UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO ACADMICO DE QUMICA
BIOLGICA Y FISIOLOGA ANIMAL

BIOQUMICA
T1. La Fosforilacin oxidativa en Eucariotas. La
transferencia de electrones. Constituyentes de la
cadena respiratoria.
T2. La sntesis de ATP y el gradiente de protones.
Regulacin de la fosforilacin oxidativa. Las lanzaderas
en la membrana mitocondrial.

Ms.C. Patricia Elizabeth Torres Plasencia .

Fosforilacin oxidativa y Transporte de electrones

Una persona de 70 Kg requiere

aprox. 2000Kcal para realizar act.
diarias.
Es decir requiere 83 Kg de ATP. Se
cuenta con 250g: Solucin: Reciclaje
de ADP a ATP. El ATP se recicla aprox.
300 veces por da.
Este proceso tiene lugar por medio
de la fosforilacin oxidativa.

La fosforilacin oxidativa es el proceso mediante el cual se forma

ATP por medio de la transferencia de electrones desde el NADH
FADH2 hasta el O2 por medio de una serie de transportadores
elctricos. Tiene lugar en la mitocondria.

En la fosforilacin oxidativa la fuerza electrn-motriz se

convierte en fuerza protn-motriz y posteriormente en
potencial de transferencia de fosforilo.
La conversin de fuerza electrn-motriz en fuerza protn-motriz
se lleva a cabo en la cadena respiratoria.
La cadena respiratoria consiste de 4 complejos multienzimticos:
NADH-Q
Oxidorreductasa, Succinato-Q Reductasa, Q-citocromo c
Oxidorreductasa, Citocromo c Oxidasa.
Estos complejos enzimticos transmembrana contienen
mltiples centros de oxidacin-reduccin: Quinonas, flavinas,
complejos FE-S, hemos y Cu
Cit.
C

La Fosforilacin Oxidativa en eucariotas tiene lugar en las mitoc

Las
mitoc.
contienen
el
ensamblaje
respiratorio,
enzimas del ciclo del c. ctrico
y enzimas de la oxidacin de
los c. grasos.
Delimitada por una doble
membrana: externa e interna
(amplia y plegada: crestas)
Dos compartimientos: matriz y espacio
intermembrana.
Memb. Externa: permeable a iones y molc. pequeas: PO4, Cl-,
aniones orgnicos, nucletidos de Adenina.
Memb. Interna: Impermeable a casi todos los iones y molculas
polares. Se necesita transportadores.

La Fosforilacin Oxidativa depende de la transferencia de elect

En la fosforilacin oxidativa el potencial de transferencia de

electrones del NADH FADH2 se convierte en el potencial de
transf. de grupos fosforilo del ATP.
El potencial de transferencia electrnica de un e- se mide como
potencial redox, potencial de reduccin o potencial de xidoreduccin (Eo).
Si Eo es - : Forma reducida tiene < afinidad por los e- que H2.
Si Eo es + : Forma reducida tiene > afinidad por los e- que H2.

El flujo de electrones a travs de los componentes de la cadena de transporte electrnico

se realiza en orden de potencial de reduccin creciente
(agente reductor fuerte, Eo = -0.32 volts)
(aceptor final de los electrones agente oxidante fuerte, Eo = +0.82 volts)

Una diferencia de potencial de 1.14V entre el NADH y el O2 impulsa el

transporte de e- a travs de la cadena respiratoria y permite la formacin de
un gradiente de protones.


y pueden intervenir en diferentes pasos
en la cadena de transporte de electrones.

La cadena respiratoria est formada por 4 complejos:

3 bombas de protones y una conexin fsica con el
ciclo del cido ctrico

Cit.
C

Cit.
C

Los e- se trasladan de un complejo a otro a travs de transportadores elctricos

especiales: Coenzima Q o Ubiquinona (quinona hidrofbica) y citocromo c
(protena pequea e hidrosoluble).

Ubiquinona (coenzima
Q)
Derivado quinona con larga cadena isoprenoide, el numero de unidades de isopreno
depende de la especie.

Puede presentar tres estados de oxidacin

Sus reacciones de transferencia de electrones
estn acopladas a la unin o liberacin de
protones: propiedad clave a la hora de
transportar protones a travs de la membrana

Complejo I: NADH-Q oxidorreductasa

Los electrones de elevado potencial del NADH entran a la cadena respiratoria a
travs de este complejo.
Estructura en forma de L:
- Brazo anclado en la membrana interna
- Brazo vertical en la matriz mitocondrial

Flavina Mononucletido (FMN)

Presente en las flavoproteinas.

Al igual que la ubiquinona, sus reacciones de transferencia de electrones estn

acopladas a la unin o liberacin de protones. Tambin al poder existir en forma de
semiquinona, puede transportar tanto un electrn como un par.

Centros Fe-S
Fe est presente no en forma de hemo (como

en los citocromos) sino en asociacin con

tomos de azufre inorgnico o con tomos de azufre de residuos de Cys de la protena
transportadora, o con los dos al mismo tiempo.
Se pueden presentar

en tres tipos

El Fe de estos complejos alterna entre

los estados oxidado Fe3+ y reducido Fe2+
Suelen intervenir en reacciones
redox

Complejo II: Succinato-Q reductasa

La Succinato deshidrogenasa, enzima del ciclo del cido ctrico, forma
parte del complejo y genera FADH2 a partir de FAD por la oxidacin
del succinato a fumarato.
No se produce transporte de H+ hacia el citoplasma a diferencia del
complejo I.
Succinato

FADH2

Complejos
FeS

QH2 libre
(difunde)

Complejo III: Q-citocromo c oxidorreductasa

Segunda bomba de H+ de la cadena de transporte.
En su estructura podemos encontrar:
-2 citocromos
-citocromo b: contiene 2 grupos hemo tipo b
bL (baja afinidad)
bH (alta afinidad)
-citocromo c1: 1 grupo hemo
- proteina con centro de Rieske 2Fe-2S
En conjunto el paso de electrones y bombeo de protones por
el complejo III puede resumirse en:

+2H N+

+
Q +2cit(reducido
1
)+4H p

mecanismo: CICLO-Q : Canaliza los e- desde un transportador de 2 e- (QH2)

a uno de un e- (Citocromo c) y bombea H+.

Grupos Hemo
Presentes en los citocromos. Los fuertes colores caractersticos de los citocromos se
deben a la presencia del grupo prosttico hemo.

Su tomo de hierro oscila entre

Fe3+ y Fe2+.

Complejo IV: citocromo c oxidasa

Presenta 2 grupos hemo de tipo A: hemo a y hemo a3 y 3 iones de Cu
distribuidos en dos centros de Cu: A y B . Centro A: 2 iones de Cu y
centro B: uno.
CuA / CuA aceptor de los
electrones del citocromo c
reducido.
hemo a aceptor de los
electrones de CuA / CuA .
Hemo a3/ CuB forman parte
del centro activo donde O2 se
reduce a H2O.

Radicales Libres
O2: excelente aceptor de electrones
Riesgo:
produccin de intermediarios anin superxido (O2-) y anin perxido
(O22-) y radical hidroxilo OH , tambin llamados ROS (Reactive oxygen species)
dainos para una serie de componentes celulares.
Solucin:
- en la cadena de transporte electrnico se opta por unir estos intermediarios
fuertemente hasta su completa conversin en agua (complejo IV) Sin
embargo pueden producirse prdidas, la retencin no es eficiente al 100%:
necesidad de otras estrategias defensivas:
-Superoxido dismutasa (SOD) neutraliza el anin superxido dismutndolo:
2 O2 + 2H+

H2O2 + O2

-Catalasa dismuta el peroxido producido por SOD y otros enzimas

2 H2O2 + 2H+

H2O+ O2

Un gradiente de protones impulsa la sntesis de AT

El enzima encargado de llevar a cabo la sntesis de ATP: ATP

sintasa o complejo V (ubicada en la membrana interna
mitocondrial).
Se crea que para la sntesis de ATP, se formaba un compuesto
intermediario que transfera los fosforilos para la sntesis.

Peter Mitchell en los aos 60 (Premio Nobel 1978): propuso la

teora Quimiosmtica.

Teora Quimiosmtica
El transporte de e- y la sntesis de ATP se acoplan mediante un
gradiente de H+ a travs de la membrana interna mitocondrial.
Un gradiente de concentracin de protones sirve como almacn de energa
que dirige la formacin de ATP: la fuerza protn-motriz
La fuerza protn-motriz (p) es la energa almacenada en el gradiente de concentracin
de protones (distribucin desigual).

Los protones que son translocados al espacio intermembrana por la cadena de

transporte electrnico, regresan al interior de la matriz mitocondrial va ATP sintasa.

 El bombeo de protones a travs de la cadena de transporte electrnico crea

una fuerza protn-motriz suma de las contribuciones de un gradiente qumico
(gradiente de pH) y un gradiente de carga (potencial de membrana).

Teoria quimiosmtica: el gradiente de protones

generado impulsa la sintesis de ATP mediante la
ATP sintasa

ATP sintasa

F0 Unidad transportadora de H+
F1 Unidad cataltica

F1: unidad cataltica

formada por 5 cadenas polipeptidicas:
-3 cadenas
-3 cadenas
-cadenas
y alternadas en anillo hexmerico
-miembros de la familia de NTPasas -ambas
unen nucletidos, solo participa en la
catlisis
y forman el tallo central de la
estructura.
del hexmero 33 : cada
subunidad adopta diferente conformacin
debido a su interaccion con

F0
Segmento hidrofbico que atraviesa la membrana interna
mitocondrial Contiene conducto de H+ del complejo
Formado por
-10-14 subunidades c
-1 subunidad a en la periferia del anillo

F1 y F0 estan conectadas por el tallo y por una columna

externa formada por b2 y

Podemos considerar que el enzima

esta formado por dos componentes
funcionales:
-UNIDAD MOVIL: anillo c y tallo
-UNIDAD ESTATICA: resto de la
molcula

Mecanismo de la ATP sintasa

Tenemos que tener en cuenta que:
-La ATP sintasa en si no necesita del gradiente de protones para
generar el ATP - PERO por si sola la ATP sintasa no es capaz de
liberar este ATP del centro cataltico una vez formado.
Es decir el flujo de protones favorece la liberacin del ATP de la
sintasa, ms NO su formacin (mecanismo de cambio de unin).
El mecanismo que se propone tiene en cuenta la diferente
interaccin de la subunidad con las diferentes subunidades , de tal
manera que dichas subunidades pueden estar en tres
conformaciones:
-TENSA (T)
-RELAJADA (L)
-ABIERTA (O)

Conformaciones de la Subunidad
TENSA (T):
cataliza la transformacin de ADP+Pi en ATP, une fuertemente el ATP
generado sin permitir su liberacin: demasiado apretado, encajado en el
centro activo.
RELAJADA (L):
une ADP y Pi en conformacin lo suficientemente apretada para que no se
desprenda.
ABIERTA (O):
puede tanto unir como desprender nucletidos al ser la conformacin ms
abierta.

 La interconversin entre las tres formas puede ser dirigida

mediante la rotacin de

Por cada rotacin de 120 de : liberacin de ATP y unin de un

nuevo ADP+Pi

 La rotacin de es
producida por el paso de
protones a travs de la
subunidad a, que produce
una rotacin del anillo de
subunidades c.

 La subunidad a parece
contener dos semiconductos
que permiten la entrada de
protones pero no pueden
atravesar completamente la
membrana.

Cada subunidad c esta

formada por dos hlices
transmembrana con un
residuo de c. asprtico en la
segunda hlice situado en el
centro de la membrana.

Mecanismo de rotacin del anillo c

Se supone que los dos residuos Asp en contacto con cada semiconducto han cedido
sus protones pasando a ser aspartato cargado negativamente.

Mecanismo de rotacin del anillo c

Cada protn entra por el
semiconducto citoslico,
sigue una vuelta completa
por el anillo c y sale por el
otro semiconducto hacia la
matriz
Segn este modelo: el
numero de protones que se
han de transportar para
generar una molcula de ATP
depender del nmero de
subunidades del anillo c.
Si el anillo tiene 10 subunidades (ATP sintasa de levadura):
vuelta del anillo generar 3 ATP y fluirn 10 protones:
10/3 ~ 3 H+ por ATP

cada

Rendimiento neto de la fosforilacin oxidativa

ATP sintasa requiere la translocacin de 3H+ por cada ATP que produce
El transporte al citoplasma de Pi, ADP and ATP requiere 1 H+
Rendimiento neto:para: 10
H+ bombeados.
(10 H+/ 4 H+) =
para: 6 H+ bombeados
(6 H+/ 4 H+) =

Lanzaderas de electrones del NADH

La membrana interna mitocondrial es impermeable a NADH y NAD+ citoplasmtico, pero
sus electrones deben entrar a la matriz mitocondrial para ser transferidos a la cadena de
transporte electrnico. La clula ha diseado sistemas lanzadera donde se realiza la
transferencia de los electrones del NADH y no de la propia molcula.

En la los
electrones son transferidos a glicerol-3-P,
que los transfiere posteriormente al FAD

En la se usa
el malato como transportador de los
electrones a travs de la membrana.

Lanzadera glicerol-3-fosfato

Con esta lanzadera el rendimiento

energtico del NADH citoplasmtico es
menor ya que el aceptor final de los
electrones es FAD: el resultado es un
menor bombeo de protones.

La lanzadera glicerol-3-P es muy

abundante en msculo, lo que permite
realizar la fosforilacin oxidativa a
velocidad muy alta.

Lanzadera malato-aspartato

Lanzadera ms compleja,
pero ms eficiente
energticamente, el
resultado final es NADH en la
matriz mitocondrial

Sistema especialmente activo en

hgado y corazn.

Transporte ATP/ADP
El que se genera en el proceso de la fosforilacin oxidativa esta No puede atravesar
la membrana interna mitocondrial, al igual que ADP y la molcula de fosfato inorganico (Pi). Es necesario un sistema de
transporte de membrana:

realiza el
intercambio antiporte entre ADP
citoslico y ATP de la matriz
mitocondrial.

ATP/ADP translocasa: Mecanismo de accin

La velocidad de la fosforilacin oxidativa est determinada

por las necesidades de ATP
Transporte electrnico y sntesis de ATP se encuentran ntimamente ligados: los
electrones no suelen desplazarse a lo largo de la cadena hasta el O2 a menos que al
mismo tiempo ADP se fosforile para formar ATP.
El factor ms importante a la hora de determinar la velocidad de la fosforilacin
oxidativa es el nivel de ADP.

La velocidad de consumo de oxgeno por las

mitocondrias AUMENTA cuando se aade ADP y
recupera su valor inicial cuando este ADP
aadido
se
convierte
en
ATP:

Significado fisiolgico sencillo: el nivel de ADP aumenta cuando se consume ATP.

Solo se realizar transporte electrnico hacia el O2 cuando se necesite sintetizar ATP .
En definitiva, la carga energtica, la relacin ATP/ADP es la que controla la produccin
de energa por parte de la clula.

Inhibidores de la fosforilacin oxidativa

Inhibidores de la fosforilacin oxidativa