TCNICAS DE TINCIN EN HISTOLOGA

Para poner de manifiesto las diferentes

estructuras que integran una seccin
histolgica, es necesario crear artificialmente
un contraste diferencial entre los diversos
elementos del tejido.

Tincin de Gram; Permite

diferenciar entre dos grupos
de bacterias:
- Bacterias Gram positivas
- Bacterias Gram negativas

Por ello se desarrollaron unas tcnicas

conocidas como tinciones

Que es una tincin?

Una tincin es un procedimiento para visualizar un
tejido que puede implicar el uso de uno o varios
colorantes de modo simultneo o sucesivo.

COLORANTES
Naturaleza qumica de los colorantes
Un compuesto qumico es coloreado porque sus molculas absorben cuantos de
radiacin electromagntica en la parte visible del espectro.

En las molculas orgnicas

Los dobles enlaces se alternan con sencillos provocando que los electrones del
enlace se muevan de un tomo al otro cambiando las posiciones de los enlaces.
Generalmente, los colorantes presentan anillos aromticos en su estructura.

Caractersticas de los colorantes

Un colorante debe ser capaz de realizar dos cosas:
1.- Teir o colorear
2.- Unirse a las estructuras celulares

Capacidad de teir
Los colorantes suelen ser molculas orgnicas que presentan anillos
aromticos y que absorben la luz visible por efecto de los electrones asociados
a combinaciones de tomos llamados Cromforos.

Capacidad de unirse
Para que el colorante pueda teir un tejido ha de ser capaz de
unirse a las estructuras celulares. El elemento qumico que le
confiere esta capacidad se denomina grupo Auxocromo

Principales grupos

Clasificacin
De los colorantes por grupo

SEGN EL GRUPO
CROMOFORO

SEGN EL GRUPO AUXOCROMO

Bsicos o
catinicos

Azul de
metileno

Nitrados

Acido pcrico

cidos o
aninicos

Eosina

Colorantes azoicos

Orange G, Sudan negro, etc

Sin carga
(neutros)

Isiotiocianat
os
cido +
Bsico

Derivados del xanteno

Eosina Y, Fluorescena
sdica

Derivados de la acridina

Acriflavina

Derivados de las iminas

quinnicas

Orcena

Derivados de diarilmetanos
y triarilmetanos

Amino-triarilmetanos

Derivados de la
antraquinona

Rojo nuclear rpido

Derivados de las

Azul alcin

Clasificacin
De los colorantes por incorporacin
COLORANTES VITALES

COLORANTES DE EXCLUSIN

Aquellos que son captados

nicamente por clulas vivas

Solo son incorporados por clulas muertas

presentes en cultivo

Son a los que se les permite la

entrada a travs de la membrana.

Se basa en que la membrana de las

clulas muertas no es capaz de funcionar
como barrera de entrada para ese
colorante.

Ej. Rojo neutro y verde Janus

Ej. Azul tripn

La tinciones mas habituales son:

Tetraciclinas, Alizarina, Colorantes de
tipo Procion.

Permiten estudiar el crecimiento del

tejido seo

Cuantificar la proporcin de clulas vivas

(no teidas) o detectar mortalidad en
cultivos celulares.

Clasificacin
Se pueden clasificar, en funcin de su origen, en naturales y artificiales. Por ejemplo:

Naturales

Artificiales

Hematoxilina

Azul de metileno

Carmn

Safranina

Azafrn

Azul de anilina

Orcena

Naranja G

Como se unen los colorantes al tejido?

Cules son los fenmenos fisicoqumicos implicados?

MECANISMOS DE UNIN TincinSustrato

Relaciones electrostticas

Acido-Base

Enlaces coordinados,
mordientes y quelantes

Aumentan la reactividad del

tejido estableciendo una
interaccin tejido colorante.

Enlaces covalentes

Isiotiocianatos - Sustrato

Puentes de hidrgeno

Colorante-sustrato en
soluciones no acuosas

Interacciones hidrfobas en
la disolucin diferencial:
coloraciones de lpidos

Fuerzas de Van der Waals

Impregnaciones

El colorante forma
agregados metlicos
insolubles que quedan
retenidos en el tejido
gracias a la malla molecular
creada en el proceso de

Metacromasia

Si es azul Por qu tie de rojo?

Esto ocurre porque los iones del colorante unidos al sustrato cambian la
longitud de onda de absorcin de luz y, por lo tanto, el color observado del
objeto teido es distinto al del colorante libre.

Glosario de trminos relacionados con las tinciones

Trmino

Definicin

Mordiente

Reactivo que aumenta la

reactividad del tejido
estableciendo una interaccin
tejido colorante

Alumbre

Modifica el colorante aadindole

grupos auxocromos y
confirindole un carcter muy
bsico

Coloracin indirecta en un tiempo

Aquella en la que el tratamiento

del tejido con el colorante y el
mordiente se realiza
simultneamente en una misma
solucin

Glosario de trminos relacionados con

las tinciones
Trmino

Definicin

Tincin progresiva

Tinciones en las que los

colorantes y mordientes se
aplican siguiendo una secuencia
definida y bajo estricto control de
los tiempos para lograr una
intensidad determinada.

Tincin regresiva

Primero se sobre colorea y

posteriormente se elimina el
exceso de colorante por
diferenciacin

Diferenciacion

Consiste en eliminar el exceso de

colorante mediante agentes
diferenciadores (disoluciones
alcoholicas de acidos o alcalis,
etanol, acetona, etc.)

TINCIONES MS UTILIZADAS
Hematoxilina-eosina

Tincin general, contiene un colorante bsico para las estructuras acidas

como (ADN Y ARN) y otro acido para el citoplasma y estructuras
extracelulares.
Hematoxilina: es un compuesto que se obtiene de la planta leguminosa
Haematoxylum campechianum , conocida tambin con el nombre de palo de
Campeche. Requiere ser oxidada para convertirse en una molcula coloreada.
AZUL Eosina: Derivado halogenado del xanteno. Molcula autofluorescente
por sus tomos halgenos y es soluble en agua y en alcoholes lo que le
confiere mucha versatilidad para la tincin histolgica. Presenta un cierto
carcter cido. ROSA

Tricrmicos

Es una tcnica para la coloracin de fibras colgenas y elsticas. Se

observan colores distintos; tejido conjuntivo de verde, tejido muscular de
verde pardo, eritrocitos de rojizo, ncleos azul negro y citoplasma y fibras
musculares rosa. Ejemplos de tinciones tricrmicas:
El tricrmico de Masson
El tricrmico de Van Gieson

Giemsa
Es una tincin general que se emplea mucho en hematologa, permite distinguir, por
su coloracin, los grnulos de los diferentes leucocitos polimorfonucleares. Contiene
una mezcla de colorantes catinicos (azul de metileno) y aninicos (eosina).
Extensin de sangre perifrica (Tincin May Grnwald- Giemsa): eritrocitos de
tamao y contenido de hemoglobina inferior al normal caractersticos de la Anemia
de Cooley

Papanicolau
Coloracin histolgica empleada principalmente para extensiones citolgicas, sirve
para la deteccin precoz del carcinoma de crvix. Contiene una mezcla de colorantes
que no produce sobre coloracin. Normalmente tiene 4 colorantes: uno nuclear
(hematoxilina), eosina Y, que tie de rosa el citoplasma, verde brillante que tie el
moco y Orange G que tie la queratina.

TINCIONES APLICABLES A TEJIDOS CONCRETOS

Algunas tinciones nos sirven para teir ciertos tejidos especficos, a continuacin veremos los
ejemplos mas relevantes.

TINCIONES APLICABLES A TEJIDOS

CONCRETOS
Tejido nervioso

Impregnaciones argnticas

Tejido conjuntivo

Tcnica de reticulina, de Wigert

de resorcina-fucsina, etc.

Musculo estriado

Tincin de hematoxilina
fosfotngstica cida PTAH

Hueso

Exigen descalcificacin o
desgaste. Coloracin con tionina
o tincin negativa

Higado

H-E, Tincin tricrmico, reticulina,

PAS y PAS-distasa, azul de Pearls.

TINCIONES APLICABLES A TEJIDOS

CONCRETOS
Rin

H-E, PAS, tricrmico y tcnica de

metenamina de plata.

Piel

PAS, Tcnica de argentafinidad de

Masson Fontana, Tricrmico de
Gallego

Microorganismos en diversos
rganos

Hongos PAS o meteanina de

plata de Grocott
Bacterias: Gram, Ziehl Neelsen,
Giemsa

TINCIONES SUBCELULARES
En microscopia ptica tambin podemos resaltar e identificar determinados orgnulos mediante
tinciones mas o menos especificas y diferenciales. A continuacin se citan ejemplos de mtodos
de tincin mas utilizados:

TINCIONES SUBCELULARES
Hematoxilina frrica,
safranina-light green o verde metilo.
EXTENSIONES CROMOSOMICAS. Carmn actico u
Orcena actica.
EN CORTES.

Ncleo

Nuclolo
Mitocondria
Aparato de Golgi
Grnulos de
secrecin y
cuerpos de
inclusin
Vacuolas de los

Grumos de Nissil: azul toluidina,

violeta de cresilo y verde metilopronina
Verde Janus
EN CORTES. Fucsina de Altmann
EN CELULAS VIVAS.

Impregnaciones argnticas
Mtodo de Mann, con eosina
amarillenta y azul de metileno,
posterior diferenciacin en Orange
G.
Se inyecta al animal una suspensin
de partculas de carbn antes de
obtener el tejido. Las clulas que

IMPREGNACIONES ARGNTICAS
Se le denomina as a toda coloracin histolgica en la que se emplean sales
metlicas para generar precipitados metlicos sobre estructuras que se pretenden
destacar.
Implica 2 pasos

1.

IMPREGANCION PRIMARIA
Los tejidos don expuestos a una solucin ligeramente alcalina en
la que hay una concentracin no muy alta de AgNO3 que proporciona
iones de plata en exceso
2. SEGUNDA FASE
Los cortes son tratados con una solucin (hidroquinona y sulfito)
que captura parte de los iones de plata que se han unido dbilmente al
tejido

TINCIN NEGATIVA
No todos los colorantes se unen a las estructuras tisulares. Algunas
tinciones se basan en la exclusin de la coloracin. El contraste negativo
consiste en teir todo menos la estructura que queremos visualizar.

Preguntas
informacin extra
Que es un cuanto?
Qu es la radiacin electromagntica?
Molcula orgnica
Espectro visible
Enlaces conjugados
Resonancia
Cromforos
Mordiente
Fuerzas de Van der Waals
Metacromasia
Alumbre
Tincin Argntica

Que es un cuanto?
Un quantum o cuanto es la menor cantidad de energa que puede
transmitirse en cualquier longitud de onda. Considerado el creador de la
teora cuntica, el fsico alemn Max Planck enunci que la radiacin
electromagntica se emite en unidades discretas de energa denominadas
quantum o quantos.
Qu es la radiacin electromagntica?
La radiacin electromagntica es un tipo de campo electromagntico
variable, es decir, una combinacin de campos elctricos y magnticos
oscilantes, que se propagan a travs del espacio transportando energa de
un lugar a otro
Molcula orgnica
Compuesto orgnico o molcula orgnica es una sustancia qumica que
contiene carbono, formando enlaces carbono-carbono y carbonohidrgeno

Espectro visible
Se llama espectro visible a la regin del espectro electromagntico que el
ojo humano es capaz de percibir. A la radiacin electromagntica en este
rango de longitudes de onda se le llama luz visible o simplemente luz. No
hay lmites exactos en el espectro visible: un tpico ojo humano responder
a longitudes de onda de 400 a 700 nm, aunque algunas personas pueden
ser capaces de percibir longitudes de onda desde 380 hasta 780 nm.
Enlaces conjugados
Un sistema conjugado se da cuando en un compuesto qumico con
enlaces simples y dobles alternados, los electrones que forman los
enlaces dobles se deslocalizan, es decir, se sitan de manera uniforme
alrededor del compuesto. Estos electrones deslocalizados no forman en
realidad enlaces dobles entre dos tomos en particular, sino que
pertenecen a todo el grupo de tomos, y le dan ms estabilidad y fuerza al
enlace simple, sin llegar a ser un doble enlace.

Resonancia
La Resonancia (denominado tambin Mesomera) en qumica es una
herramienta empleada (predominantemente en qumica orgnica) para
representar ciertos tipos de estructuras moleculares. La resonancia consiste en
la combinacin lineal de estructuras de una molcula (estructuras resonantes)
que no coinciden con la estructura real, pero que mediante su combinacin, nos
acerca ms a su estructura real.
Cromforos
Un cromforo es la parte o conjunto de tomos de una molcula responsable de
su color. Tambin se puede definir como una sustancia que tiene muchos
electrones capaces de absorber energa o luz visible, y excitarse para as emitir
diversos colores, dependiendo de las longitudes de onda de la energa emitida
por el cambio de nivel energtico de los electrones, de estado excitado a estado
fundamental o basal.
Mordiente
Aquella sustancia que sirve para unir un colorante a un sustrato. // Reactivo
que aumenta la reactividad del tejido estableciendo una interaccin tejidocolorante// Reactivos mordientes. Son los reactivos o sustancias que preparan
al tejido para la coloracin

Fuerzas de Van der Waals

En fisicoqumica, las fuerzas de Van der Waals, o interacciones de Van der
Waals, es la fuerza atractiva o repulsiva entre molculas (o entre partes de una
misma molcula) distintas a aquellas debidas al enlace covalente o a la
interaccin electrosttica de iones con otros o con molculas neutras.

Metacromasia
Ocurre porque en la reaccin del colorante con determinadas estructuras las
molculas de colorante se aproximan mucho entre ellas, de modo que se
produce un cambio en su rango de absorcin lumnica lo que hace que eras
estructuras se vean de diferente color.

Alumbre
Se trata de un tipo de reactivo utilizado en los procesos de tincin. Esta constituido
por una sal doble de sulfato de un metal trivalente y otro monovalente.
Generalmente, los metales son aluminio y potasio o amonio (NH4). El alumbre
modifica el colorante aadindole grupos auxocromos y confirindole un carcter
muy bsico.

Tincin Argntica
La tincin argntica es el uso de plata (en latn, Argentum) para
modificar selectivamente el color o la apariencia de un objeto. Es una
tcnica frecuente de tincin en histologa donde se utiliza para revelar
detalles extremadamente finos.

Tincin Negativa
Tincin negativa es una tcnica de microscopa que permite contrastar las
muestras mediante una sustancia opaca a los fotones (microscopa ptica)
o a los electrones (microscopa electrnica). En el primer caso, se emplea
nigrosina o tinta china; para el caso de bacterias que esporulan, esta
tcnica permite visualizar las esporas como entes refringentes sobre un
campo de fondo oscuro.1 En caso de microscopa electrnica de
transmisin, se emplean sustancias de alto nmero atmico que, por tanto,
resultan opacas a los electrones transmitidos. Tpicamente, estas
sustancias son acetato de uranilo, citrato de plomo o molibdato de amonio.
Al electrnico, esta tcnica permite visualizar virus, flagelos, bacterias y
otros entes de escaso tamao.