Catlisis Enzimtica

Enzimas
generalidades

Catalizadores biolgicos que controlan reacciones bioqumicas

Las enzimas son protenas, con pocas excepciones
Se clasifican segn la reaccin que catalizan
Su actividad cataltica depende de la integridad de su conformacin
nativa
Sus MW tienen valores de 12 x 103 hasta 106
Se encuentran en concentraciones 10-10 a 10-8 M
Para su actividad pueden requerir:
cofactores (como iones inorgnicos: Cu2+, Fe2+ o Fe3+)
coenzimas (complejo orgnico u organometlico : coenzima A)

ALTA
ESPECIFICIDAD
DE REACCIN
INTERACCIN
ESTEREO
ESPECFICA
CON SU
SUSTRATO

Los reactivos
interaccionan
con la enzima
(sitio activo)

Cambia la
configuracin de la
enzima

LA UNIN DEL SUSTRATO PRODUCE UN CAMBIO

CONFORMACIONAL DE LA ENZIMA HEXOQUINASA (CINASA),
LA CUAL ES MONOMRICA.

Se realiza la
reaccin
cataltica

Protenas con actividad cataltica de los seres vivos.

Unidades del Metabolismo

Regulan la vel. de las reac. qum. espontneas (G-).

No promueven reacciones no-espontneas (G +).

Incrementan la Vel. De reaccin 103 a 1012 veces sin afectar el sentido de

la reaccin.

No forman parte del producto de la reaccin.

AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIN

De 106 to 1012 veces vs sin enzima.

An ms rpido que los catalizadores qumicos.

CONDICIONES DE REACCIN

Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)

pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5

Presin atmosfrica normal

CAPACIDAD DE REGULACIN

Por concentracin de sustrato

Por concentracin de enzima

Por inhibidores competitivos (semejantes al

sustrato)

Por inhibidores no competitivos (modificacin

covalente de la enzima)

Por regulacin alostrica

ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIN

Interaccin estereoespecfica con el sustrato

No hay productos colaterales

Enzimas
generalidades

Anlisis cintico
generalidades
H2O2(aq)

2 H2O(l) + O2(g)

Anlisis cintico
generalidades
G 298K=-103 kJ/mol

H 298K=-94.6 kJ/mol

Anlisis cintico
generalidades

La reaccin catalizada tiene una constante de velocidad de

2.50 x 103 s-1 a 25C
La catlisis cida o bsica de la hidrlisis del fumarato es
10-8 s-1 a 25C

Anlisis cintico
Mecanismo de Michaelis-Menten

Mecanismo de Michaelis-Menten

El mecanismo de la catlisis enzimtica propuesto por

Michaelis y Menten se basa en considerar la formacin del
complejo enzima-sustrato (ES)

E + S

k1
k-1

ES

k2

P+ E

La velocidad de una reaccin catalizada por enzimas en la

que el sustrato S se convierte en producto P, depende de la
concentracin de enzima E (aunque esta no sufra ningn
cambio neto)

Mecanismo de Michaelis-Menten

La E cataliza selectivamente
ciertos S

Teora cerradura (sitio activo

de la E) llave (S): alta
especificidad

Mecanismo de Michaelis-Menten

A+ B
E +S

Mecanismo de
Michaelis-Menten

AB
K

=/

ES

k
k

Productos
E +P

Mecanismo de Michaelis-Menten

k1

E+S

ES

k-1

ES

k2

E+P

V0 k 2 ES

Aplicando el enfoque del estado estacionario al intermediario ES

d ES
k1 E S k 1 ES k 2 ES 0
dt

Mecanismo de Michaelis-Menten

k1 E S
ES
k 1 k 2
Si [E0] es la concentracin total de enzima

E0 E ES

k1 E0 ES S
ES
k 1 k 2
Reordenando

k1 E0 S
ES
k 1 k 2 k1 S

Mecanismo de Michaelis-Menten

ES

E0 S

k 2 / k1 S

Constante de Michaelis-Menten (KM)

E0 S
ES
KM S

Recordando que

Parmetro de
actividad
enzimtica: valor
grande de KM
indica baja
actividad

V0 k 2 ES

k 2 E0 S
V0
KM S

Mecanismo de Michaelis-Menten

k 2 E0 S
V0
KM S

V0=Vmax
V0

Vo= Vmax todos los sitios activos

estn ocupados y no hay molculas de
E libre.
KM= [S] cuando V = Vmax
KM representa la cantidad de sustrato
necesaria para fijarse a la mitad de la
E disponible y producir la mitad de la
Vmax

cuando [S] >>> KM

V0 k 2 E0 VMAX

cuando [S] <<< KM

k2
E0 S
V0
KM

Ecuacin de Michaelis-Menten

Cintica enzimtica en funcin

de la concentracin de
sustrato

Mecanismo de Michaelis-Menten

Ecuacin de Lineweaver-Burk

1
KM
1

V0 VMAX S VMAX

Mecanismo de Michaelis-Menten

Los parmetros cinticos se utilizan para comparar actividades enzimticas

LA KM ES UN PARMETRO
DE ACTIVIDAD ENZIMTICA

La KM es inversamente proporcional
con la actividad de la enzima.

Valor de KM grande, baja actividad

Valor de KM pequeo, alta activida

Enzimas: pueden catalizar reacciones donde hay 2 S =

Hexocinasa

ATP + Glucosa ADP + 6-fosfato de glucosa

2 Rutas
Desplazamiento

Simple, los 2 S se unen a la E

A + B + E
Doble

EAB C + D

desplazamiento o ping-pong
A + B + E AE BE + C
D

Determinacin Cuantitativa de la Cintica Enzimtica

1.

La reaccin global

2.

Procedimeinto analtico para determinar elS que

desaparece o el P que aparece

3.

S el E requiere Cofactores (ines o coenzimas)

4.

La dependencia de la actividad enzimtica con la

[S] o se la KM del S.

5.

El pH ptimo

6.

Un intervalo de temperatura en la que la E es

estable y muestra actividad elevada.

ACTIVIDAD ENZIMTICA Y VARIACIN DEL

PH

Enzima

Vo

11

14

pH ptimo

Pepsina

1.5

Tripsina

7.7

Catalasa

7.6

Arginasa

9.7

Fumarasa

7.8

Ribonucleasa

7.8

pH

Vo

Vo

37
85
Temperatura oC)

Vo

10

50
100
Coenzima

10

30 50 70 100
Tiempo (min)

1.0 Unidad de Actividad Enzimtica (U):

La cantidad que transforma 1.0 mol (10-6 M) de S /min,
a 25 0C, en las condiciones de medida ptima.
Actividad especfica:
Es el no. de U de una E / mg de protena.
Es decir: una medida de la pureza de la E.
Al purificarla, el valor llega a un mximo y es estable.
Nmero de recambio
No. de molculas de S transformadas /unidad de tiempo,
por una molcula de E ( o por un solo sitio cataltico)
Enzima

No. de Recambio

Anhidrasa carbnica
B-Amilasa
B-Galactosidasa
Fosfoglucomutasa

36 000 000
1 000 000
12 000
1 240

Vmax?
KM?

Transformacin de los Dobles Recprocos

(Lineweaver-Burk)

pendiente

Grfica de Eadie-Hofstee
Vmax

Vo

V max
KM
Vo
[S]

Cuando:
Vo= Vmax Todos los sitios activos estn
ocupados y no hay molculas de E libre.
KM= [S] S... Vmax
KM representa la cantidad de sustrato
necesaria para fijarse a la mitad de la E
disponible y producir la mitad de la Vmax
KM representa la concentracin del sustrato en
una clula

Inhibidores
Reactivos qumicos especficos que pueden
inhibir a la mayor parte de las enzimas.
Irreversibles
INHIBIDORES
Reversibles

Inhibidor Irreversible

Inhibicin permanente

Unin irreversible por medio de enlaces covalentes.

Modificaciones qumicas de los gps. catalticos.

Modificada la enzima, est siempre inhibida.

Para distinguirlo de los reversible se someten a

dilisis y si no se separan enzima e inhibidor, ste es
permanente.

Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo
(DFP)
Acetilcolina

Acetilcolinesterasa

Acetato + Colina

Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo
(DFP)

Acetilcolinesterasa
Tripsina
Elastasa
Fosfoglucomutasa
Cocoonasa (larvas de
gusanos de seda
Malatin

Fluorofosfato de diisopropilo
(DFP)

Iodoacetamida

Serina

Cistena
Histidina

Inhibidor Reversible
La unin del inhibidor y la enzima es
reversible.

Al quitar el inhibidor del medio, se recupera la

actividad.

Hay 3 tipos:
Competitiva
No Competitiva
Acompetitiva (Alostrica)

Antibiticos
Insecticidas
Hervicidas
Venenos
Diferentes Medicamentos

Inhibicin
enzimtica Dolor
Inflamacin
Infecciones virales
Cncer

INHIBICIN COMPETITIVA

Vmax igual
KM diferente

Mecanismo de Michaelis-Menten

Inhibicin competitiva

Mecanismo de Michaelis-Menten

Inhibicin competitiva:
se revierte con un exceso de sustrato

Si [S] >> [I]

Vo Vo,inh

Inhibidores Competitivos
Malonato
Malonato

Deshidrogenasa
Deshidrogenasadel
delcido
cidosuccnico
succnico

Sulfas
Sulfas

Infecciones
Infeccionesmicrobianas
microbianas

Antihipertensores:
Antihipertensores:Captopril
CaptoprilyyEnalopril
Enalopril
Alopurinol
Alopurinol

Controla
Controlalalagota
gota

Fluoruracilo
Fluoruracilo

Cncer
Cncer

INHIBICIN NO
COMPETITIVA
El inhibidor NO se une al sitio activo

NO se puede revertir con un exceso de sustrato

Vmax diferente
KM igual

Mecanismo de Michaelis-Menten

Inhibicin no competitiva

CINTICAS DE INHIBICIN
Competitivo
Vmax igual
KM diferente

1
V

No competitivo
Vmax diferente
KM igual

No inhibitor

1/[S]

INHIBICIN ACOMPETITIVA
El inhibidor se une a una SUBUNIDAD reguladora

La subunidad cataltica
une al sustrato y
cataliza la reaccin