa , que se utilizan
diferentes variantes de azul de metileno.

Con esta tincin se resaltan detalles del

citoplasma; vacuolas grnulos o mucina y
los distintos componentes del fondo como
la maz mixoides, el colgeno, la mucina o
el coloide.( tincion citopatologica y
hematologica)

COLORACIN DE DIFFQUIK

Consta de tres soluciones: una

azul claro que es un fijador: la
segunda anaranjada (Solucin I )y
la tercera ( azul oscuro),como
solucin II .

Para pasar de una solucin a otra

no se necesita agua, y el tiempo
de coloracin en cada una de ellas
va a depender de la urgencia de la
tincin,
aunque
el
tiempo
recomendado es de tres minutos.

Se
deben
de
dejar
las
preparaciones listas y una ves
secas, montarlas con esta tcnica
se
van
obtener
las
mismas
tonalidades que con la tcnica
may- Grnwald- giemsa.

Esta tcnica se realiza con la

mitad de tiempo requerido para
las restantes tcnicas citologicas
de rutina.

Otra ventaja
es que las
preparaciones teidas se pueden
colorear de nuevo mediante
Papanicolaou
o
hematoxilinaeosina, sin tener que decolorarlas
previamente, esta tcnica see
realiza en tres pasos:

Fijar en solucin comercial

Solucin I 20MIN
Solucion II 20MIN
Lavar con agua corriente y
montar en seco

MUCICARMN

Compuesto
por
Solucin
Mucicarmn
Concentrada y Solucin Actica de Tartrazina.
Para la identificacin de sitios de tumores
primarios, distinguiendo las lesiones de clulas
escamosas indiferenciadas mucina-negativas
de los adenocarcinomas mucina positiva.

SECUENCIA DE TINCION
1 Deparafinar e hidratar
2 Teir con Hematoxilina frrica de Weigert, de reciente
preparacin, durante 5 minutos.
3 Lavar con agua corriente por 5 minutos.
4 Teir con Solucin Mucicarmin, durante 30 minutos como
mnimo, a temperatura ambiente. La intensidad de la tincin
debe controlarse con el microscopio. El tiempo puede disminuirse
tiendo a 56 C.
5 Pasar por agua destilada. Histologa y Citologa Avanzada III 37

SECUENCIA DE TINCION
6 Teir con Solucin actica de Tartrazina entre
1 y 5 segundos.
7 Pasar por agua destilada.
8 Deshidratar y aclarar con, Deshidratante
9 Montaje.
La Solucin Mucicarmn se prepara diluyendo
una parte de la Solucin Mucicarmn
concentrada, con tres partes de agua destilada.

Observacin
esperada:
Ncleos Negro
Mucina Rosado a Rojo
Otros elementos del
tejido Amarillo

PAS (Solucin de Acido Peridico de Schiff)

Para la demostracin de componentes
celulares que contienen glicoles, como
carbohidratos, glicoprotenas, etc.
Permite la observacin de membranas basales
y algunas mucinas. Tie de rojo a las
estructuras que han liberado los aldehdos.

Ser positiva para las siguientes estructuras:

Membrana basal, clulas caliciformes, clulas
que contengan glucgeno como por ejemplo los
Hepatocitos y las clulas musculares.
Existen otras sustancias que no son hidratos de
carbono pero que son Pas positivas como los
lpidos no saturados, fibras colgena y reticular.

SECUENCIA DE TINCION
1. Depara finar e hidratar
2. Lavar con agua corriente 5 - 10 minutos.
3. Sumergir en Solucin de Acido Peridico (llevado a temperatura
de laboratorio) 15 a 20 minutos.
4. Lavar suavemente con agua corriente 20 minutos.
5. Sumergir en Reactivo de Schiff 20 minutos..

6. Lavar con agua corriente 10 - 15 minutos.

7. Efectuar coloracin de fondo con Hematoxilina
Activada durante 15 segundos a 2 minutos.
8. Lavar rpidamente con agua corriente 15 - 30
segundos. (Usar agua de la canilla).
9. Deshidratar y aclarar con Deshidratante
10. Montaje.

ROJO CONGO
Destinado a la determinacin de
amiloide.
Observacin esperada:
Amiloide Rojo
Ncleos Azul
Fibras elsticas Ligeramente Rojo

SECUENCIA DE TINCION
1. Deparafinar e hidratar
2. Teir con Hematoxilina (2-3
minutos).
3. Enjuagar en agua corriente 5
minutos (No usar agua destilada)
4. Sumergir en Solucin Alcalina
Alcohlica Clorurada, 20 minutos.
5 Teir con Solucin Alcalina de
Rojo Congo, 20 minutos.
6 Lavar rpidamente con agua 5 a
10 segundos.
7 Deshidratar, clarificar y montar, a
travs de DeshidratanteClarificante (Alcohol y Xileno).

TINCION DE SHORR
Solucin que permite lograr diferenciacin
neta de las clulas del epitelio vaginal.
Tincin nuclear intensa y homognea
coloracin citoplasmtica.
Observacin esperada:
Citoplasma de clulas eosinoflicas rojo
brillante
Citoplasma de clulas cianoflicas azulverdoso (clulas viejas ms plidas)
Ncleo celular marrn rojizo

SECUENCIA DE TINCION
1. Solucin de Shorr (1-3 minutos)
2. Alcohol 70% 10 inmersiones
3. Alcohol 95% 10 inmersiones
4. Deshidratante. (Reemplazo del
etanol absoluto)X3 10 inmersiones
c/u
5. Deshidratante-Clarificante
(Reemplazo Xileno) 10 inmersiones
c/u
6- Montaje.

TRICRMICA DE GOMORI
Solucin actica tie citoplasma y las
fibras musculares se tien de rojo,
mientras que el colgeno toma un color
azulado.
SECUENCIA DE TINCION

Figuras 2. Vacuolas lineadas.Tricromico de Gomori

400X.

1. Desparafinar e hidratar
2. Colocar en Solucin Fijadora de Bouin
15 minutos.
3. Llevar los portaobjetos a temperatura
20-28C, sumergindolos en agua
corriente, de la canilla, mantenida a esa
temperatura.
4. Lavar con agua corriente, de la canilla,
hasta eliminar el color amarillo de los
cortes.

5. Teir con Hematoxilina Frrica de Weigert (de reciente preparacin) durante

5 minutos.
6. Lavar con agua corriente, durante 5 minutos.
7. Teir con Colorante Tricrmico de Gomori durante 5-10 minutos.
8. Sumergir en solucin de Acido Actico al 0,5%, durante 1 minuto.
9. Lavar con agua destilada.
10. Deshidratar y aclarar con deshidratante
11. Montaje.
Observacin esperada:
Ncleos Azul a Negro
Colgeno Azul
Citoplasma, Fibras musculares Rojo

Tejido sub- cutneo en el que se

observan vasos sanguneos de
pequeo calibre con proliferacin
glomeruloide de la ntima y
obliteracin de la luz. Tricrmico de
gomori, (100X)