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Metabolismo enzimtico

Metabolismo son las transformaciones que sufren

com0puestos orgnicos o inorgnicos en los seres


vivos.
Los procesos pueden ser Anabolismo o Degradaciones
y Catabolismo o Asimilacin.
Para que se lleven a cabo estas transformaciones se
necesitan enzimas, consideradas como catalizadores
orgnicos de naturaleza proteica encargada de
acelerar las reacciones sin intervenir en ellas.
Las enzimas generalmente toma el nombre de la
reaccin que comandan o del sustrato en que
participan agregndoles el prefijo asa.

Produccin de ureasa
Los

microorganismos que poseen la enzima


Ureasa tiene la capacidad de hidrolizar Urea con
liberacin de Amoniaco; la urea es una Di-amida
de Acido Carbnico. Todas las amidas son
fcilmente hidrolizadas con liberacin de Amonio
y Dixido de Carbono.
El Amoniaco reacciona en solucin para formar
Carbonato de Amonio, producindose una
alcalinizacin y un aumento de pH del medio (pH
final 6.8 del medio), el indicador es el rojo de
fenol.

La hidrlisis
de la urea
origina un
pH alcalino y
el indicador
vira a fucsia
por lo tanto
esta prueba
es
considerada
positiva

Si la bacteria no
hidroliza la urea
, no se originara
un incremento
del pH y el
medio
permanecer
marrillo.

Catalasa
La Catalasa es una enzima que descompone el

perxido de hidrogeno (H2O2) en oxigeno y agua.


Qumicamente la catalasa es una hemoproteina, de
estructura similar a la hemoglobina excepto que los
cuatro tomos de hierro Fe de la molcula estn en
estado oxidado (Fe+++) en lugar de reducido (Fe++).
Excepto los Estreptococo, la mayora de las
bacterias aerobias y anaerobias facultativas poseen
actividad de catalasa. La mayora de las bacterias
anaerobias descomponen el perxido de hidrogeno
(H2O2) con peroxidasa semejante a la catalasa,
salvo que cada molcula contiene un solo ion de Fe.

Principio
El perxido de hidrogeno se forma como uno de los

productos finales del metabolismo oxidativo o aerobio


de los carbohidratos. Si se deja acumular, el (H 2O2) es
letal para la clula bacteriana. La catalasa transforma
el
(H2O2)
H2O+O2 (burbujas de gas)
Esta prueba se realiza en placa o en tubo y sirve para

diferenciar especies bacterianas (Streptococo catalasa


de Staphylococo catalasa+) o de especies de bacilos
Gram positivos y Micobacterias, micrococo catalasa +.

La formacin de burbujas indica la


presencia de la enzima por tanto la
prueba es positiva, donde no se
observa la produccin de burbujas la
prueba es negativa.

Prueba de Citocromo
Oxidasa

Los Citocromos son hemoproteinas que contienen


hierro y actan como el ultimo eslabn en la cadena
respiratoria
aerobia,
transfiriendo
electrones
(Hidrogeno) al Oxigeno, con formacin de agua. El
sistema citocromo se encuentra en los organismos
aerobios o anaerobios facultativos, de modo que la
prueba de oxidasa es importante para identificar a
aquellos organismos que carecen de la enzima o son
anaerobios obligados. La prueba es muy til para el
screening de colonia sospechosas de Enterobacterias
(todas negativas) y para colonia que se presume sean
especies de Pseudomona o Neisseria (positiva)

Esta prueba utiliza ciertos reactivos, colorantes

como el Diclorhidrato de p-fenilendiamina que acta


como aceptor artificial de electrones, sustituyendo
al Oxigeno.
La p-fenilendiamina es incolora en estado reducido
pero en presencia de citocromo oxidasa y oxigeno
atmosfricos se oxida y formando Azul de Indofenol.
Pueden ser los siguientes reactivos:
Diclorhidratos de tetrametil p-fenilendiamina
Diclorhidrato de dimetilo p-fenilendiamina
Disco o tiras comerciales.

Si las clulas contienen


citocromo oxidasa el reactivo
se vuelve de color violeta o
purpura.

Prueba de amilasa
Hidrlisis del almidn. Se realiza en un medio que

contiene almidn que es el sustrato (se siembra la


bacteria) que posee la enzima amilasa la cual
acta sobre el sustrato que contiene el medio
(almidn) lo hidroliza rompiendo los enlaces. Si la
bacteria posee la enzima hidroliza el almidn que
esta alrededor de la bacteria sembrada y se pone
de manifiesto por un halo transparente que
veremos al agregarle solucin de yodo.
El producto final es glucosa y maltosa.

Prueba de la Coagulasa
La Coagula se halla presente en dos formas libre y

fija cada una con propiedades diferentes que


requieren el uso de tcnicas separadas.
Coagulasa fija: (prueba de portaobjeto) esta
Coagulasa conocida como factor de aglutinacin,
esta unida a la pared celular de algunas bacterias.
Esta une una bacteria con otra atreves de las
redes de fibrina (no todos los Staphylococcus la
poseen)

Coagulasa libre: (prueba en tubo) esta transforma el

fibringeno es una sustancia semejante (enzima


proteica) a la trombina que se halla presente en los
filtrados de cultivo. Cuando la bacteria posee o es
portadora de Coagulasa al ponerla en un tubo de
ensayo a partes iguales con plasma de conejo el
fibringeno que posee el plasma lo utilizan las
bacterias transformndolo en fibrina.
La Coagulasa es una enzima proteica semejante a la
protrombina capaz de transformar el fibringeno en
fibrina provocando la formacin de un coagulo visible.
No usar plasma con citrato como anticoagulante
puede dar falsos positivos.

La formacin del coagulo indica


que la prueba es posita, es decir
el microorganismo tiene la
enzima Coagulasa.

Prueba de hemolisis
Hemo significa sangre, acta degradando los

glbulos rojos.
Los Streptococcus producen dos hemolisinas
estreptolisina O que es antignica pero oxilabil
(inestable por oxigeno), y la estreptolisina S que
es no antignica pero es estable al oxigeno. Cada
una de estas hemolisinas producen aclaramiento
completo del agar sangre que rodea la colonia.
Estas hemolisinas actan sobre los glbulos rojos
destruyndolos
totalmente
ponindose
de
manifiesto la hemolisis por un aclaramiento del
medio alrededor de las colonias. (hemolisis )

La hemolisis es un tipo de hemolisis incompleta

producida por algunas cepas, en la cual los


glbulos rojos que rodean las colonias son
parcialmente daados pero no lisada como en la
reaccin hemoltico. Hay un caracterstico
enverdecimiento del medio debido a la salida de
la clula de un derivado del tipo de la
metahemoglobina, que es oxidada a compuesto
del tipo de biliverdina.

Enzima

Sustrato

Indicador (es)

Lectura

Producto final

Ureasa

Urea

Rojo de fenol

Ureasa positiva

Amoniaco+CO2
pH alcalino

No hay ureasa

Urea

Rojo de fenol

Ureasa negativa

Urea

Oxidasa

Diclorodrato Pfenilendiamina

Diclorodrato Pfenilendiamina

Oxidasa positiva

Azul de Indofenol

No hay oxidasa

Dicloro Pfenilendiamina

Diclorodrato Pfenilendiamina

Oxidasa negativa

No hay producto
final

Catalasa

Perxido de
hidrogeno

Hay efervescencia

Catalasa positivo

H2O+O2

No hay enzima

Perxido de
hidrogeno

No hay
efervescencia

Catalasa negativa

No hay producto
final

Amilasa

Almidn

Lugol

Amilasa positiva

Glucosa +maltosa

No hay enzima

Almidn

Lugol

Amilasa negativa

Almidn (no hay


producto final)

Coagulasa

Fibringeno

Coagulo

Coagulasa
positiva

Fibrina

No hay enzima

Fibringeno

No hay coagulo

Coagulasa
negativa

Fibringeno (no
hay producto
final)

Hemolisina

Hemates

Halo transparente

hemolisina

Degradacin de la
hemoglobina

Hemolisina

Hemates

Degradacin del
halo verde

hemolisina

Biliverdina o
compuestos a
fines

No hay enzima

Hemates

No hay halo, ni

No hay

Glbulos rojos

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