PRACTICA N I.5.

CINTICA ENZIMTICA
ASIGNATURA: Bioqumica.
CICLO : IV Segundo Ao
SEMESTRE: 2015-II
UNIDAD : I
SEMANA : 06

"ACREDITACIN: COMPROMISO DE TODOS"

Ing Doyle Benel Fernndez

Bilog. Ysabel Murrugarra Bringas
Ing Liliana Quiones Chapon
Ing Javier Velez Verona

10/09/2015

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CONTENIDO
1.
2.
3.
4.
5.

Motivacin
Objetivos
Introduccin
Cintica Enzimtica
Parte experimental

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Objetivos
Observar el efecto de los factores que modifican la velocidad de
una reaccin enzimtica.
Calcular el porcentaje de producto formado en cada experiencia.
Elaborar la grfica: factor que modifica la velocidad de reaccin
vs porcentaje de producto formado.

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INTRODUCCIN
En los diversos compartimientos celulares transcurre un gran nmero de

reacciones qumicas que proporcionan a la clula energa y los componentes

necesarios para su mantenimiento. La vida depende de la existencia de
catalizadores poderosos y especficos.
Las enzimas son protenas que funcionan como catalizadores biolgicos.
Los factores que afectan la cintica de las reacciones qumicas son aplicables a
las reacciones catalizadas por las enzimas, en los seres vivos. No obstante, stas
muestran (adems del fenmeno de la especificidad) un rasgo caracterstico que
no se observa en los catalizadores no enzimticos, se trata de la saturacin por
el sustrato, entendida en trminos de ocupacin de los centros activos de todas
las molculas de enzima.
En nuestra prctica observaremos el efecto de la pepsina sobre la albmina del
huevo. La actividad enzimtica se apreciar por la prdida de la turbidez proteica .

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CINTICA ENZIMTICA
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas. Estos estudios proporcionan informacin directa acerca del
mecanismo de la reaccin cataltica y del comportamiento especfico de la
enzima. La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima puede medirse
con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o
aislar la enzima.
.

Las enzimas son protenas con la capacidad de manipular otras molculas,

denominadas sustratos. Un sustrato es capaz de unirse al centro cataltico de la
enzima que lo reconozca y transformarse en un producto a lo largo de una serie
de pasos denominados mecanismo enzimtico.

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CMO SE MANIFIESTA LA ACTIVIDAD ENZIMTICA?

La actividad enzimtica se manifiesta y se mide por:
Desaparicin del sustrato.
Formacin del producto.
Modificacin del cofactor.
Existen muchos factores que pueden modificar la actividad enzimtica como:
pH, temperatura, concentracin de sustrato, concentracin de enzima, tiempo
de incubacin.
Cuando la actividad enzimtica se reporta en funcin del % de formacin de
producto se hace uso de la siguiente ecuacin:
% Formacin de producto (FP) = 100 (Abs tubos/Abs albmina)*100
Donde:
Abs tubo = Absorbancia de los tubos despus del incubado.
Abs albmina = Absorbancia de la albmina (Abs = 0.995)

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PARTE EXPERIMENTAL

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EXPERIMENTO.- Efecto del pH

Preparar cinco tubos con:
TUBO N

1
2
3
4
5
pH
1,0 1,5
6,0
9,5
11
mL albmina
5,0
5,0
5,0
5,0
5,0
mL HCL 1N
2,0
0,5
0,0
0,0
0,0
mL CO3Na2
0,0
0,0
0,0
0,5
2,0
mL agua destilada 0,0
1,5
2,0
1,5
0,0
Preincubar los cinco tubos ms un tubo conteniendo 20 mL de pepsina al 1%
a 37C por 5 minutos. Luego aadir rpidamente 3 mL de la pepsina
preincubada a cada uno de los tubos 15. Mezclar e incubar a 37C por 10
min. Observar la diferencia o leerla en fotocolormetro con filtro azul (420 nm).

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EXPERIMENTO: Efecto de la temperatura.

Preparar cinco tubos con:
TUBO N

2
3
mL albmina
5,0
5,0
mL HCL 1N
0,5
0,5
mL agua destilada
3,5
3,5
Preparar otros cinco tubos com:
TUBO N
6
7
mL pepsina 1%
1,0
1,0

4
5,0
0,5
3,5

5
5,0
0,5
3,5

5,0
0,5
3,5

8
1,0

9
1,0

10
1,0

Incubar por 5 minutos de acuerdo al siguiente esquema de temperatura:

TUBO N
1y6 2y7 3y8 4y9 5
10
Temperatura
O C Amb. 37 C 70 C 37 C 100 C
Agregar los respectivos tubo N 6 al N 10 a los que hay que incubar a las temperaturas a que se
pre-incuban los tubos 1 5.

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Elaboracin de grficos:
Con los resultados obtenidos confeccionar las siguientes graficas, establecer sus
conclusiones

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EXPERIMENTO. -Efecto de la concentracin de la

Preparar
5 tubos con:
enzima
TUBO N
mL albmina
mL HCL 1N
mL agua destilada
mL pepsina

1
5,0
0,5
1,5
0,0

2
5,0
0,5
2,5
0,0

3
5.0
0.5
3.5
0.0

4
5,0
0,5
4,0
0,0

5
5,0
0,5
4,5
0,0

Incubar los 5 tubos a 37C por 5 minutos y enseguida aadir:

TUBO N
1
2
3
4
5
mL pepsina incubada 3,0
2,0
1,0
0.5
0,1

Incubar por cinco minutos a 37C. Observar al fotocolormetro a 420 nm (filtro

azul), contra una lectura de agua

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EXPERIMENTO.-Efecto de la concentracin del

sustrato
Preparar 6 tubos con:
TUBO N
1
mL albmina
2,0
mL HCL 1N
0,5
mL agua destilada
7,0
mL pepsina 1%
0,0

2
3,0
0,5
6,0
0,0

3
4,0
0,5
5,0
0,0

4
5,0
0,5
4,0
0,0

5
6,0
0,5
3,0
0,0

6
7,0
0,5
2,0
0,0

Leer a 420 nm (filtro azul). Anotar los resultados: incubar a 37C. Colocar 0,5 mL

que pepsina pre-dirigida. Incubar por otros 5 minutos a 37C. Leer al

fotocolormetro a 420 nm (filtro azul). Restar la segunda lectura de la primera.
Graficar y comentar los resultados.

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Elaboracin de grficos:
Con los resultados obtenidos confeccionar las siguientes graficas, establecer sus
conclusiones

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CUESTIONARIO
1.-Solo una pequea fraccin de la enzima se une al sustrato Qu funcin desempea el resto de
la molcula de la enzima?
2.-Enzimas:
a) Si el pH ptimo de una enzima es igual a 7,3,qu ocurrir con la actividad enzimtica a pH
3,0 y a pH 9,5?
b) Si la temperatura ptima de una enzima es de 36C, Qu ocurrir a 80C? . Justifique las
respuestas.
3.-Indicar que enzima se relaciona con cada una de las siguientes enfermedades.
Fenilcetonuria
Hemofilia
Enfermedad de Gaucher
Galactosemia
4.-Explique que es un inhibidor enzimtico. De 02 ejemplos.

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BIBLIOGRAFA
Mathews, C.K. y Van Holde, K.E. (2008). Bioqumica. 5 Edicin. McGraw-Hill.

Interamericana. p 206-209.
Herrera, E.(1999). Biologa Molecular y Bioqumica Fisiolgica. 3 Edicin.

McGraw-Hill. Interamericana, p 86-92.

De Robertis EMF, Hib J, Ponzio R. Biologa Celular y Molecular. 12 ed. Buenos

Aires. El Ateneo; 2009, p 45-50

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GRACIAS!!!