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PERFIL

HEPATICO
Q.F. Orlando A. Rivera
Benavente
CQFP - 01157

PERFIL HEPATICO

El perfil heptico o pruebas clnicas para determinar el


funcionamiento del hgado. Son aquellos exmenes
que nos permiten detectar la presencia de
anormalidades de la funcin heptica, pero que no son
especificas para determinar alguna enfermedad, pero
en conjunto nos sirven para determinar alguna
patologa a nivel heptico
Las pruebas funcionales hepticas que evalan las
patologas diversas que se desarrollan en el hgado o
alteran sus propiedades son:
1.- Dosaje de Bilirrubinas.
3.- Dosaje de Transaminasas: TGO y TGP.
4.- Dosaje de Fosfatasa Alcalina.
5.- Dosaje de Protenas Totales y Fraccionadas.

DOSAJE DE BILIRRUBINAS
METODO COLORIMETRICO PARA DETERMINACION DE
BILIRUBINA DIRECTA Y TOTAL EN SUERO Y OTROS
LIQUIDOS BIOLOGICOS.

I.- SIGNIFICACION CLINICA:


La Bilirrubina, compuesto de degradacin de la hemoglobina, es
captada por el hgado para su conjugacin y excrecin de la bilis. Las
alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar
hiperbilirrubinemias.
La eritroblastocis fetal o anemia hemoltica del recin nacido es una
patologa provocada por la incompatibilidad materno-fetal en la que se
produce una destruccin excesiva de glbulos rojos. Esto resulta en un
severo aumento de la bilirrubina serica con el consecuente riesgo de
difusin del pigmento al sistema nervioso central, por lo que la
determinacin de la bilirrubina en estos nios recin nacidos resulta
sumamente importante.

II.- FUNDAMENTOS DEL METODO:

La bilirrubina reacciona especficamente con el cido


sulfanilico diazotado produciendo un pigmento color rojo
violceo
(azobilirrubina)
que
se
mide
fotocolorimatricamente a 530 nm.
Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona
directamente con el diazorreactivo, la bilirrubina no
conjugada (indirecta) requiere la presencia de un
desarrollador acuoso que posibilite la reaccin. De forma
tal que, para que reaccione la bilirrubina total (conjugada
y no conjugada) presente en la muestra debe agregarse
benzoato de cafena al medio de reaccin.
*MUESTRA:
Suero, plasma o liquido amnitico.

III.- REACTIVOS:

Desarrollador: solucion acuosa de benzoato de


cafena 0.13 may, tamponada y estabilizada.
Nitrito de sodio: solucion de nitrito de sodio 0.07
mol/l
Reacctivo sulfanilico: solucin de cido sulfanilico 29
mmol/l y acido clorhdrico 0.17 mol/l.

REACTIVOS NO PROVISTOS :
AGUA DESTILADA
BILIRRUBINA ESTNDAR provisto separadamente por
Wiener lab. Para efectuar la calibracin peridica del
equipo.
* Las muestras de suero obtenidas se pueden conservar y utilizar hasta
despus de las 24 horas si se conservan en refrigerador (2-10C), Las
muestras de orina se pueden mantener hasta por
4 das en
refrigerador (2-10C) sin el agregado de preservantes.

IV.- PROCEDIMIENTO:

TECNICA PARA SUERO

Muestra (suero)

200 ul

200 ul

200 ul

Agua Destilada

2.5 ml

2.5 ml

--

Desarrollador

--

--

2.5 ml

200 ul

--

--

--

200 ul

200 ul

Reactivo Sulfanilico
Diazorreactivo

Mezclar de inmediato cada tubo por inversion. Luego de 5 min. Leer en


espectrofotometro a 530 nm o en fotocolorimetrico con filtro verde (520
550 nm), llevando el aparato a cero con agua destilada. Las lecturas pueden
efectuarse entre 4 y 15 minutos , excepto para la bilirrubina directa que debe
leerse a los 5 minutos exactos. Si se lee antes habra sub valoracion de los
resultados por reaccin incompleta. Si se lee despues, habra
sobrevaloracion porque comienza a reaccionar la bilirrubina libre.
Sueros ictericos : debe emplearse la tecnica descripta pero con menores
cantidades de muestra, de acuerdo a la severidad de la ictericia. De tal
forma en caso de la ictericia moderada se usaran 50 ul de suero mientras
que frente a una ictericia intensa se requiere solo 20 ul. multiplicar los
resultados obtenidos por 3.79 y 9.38 respectivamente.

V.- CALCULO DE LOS RESULTADOS:

Bilirrubina total (mg/dl)= A m-B x f, donde: f =2 (mg/dl)


Ab st
Bilirrubina Directa= Abs m - Abs B x f

Bilirrubina Indirecta: Bilirrubina Total-Bilirrubina Directa

VI.- VALORES DE REFERENCIA:

Bilirrubina Total : 0.2 a 1.0 mg/dl.


Bilirrubina Directa: 0.1 a 0.3 mg/dl.
Bilirrubina Indirecta: 0.2 a 0.7 mg/dl.
En recien nacidos: de 60 a 120 mg/dl (RN a 5 dia)
Prematuros: 80 a 240 mg/dl.

DOSAJE DE TRANSAMINASAS
MTODO COLORIMETRO PARA LA DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD
DE
TRANSAMINASAS
GLUTAMICO
OXALACETICA
(GOT)
Y
TRANSAMINASA GLUTAMICO PIRUVICA(GPT) EN SUERO.

I.- SIGNIFICACION CLINICA:


Las transaminasas GOT y GTP son enzimas ampliamente difundidas en
el organismo con elevada concentracin en corazn, hgado, msculo
esqueltico, rin y eritrocitos . La actividad serica en
concentraciones normales es baja o nula .
Un dao o enfermedad en cualquiera de estos tejidos conduce a un
aumento en los niveles sricos. As, luego de un infarto del miocardio
se produce en suero un marcado aumento de la actividad de GOT
(abundante en msculo cardiaco). En hepatitis virales y otras formas
de enfermedad heptica que involucren necrosis tisular, predominara
la actividad serica de GPT(abundante en tejido heptico).
Una elevada actividad de transaminasas puede detectarse tambin en
traumas accidentales o quirrgicos y en distrofias musculares o
miositis.

II.- FUNDAMENTO DEL MTODO:


La GOT cataliza la siguiente reaccin :

l-aspartato + ---cetoglutarato GOT

glutamato + oxalacetato

La GPT cataliza la siguiente reaccin :


l-alanina + ---cetoglutarato

GPT

glutamato + piruvato

El piruvato formado (el oxalacetato es inestable y se transorma en


piruvato ), reacciona con la 2,4-dinitrofenil hidracina produciendose,
en medio alcalino, un compuesto coloreado que se mide a 505nm.

III.- REACCTIVOS :
Transaminasas GOT :
Sustrato GOT

Transaminasas GPT:
Sustrato GPT
Ademas ambos equipos proveen :
Reactivo 2,4-DNFH
Diluyente para enzimas concentrado
Estndar
Los reactivos provistos son estables a temperatura ambiente (25C)
hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
Los diluyentes
para enzimas son estables a temperatura ambiente.

ESTABILIDAD DE INSTRUCCIONES DE
ALMACENAMIENTO
Reactivos provistos : Son estables a temperatura ambiente
(25C)hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja .
Diluyente para enzimas : Estables a temperatura ambiente

INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS


REACTIOVOS:
Cuando el espectrofotometro a sido llevado a cero con agua destilada,
lectura del blanco inferiores a 0.270 D.O. a 505 nm son indicios de
deeterioro del mismo. Tambien indica deterioro la aparicion de
turbidez .

IV.-MUESTRA:
Suero
1. Recoleccion : Se debe obtener suero de la manera usual.
No es necesario que el paciente este en ayunas para la
extraccion de sangre.
2. Aditivos: No se requieren.
3. Sustancias interferentes conocidas : Los sueros
hemolisados producen resultados falsamente elevados ya
que los globulos rojos contienen 3 a 5 veces mas enzimas
que el suero.
4. Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: En caso
de no efectuarse la determinacion en el dia, puede
conservarse el suero refrigerado a 4C durante no mas de 5
das.

V.-PROCEDIMIENTO :En dos tubos de fotocolorinetro


marcados B (Blanco) y D(Desconocido);colocar:
SUSTRATO (GOT o GPT)

0,5ml

0,5 ml

Colocar en bao de agua a 37C +0,5C unos minutos


SUERO
AGUA DESTILADA

100ul

100 ul

Mezclar por agitacion suave e incubar exactamente 30 minutos y agregar:


REACTIVO 2,4-DNFH

0,5 ml

0,5 ml

5 ml

5 ml

Mezclar, Dejar 10 minutos a 37C . Luego agregar:


DILUYENTE PARA ENZIMAS

Mezclar por inversion y retirar del bao. Despues de 2 minutos leer


la absorvancia en fotocolorimetro con filtro verde (500-550nm);en
espectofotometro a 505nm o Hg 548, llevando el aparato a cero D.O.
con agua destilada

VALORES DE REFERENCIA:
Se consideran como valores normales de TGO hasta 12
U/l.
Para la TGP se consideran como normales hasta 18 U/l.
Pero cada laboratorio debe de stablecer sus propios valores
normales de acuerdo a su poblacion.
Valores superiores deben de considerarse sospechosos.

Se encuentra bastante elevados en las hepatitis, en la


pancreatitis