UNIDAD III AISLAMIENTO Y CONSERVACIN DE

CEPAS MICROBIANAS DE IMPORTANCIA

INDUSTRIAL
6 HORAS

FERMENTACIONES

TEMAS:
Requisitos que debe cubrir un cultivo microbiano para
considerarse til en la industria de fermentaciones
Aislamiento de micro organismos de inters industrial
Proceso de tamizado; primario y secundario
Obtencin de un cultivo puro
Mtodos de conservacin de micro organismos
Requerimientos nutricionales
Pruebas de Aceptacin y rechazo
Cultivos sincronizados

Los Hongos se reproducen sexual o asexualmente

BIOTECNOLOGIA MCICROBIANA O
MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
Desarrolla

procedimientos que permitan el

aislamiento y seleccin de
microorganismos de inters industrial

FERMENTACIONES
Mtodo

para detectar la actividad deseada.

La
Biotecnologa
Microbiana
o
Microbiologa industrial,
comenz con procesos de fermentacin
alcohlica, tales como:
fabricacin de cerveza o vino, luego
prosigui CON: Antibiticos
aditivos
alimentarios
(aminocidos),
enzimas y sustancias
qumicas industriales (butanol y cido
ctrico

Microorganismos con potencial industrial y

ambiental:
No todos los microorganismos tienen uso industrial, estos se
seleccionan por su capacidad de fabricar productos
especficos, transformndolos en organismos altamente
especializados antes de ingresar a la industria

Biotecnologa Microbiana:

En la actualidad con la tecnologa del ADN

recombinante se somete al
microorganismo a un proceso de ingeniera para que
produzca una sustancia que normalmente no genera
con alto rendimiento

De las100000 especies de mo descritas en

la Naturaleza, los que se han encontrado
con utilidad industrial son apreciados
por elaborar alguna sustancia que no se
puede obtener de manera fcil o barata
por
otros
mtodos.

Las Bacterias se
reproducen por Fisin
Binaria

Formas
Bacterianas

Los Hongos se reproducen sexual o

asexualmente

HONGOS

Fase estacionaria
s
Fa
ue
m
rt e

Fa
se

de

Fase
Lag

lo
g

Nmero de bacterias

Curva de crecimiento bacteriano

tiempo
Algunos microorganismos se reproduzcan en tan solo 20 minutos (Escherichia coli)
Los mo tienen una elevada tasa metablica

APLICACIN:

En industria farmacutica: productos de gran valor comercial:

antibiticos, hormonas, y esteroides Y : Hormonas humanas,
Agentes antivirales y antitumorales, Factores de coagulacin
sangunea, Activador de plasmingeno tisular, Vacunas y
anticuerpos monoclonales (diagnostico y terapia).

En la alimentacin el consumo de bacterias lcticas o

PROBITICOS, (promotores de la vida), alimewntos
fermentados etc.
En agricultura, la biotecnologa microbiana, se emplea en

biofertilizacin, utiliza organismos como Agrobacterium tumefaciens

para modificar genticamente a las plantas. Plantas modificadas para ser
resistentes a insectos tienen genes de txinas de Bacillus
thuringiensis.
Como Biofertilizantes (solubilizadoras de fsforo,
productoras de fitohormonas) y fijadoras de nitrgeno (Herbaspirillum
sp., Gluconacetiobacter sp., Azotobacter sp.)
Biotecnologa microbiana, tambin se usa en medicina veter

Salud:
Bordetella pertusis
Clostridium tetani
Corynebacterium diptheriae
Propionebacterium sp.
Penicillium chrysogenium
Bacillus sp.
Rhizopus nigricans
Curvularia lunata
E. coli. , Bacterias lcticas, Etc.

Alimentos:
Saccharomyces cereviciae
Streptococcus lactis
Lactobacillus vulgaris
Saccharomyces sp.
Acetobacter aceti
Lactobacillus sp.
Streptococcus sp.
Penicillium sp

Ambiental
Thiobacillus ferrooxidans
Acidithiobacillus thiooxidans
Leptospirillum ferrooxidans
Saccharomyces sp.
Metanognicas
Hyphomicrobium sp.
Pichia pastoris.
Thiobacillus thioparus

Docente: Alejandra Arancibia.

17

Produccin de BIOCOMBUSTIBLE la
bacteria
S. degradans ha llevado a un proceso que
puede hacer etanol
En BIOREMEDIACIN DE SUELOS se usa la habilidad
de microbios, plantas o sus enzimas para degradar y
descontaminar distintos compuestos en suelos y
tierras de naturaleza urbana e industrial.
Desechos orgnicos
mercurio, cadmio)

Metales

pesados

(plomo,

Como agruparlos en su estudio

Bacterias acticas:
La actividad de las bacterias acticas se conoce desde hace siglos
por la produccin de vinagre, la acetificacin de bebidas alcohlicas
y el deterioro de frutos. Contaminantes de los vinos.

Las acetobacterias son un cocobacilos gramnegativos, flagelos peritricos, mviles. La

mayora de los gneros de esta familia soportan altas concentraciones de sacarosa, as
como de sus componentes, glucosa y fructosa. Adems, muchas
de ellas son capaces de crecer en presencia de cido actico
Producen acidificacin cuando crecen en presencia de etanol.
Algunas especies son fijadoras de Nitrgeno

Clasificacin en los aos 70 que dice que las bact. acticas pertenecen al
orden Pseudomonodales, familia pseudomonodaceae incluyendo en esta ultima
dos gneros distintos al genero Pseudomonas el genero GLUCONOBACTER y el
ACETOBACTER que incluye a su vez tres especies importantes:
Acetobacter aceti
Acetobacter pasteurianus
Acetobacter peroxydans
Los caracteres taxomomicos mas caractersticos de cada una de ellos son los
siguientes:
G. Pseudomonas
flagelacin polar
no desarrolla a pH 4,5
No oxida el etanol a acido actico
G. acetobacter
flagelacin peritica
desarrollo bueno a pH 4,5
oxidacin intensa etanol a ac. actico
G. gluconobacter
flagelacin polar
desarrollo positivo a pH 4,5
oxidacin moderada etanol a ac. acetico

Bacterias del cido lctico, tambin bacterias

cido lcticas y cultivos lcticos
Son cocos o bacilos GRAM positivas, cido
tolerantes, algunos en rangos de pH entre 4.8 y
9.6 fermentan la lactosa con produccion de
acido, anaerobias facultativas.

Son organismos que no forman esporas,

son inmviles, cocos o bacilos con bajo
contenido de guanina y citocina,
Estas son bacterias que generalmente se
encuentran en plantas y
productos lcteos en descomposicin
Lactobacilos blgaros
utilizados para la produccin
casera de yogur.

Los gneros bsicos que comprenden las

BAACTERIAS LACTICAS son Lactobacillus
, Leuconostoc, Pediococcus, Lactococcus,
y Streptococcus as como los Lactobacillales
Aerococcus, Carnobacterium, Enterococcus,
Oenococcus,Teragenococcus, Vagococcus,
y Weisella.

Los representantes de las BAL

homolcticas incluyen
Lactococcus, Enterococcus, Streptococcus,
Pediococcus y el grupo I Lactobacilli. A
travs de la va
glucoltica de Embden-Meyerhof-Parnas
Las BAL heterofermentativas utilizan la ruta de la
pentosa fosfato.
Las BAL obligatoriamente heterofermentativas
incluyen: Leuconostoc, Oenococcus, Weissella, y
el grupo III Lactobacilli.

La coleccin de "Lactina" consta de tres grupos de cepas

Grupo . thermophilic homofermentativo lactobacilli

Lactobacillus delbrueckii ssp.bulgaricus
Lactobacillus acidophilus
Lactobacillus helveticus
Lactobacillus lactis
Grupo . cido lctico thermophilic streptococci
Streptococcus thermophilus
Grupo II. - mesophilic lactococci y lactobacilli
Lactococcus lactis
Lactococcus lactis biovar diacetylactis
Lactococcus cremoris
Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris
Lactobacillus casei, inlc. GG;
Lactobacillus plantarum etc.

Lactobacillus bulgaricus
Clasificacin cientfica
Reino:

Bacteria

Divisin:

Firmicutes

Clase:

Bacilli

Orden:

Lactobacillales

Familia:

Lactobacillaceae

Gnero:

Lactobacillus

Especie:

L. delbrueckii

Subespecie:

'bulgaricus
Nombre binomial

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus

(ORLA-JENSEN 1919)
ROGOSA & HANSEN 1971
Estas bacterias tienen diferentes habitats, se
pueden encontrar formando parte de la flora
normal de las mucosas de la boca o de la
vagina, y tambin se las puede encontrar en la
leche

Lactobacillus

Clasificacin cientfica
Dominio:

Bacteria

Filo:

Firmicutes

Clase:

Bacilli

Orden:

Lactobacillales

Familia:

Lactobacillaceae

Gnero:

Lactobacillus
BEIJERINCK, 1901

Especies
L. acidophilus
L. bulgaricus
L. casei
L. delbrueckii
L. fermentum
L. gasseri
L. johnsonii
L. lactis
L. paracasei
L. plantarum
L. reuteri
L. rhamnosus
L. salivarius
Rhamnousus

Lactobacilos blgaros
utilizados para la produccin
casera de yogur.

Identification of Lactobacilli and Bifidobacteria

Table 1. Lactobacillus species
L. acetotolerans
L. acidophilus
L. agilis
L. alimentarius
L. Amylolyticus
L. amylophilus
L. amylovorus
. animalis
L. aviarius subsp. araffinosus
L. aviarius subsp. aviarius
L. Bifermentans
L. brevis
L. Buchneri
L. carnis
L. Casei
L. catenaforme
L. Cellobiosus
L. collinoides
L. coryniformis subsp. Coryniformis
L. coryniformis subsp. torquens
L. crispatus
L. curvatus subsp. curvatus
L. curvatus subsp. melibiosus
L. delbrueckii subsp. bulgaricus
L. delbrueckii subsp. delbrueckii
L. delbrueckii subsp. lactis
L. Farciminis
L. fermentum
L. Fructivorans
L. fructosus
L. gallinarum

L. Kefiranofaciens
L. kefirgranum
L. Kefiri
L. kunkeei
L. Lindneri
L. malefermentans
L. Mali
L. maltaromicus
L. manihotivorans
L. murinus
L. oris
L. panis
L. Parabuchneri
L. paracasei subsp. paracasei
L. paracasei subsp. Tolerans
L. parakefiri
L. Paraplantarum
L. pentosus
L. Plantarum
L. pontis
L. reuteri
L. rhamnosus
L. rogosae
L. ruminis
L. sakei subsp. carnosus
L. sakei subsp. sakei
L. salivarius subsp. salicinius
L. salivarius subsp. salivarius
L. Sanfranciscensis

L. gasseri
L. Graminis
L. hamsteri
L. Helveticus
L. hilgardii
L. homohiochii
L. iners
L. intestinalis
. jensenii
L. johnsonii
L. Kandleri
L. sharpeae
L. Suebicus
L. uli
L. vaccinostercus
L. vaginalis
L. Vitulinus
L. zeae

For further information, see reference 36

Identification of Lactobacilli and Bifidobacteria

Leuconostoc
Clasificacin cientfica
Dominio:

Bacteria

Filo:

Firmicutes

Clase:

Bacilli

Orden:

Lactobacillales

Familia:

Leuconostocaceae

Gnero:

Leuconostoc
VAN TIEGHEM1878
Especies

L.
L.
L.
L.
L.
L.
L.
L.
L.
L.
L.
L.
L.
L.
L.
L.

carnosum
citreum
durionis
fallax
ficulneum
fructosum
garlicum
gasicomitatum
gelidum
inhae
kimchii
lactis
mesenteroides
oenos
pseudoficulneum
pseudomesenteroides

Leuconostoc Gram-positivas de la familia Leuconostocaceae

. tienen forma cocoide ovoide y a menudo forman cadenas.
Son resistentes a la vancomicina y catalasa-negativos (lo cual
los distingue de Staphylococcus). Son heterofermentativos,
capaces de producir dextranoa partir de la sacarosa.

Pediococcus
Clasificacin cientfica
Dominio:

Bacteria

Filo:

Firmicutes

Clase:

Bacilli

Orden:

Lactobacillales

Familia:

Lactobacillaceae

Gnero:

P.
P.
P.
P.
P.
P.
P.
P.
P.
P.

Pediococcus
CLAUSSEN 1903
Especies

acidilactici
cellicola
claussenii
damnosus
Pediococcus Gram-positivas de la familia Lactobacillaceae.
se presentan en pares o ttradas, siendo las nicas bacterias
dextrinicus
del cido lctico con forma de coco que se dividen a lo largo de
ethanolidurans dos planos de simetra. Son bacterias homofermentativas,
contaminantes de la cerveza y vino . Ciertos Pediococcus
inopinatus
producen diacetil, lo que proporciona un aroma a mantequilla o
parvulus
butterscotch a algunos vinos (tales como Chardonnay) y unos
pocos tipos de cerveza..
pentosaceus
stilesii

Lactococcus
Lactococcus lactis
Clasificacin cientfica
Dominio:

Bacteria

Filo:

Firmicutes

Clase:

Bacilli

Orden:

Lactobacillales

Familia:

Streptococcaceae

Gnero:

Lactococcus
SCHLEIFERET AL.1986

Especies

L.
L.
L.
L.
L.
L.
L.

chungangensis
fujiensis
garvieae
lactis
piscium
plantarum
raffinolactis

Lactococcus es un gnero de bacterias del cido lctico

formado por siete especies pertenecientes anteriormente al
gnero Streptococcus y otras especies relacionadas. Las
bacterias de este gnero son tpicamente esfricas u
ovoides, de 0,5 a 1,2 m por 0,5 a 1,5 m, y se agrupan en
pares o en cadenas cortas. Son no formadoras de esporas y
no mviles. La especie tipo del gnero es L. lactis con dos
subespecies lactis y cremoris. Lactococcus difiere de otras
bacterias cido lcticas por su tolearancia al pH, sal y
temperatura de crecimiento

Streptococcus
Clasificacin cientfica
Dominio:

Bacteria

Filo:

Firmicutes

Clase:

Bacilli

Orden:

Lactobacillales

Familia:

Streptococcaceae

Gnero:

Streptococcus
Especies

S. agalactiae
S. bovis
S. mutans
S. pneumoniae
S. pyogenes
S. salivarius
S. sanguinis
S. suis
S. thermophilus
S. viridans
etc.

El gnero Streptococcus: cocos grampositivos,

crecen en cadenas o pares, son oxidasa y catalasa
negativos.

Enterococcus
Enterococcus sp.
Clasificacin cientfica
Dominio:

Bacteria

Filo:

Firmicutes

Clase:

Bacilli

Orden:

Lactobacillales

Familia:

Enterococcaceae

Gnero:

Enterococcus
(EXTHIERCELIN & JOUHAUD 1903)
SCHLEIFER & KILPPER-BLZ 1984

Especies
E.
E.
E.
E.

avium
durans
faecalis
faecium

Enterococcus es un gnero de bacterias del cido lctico. Los

miembros
de
este
gnero
eran
clasificados
como Streptococcus Grupo D hasta 1984 cuando los anlisis de ADN
genmicos indicaron que un gnero separado era ms apropiado.
SON coco Gram-positivos que se presentan en parejas (diplococos),
siendo difcil distinguirlos de Streptococcus.
Dos de las especies son comensales en el intestino humano: E.
faecalis y E.
faecium.
El
enterococo
es
un
organismo
facultativo aerobio, esto es, prefiere usar oxgeno, aunque sobrevive
bien en su ausencia, exhiben gamma-hemolisis en agar sangre de
cordero.

Lactobacillus acidophilus
Se usa junto con el
Streptococcus thermophilus
en la produccin del yogur

PROBIOTICOS:
Los tipos ms comunes de bacterias
prebiticas son las cepas de
Lactobacillus y Bifidobacterium, que
a
veces
se
combinan
con
Streptococcus thermophilus

Bifidobacterium es
un gnero de bacterias grampositivas, anaerbicas, no mviles, con
frecuencia ramificadas.
Algunas bifidobacterias se usan
como probiticos.
Antes de 1960
las especies de Bifidobacterium eran
denominadas colectivamente "Lactobacillus
bifidus".
Las bifidobacterias es un grupo mayoritario de bacterias
sacarolticas en el colon, y constituyen
hasta un 25% de la poblacin total en un intestino
adulto, y un 95% en los recin nacidos. Son capaces de
producir vitaminas del grupo B ( B-1, B-2, B-6, B-12 )

Gnero:

B. Adolescentis
B. angulatum
B. animalis
B. asteroides
B. bifidum
B. boum
B. breve
B. catenulatum
B. choerinum
B. coryneforme
B. cuniculi
B. denticolens
B. dentium
B. gallicum
B. gallinarum
B. indicum

Bifidobacterium
Bifidobacterium
ORLA-JENSEN 1924
Especies
B.
B.
B.
B.
B.
B.
B.
B.
B.
B.
B.
B.
B.
B.
B.
B.

infantis
inopinatum
lactis
longum
magnum
merycicum
minimum
pseudocatenulatum
pseudolongum
pullorum
ruminantium
saeculare
subtile
suis
thermacidophilum
thermophilum

MICROORGANISMOS PROBIOTICOS
Lactobacillus acidophilus
Lactobacillus casei var. Shirota
Lactobacillus fermentum
Lactobacillus casei
Lactobacillus crispatus
Bifidobacterias
Lactobacillus reuteri
Bifidobacterium longum
Lactobacillus rhamnosus
Lactobacillus plantarum
Bifidobacteria adolescentis
Lactobacillus bulgaricus
Bifidobacteria animalis
Lactobacillus cellobiosus
Bifidobacteria infantis
Lactobacillus curvatus
Bifidobacteria bifidum
Lactobacillus lactis cremoris
Lactobacillus GG
Streptococcus salivaris

Streptococcus faecium
Streptococcus diacetylactis
Streptococcus intermedius
Streptococcus thermophillus
Saccharomyces boulardii

PREBIOTICOS:

Alimentos que contienen ingredientes no digeribles de la

dieta que por estimular de forma selectiva el
crecimiento de microorganismos o la actividad
microbiana intestinal benefician la salud del consumidor
fructooligosacaridos (FOS), inulina
Polmero de Fructosa en enlace ,1-2 no digerible Obtenidos
de vegetales (achicoria, cebolla, etc.)
Flora intestinal estimulada:
Lactobacillus, Bifidobacterium

INFECCION
POR Helicobacter
Pylori
Patgeno Gram-negativo responsable de la gastritis,
ulcera pptica y cncer gstrico. Estudios in vitro y en
humanos han demostrado que los Proboticos poseen
un efecto antagnico contra H. Pylori, inhibiendo su
colonizacin gstrica e impidiendo el desarrollo de la
patologa relacionada, inhiben la actividad de la
enzima ureasa, necesaria para que el patgeno
permanezca en el ambiente cido estomacal.

Produccin de cido Glutmico

Corynebacterium glutamicum

La fermentacin alcohlica es
un proceso fermentacin en
ausencia de aire (oxgeno - O2)

Saccharomyces
Clasificacin cientfica
Reino:

Fungi

Filo:

Ascomycota

Clase:

Hemiascomycetes

Orden:

Saccharomycetales

Familia:

Saccharomycetaceae

Gnero:

Saccharomyces
Especies

Saccharomyces
Saccharomyces
Saccharomyces
Saccharomyces

bayanus
boullardii
cerevisiae
uvarum

Un ejemplo es el Saccharomyces cerevisiae, que se usa en la produccin

de vino, pan y cerveza. Otros miembros de este gnero son: S. bayanus, utilizado
para la produccin de vino y S. boulardii, usado en medicina. Ms recientemente, se
ha demostrado que el S. boulardii es una subespecie del S. cerevisiae.

Bebidas alcohlicas destiladas se

elaboran
a partir de cereales fermentados o jugo de fruta
fermentado. Durante el proceso de destilacin:
El sabor depende del tipo y la cantidad de granos, frutas y
levaduras que se utilizan. Otro factor que afecta el sabor
son la fermentacin, destilacin y envejecimiento.
Hay diferentes tipos de bebidas alcohlicas destiladas:
Whisky - Licor alcohlico destilado de grano, como el
maz, el centeno o la cebada. La mayora de whiskies son
una mezcla de diferentes tipos de whiskies hechos de
diferentes granos y edades.
Vodka - puede ser el resultado de trigo fermentado,
centeno, maz o pur de papas, no es aejado, por lo tanto
no tiene edad ni tiene color, olor y sabor.
QUE SON LOS LICORES?
Son las bebidas hidroalcohlicas dulce
aromatizadas obtenidas por maceracin, infusin o
destilacin de diversas sustancias vegetales naturales, con alcoholes destilados aromatizados, o
por adiciones de extractos, esencias o aromas autorizados, o por la combinacin de ambos,
coloreados o no, con una generosa proporcin de azcar. Teniendo un contenido alcohlico
superior a los 15 llegando a superar los 50 centesimales, diferencindose de los aguardientes
por mayor o menor contenido de azcares. el aguardiente, el coac y el whisky son licores

Licores - una bebida alcohlica que a menudo es

dulce con una base de aguardiente, que tambin
se conoce como cordial. Viene con diferentes
colores y sabores, como mora, naranja, chocolate,
melocotn, entre otros.
Ginebra - se elabora a base de centeno y otros
granos destilados aromatizados con bayas.
Ron - se destila a partir de melazas de caa de
azcar y luego se envejece.
Brandy - destilado de vino o de zumos de frutas
fermentadas que luego se aeja.
Tequila es el destilado del jugo fermentado del
maguey.
Aquavit - licor escandinavo hecho a partir de
patatas o pur de cereales y preparados con
semillas de alcaravea.

Flora microbiana en el
tratamiento de aguas residuales
Digestin aerobia
Digestin anaerobia

Atributos que debe cubrir un cultivo microbiano para

considerarse til en la industria de fermentaciones

1. Debe producir la sustancia de inters

2. Debe estar disponible en cultivo puro
3. Debe ser genticamente estable
4. Debe crecer en cultivos a gran escala.
Debe crecer rpidamente y producir el
producto deseado en un corto perodo de
tiempo
5. Debe tambin crecer en un
relativamente barato medio de cultivo
disponible en grandes cantidades.

Atributos que debe cubrir un cultivo microbiano

para considerarse til en la industria de
fermentaciones

6. No debe ser patgeno para el

hombre o para los animales o plantas.
7. Debe ser fcil de separar las clulas
microbianas del medio de cultivo
8.- debe ser resistente a alteraciones
posibles en condiciones ambientales
debido a contaminacin microbiana

OBTENCION Y AISLAMIENTO DE
MICROORGANISMOS DE INTERES
INDUSTRIAL
Una tcnica de aislamiento y seleccin
efectiva debe permitir en pocos pasos, la
eliminacin de los microorganismos sin valor,
al mismo tiempo que la deteccin fcil de los
deseados aun cuando estos se encuentren en
una muy baja proporcin, en la poblacin
inicial

MICROORGANISMOS QUE SE PUEDEN AISLAR

Termofilicos

Celuloliticos
Mesofilicos

Degradadores

de

hidrocarburos
Microorganismos con una
alta velocidad de crecimiento
Productores de antibioticos
Etc.

Fuentes de obtencin de mo de
inters industrial
Los ambientes capaces de albergar vida microbiana son muy
variados.

Se

han encontrado especies que viven a temperaturas

comprendidas entre el punto de congelacin del agua y el punto
de ebullicin, en agua salada y dulce, en presencia y en
ausencia de aire.
Algunos

han desarrollado ciclos de vida que incluyen una fase

de latencia en respuesta a la falta de nutrientes: en forma de
esporas permanecen inactivos durante aos hasta que el medio
ambiente, ms favorable, permita el desarrollo de las clulas.
Los

microorganismos se hallan capacitados para acometer una

extensa gama de reacciones metablicas y adaptarse as a
muchas fuentes de nutricin. Versatilidad que hace posible el
que las fermentaciones industriales se basen en nutrientes
baratos

1.- Colecciones internacionales

de cultivos tipo o stock
2.- Fuentes naturales de
aislamiento
3.- programas de
mejoramiento de cepas

Fuentes primarias
Cultivos stock
American Type Culture Collection (ATCC)
Central Bureau Voor Schimmelculture (CBS)
Agricultural Research Cervice Culture Collection (NRRL)
Commonwealth Mycological Institute
National Collection of Industrial Bacteria (NCIB)
Centre de Collection des Types Microbiens
National Collection of Type Culture (NCTC)
Culture Collection of Indiana Universyty

Fuentes naturales de aislamiento (fuentes

secundarias)

Agua
Posos

negras
petroleros y refineras
Suelos. (100 millones de mo por gramo de suelo)
bosques, jardn etc.)
Residuos vegetales en descomposicin
Races y tubrculos de vegetales
Aguas dulces (lagos, Rios)
Tejidos animales
Residuos de industrias alimentarias
Residuos lignocelulosicos
Residuos de ganado
Residuos de productos pesqueros
Frutos en descomposicin
Residuos de los procesos de fermentacin
Residuos de plantas elaboradoras de jugos

Solo aislar aquellos

microorganismos que produzcan
un compuesto de beneficio
econmico utilizando:
Tamizado primario
Tamizado secundario

Screening (Bsqueda): Deteccin y

aislamiento de microorganismos de
inters

industrial

de

entre

una

poblacin compleja de organismos

utilizando
selectivos.

procedimientos

Screening Primario: Deteccin y

aislamiento de microorganismos
potencialmente tiles.
Estudio de los
microorganismos aislados en el screening
primario para separar los que tienen inters
potencial de los que tienen inters real y
mejorar estas cepas seleccionadas
Screening Secundario:
Secundario

Seleccin de Microorganismos

Screening

Deteccin
Deteccin y
y aislamiento
aislamiento de
de microorganismos
microorganismos de
de inters
inters industrial
industrial de
de
entre
entre una
una poblacin
poblacin compleja
compleja de
de organismos
organismos utilizando
utilizando protocolos
protocolos
selectivos.
selectivos.

PRIMARIO

SECUNDA
RIO

Screening
Primario

Screening
Secundario

Poblacin Mixta.
Medios Selectivos.
Inhibidores
Anlisis de
microorganismos aislados
en el Screening 1.
separando los de inters
potencial de los de inters
real y mejorar estas cepas
seleccionadas.

Seleccin de Microorganismos

SELECCION DE MICROORGANISMOS
Screening (Bsqueda): Deteccin y aislamiento de microorganismos de inters
industrial de entre una poblacin compleja de organismos utilizando
procedimientos selectivos.
Screening Primario: Deteccin y aislamiento de microorganismos
potencialmente tiles.
Screening Secundario: Estudio de los microorganismos aislados en el screening
primario para separar los que tienen inters potencial de los que tienen inters
real y mejorar estas cepas seleccionadas.
Para llevar a cabo un screening primario generalmente se parte de una
poblacin mixta (suelo, fermentaciones naturales, etc.) donde existe tanto una
gran cantidad como variedad de microorganismos potencialmente tiles que
debemos seleccionar. Para ello lo primero que hacemos es utilizar medios
selectivos donde crezca el tipo de microorganismo que nos interesa aislar. A
este medio se le pueden aadir inhibidores para eliminar los que no nos
interesan. Por ejemplo, si queremos obtener un microorganismo aerobio lo
creceramos en presencia de O2 con lo que los anaerobios no creceran; o bien si
queremos seleccionar hongos, aadiramos cloranfenicol, antibitico que acta
frente a bacterias pero que no afecta a los hongos. Los parmetros generales
que tenemos que tener en cuenta son la fuente de carbono, fuente de
nitrgeno, aireacin, temperatura, pH e inhibidores. Posteriormente se reaislan
en cultivo puro aquellos microorganismos que hemos aislado para su posterior
estudio.

Muestreo y aislamiento
Muestreo
Tratamiento de la muestra
Enriquecimiento
Aislamiento

Muestra de Suelo u otra:

1. Se toma en una bolsa estril con guantes y esptula
una muestra de el suelo.
2. La muestra de suelo se resuspende en agua estril.
3.

El sobrenadante se diluye 10-1 a 10-10 veces.

4. Muestras de estas series de diluciones (100 L) se

siembran sobre varios medios de cultivo
(dependiendo del tipo de microorganismos que
queramos aislar) y luego se incuban.
5. Se aslan colonias separadas de distinta morfologa
y se purifican por resiembra.
6. Los cultivos puros se mantienen en tubos de
ensayo como cultivos en medio slido listos para
realizar las pruebas de seleccin.

Tcnica de siembra por difusin en

placa

Tcnica de vertido en placa

Aislamiento directo en
medio selectivo y diferencial

Parmetros a considerar:

Temperatura:
Hongos 20-22C;
Actinomicetos 28C
pH:
Hongos pH cido;
Bacterias pH neutro

Oxgeno: Todos los productores son

aerobios
Carbono: Actinomicetos glicerol,
quitina, almidn
Nitrgeno: Actinomicetos casena,
arginina, asparagina; En general
amonio o nitrato

Una vez crecidas las colonias que nos

interesan, se utiliza un microorganismo
que

sea

susceptible

de

inhibir

su

crecimiento por los antibiticos que

queramos seleccionar: Gram +, Gram
-, amplio espectro, etc. Se aslan,
aslan para
ensayos posteriores, aquellas colonias
que produzcan halos de inhibicin

Seleccin

de

microorganismos

productores de vitaminas y otros

factores de crecimiento
Cmo comprobar lo que deseamos?
Seleccin de microorganismos
productores de enzimas

Cultivos puros aislados

 Aumentar rendimientos
Disminuir o eliminar co-metabolitos indeseables
(ej. pigmentos, otros productos o metabolitos
que se originan en la misma va, facilitar la
purificacin)
Estimular la utilizacin de fuentes de carbono
o nitrgeno mas baratas (ej. plsticos)
Alterar morfologa o funciones para obtener
propiedades deseadas (ej. espuma, pellets,
etc.)

Mejoramiento de procesos

1. Seleccin de microorganismos de la
naturaleza empleando criterios ecofisiolgicos (temperatura, pH, salinidad,
etc.). Esta basado en tcnicas de cultivo y
seleccin
2. Seleccin directa de secuencias genticas de
inters del medio ambiente (pos-genmica)
3. MUTACION CON AGENTES MUTAGENICOS Y
SELECCIN DE MUTANTES
a. al azar
b. sitio dirigida
c. Basada en propiedades metablicas

Tcnicas empleadas

4. Hibridizacin, recombinacin y
seleccin de recombinantes
5. Transformacin
6. Conjugacin
7. Trasduccin
8. Clonado y expresin de genes

Tcnicas empleadas

El proceso de mejoramiento de cepas consiste en 3

ciclos interactivos de mutacin, seleccin y anlisis

MANTENIMIENTO Y
CONSERVACION DE
MICROORGANISMOS
INDUSTRIALES

Objetivos de conservar
microorganismos:
1.- Mantener los cultivos viables a lo largo
del tiempo.
2.- Mantener los cultivos puros, sin
contaminaciones.
3.- Mantener los cultivos sin cambios en sus
caractersticas, es decir estables.

Mantenimiento bajo capa de

aceite
Cubrir completamente el cultivo despus de
su desarrollo en medio slido, con una capa
de aceite mineral o vaselina estril.
Los cultivos en esta forma se pueden
conservar a temperatura ambiente.

Desventajas:
Se sostienen que en estas condiciones
los microorganismos pueden
continuar reproducindose, con
posibilidades de aparicin de
mutantes.
Sin embargo se acepta que estas
alteraciones no se observan hasta los
tres aos de mantenimiento.

CONGELAMIENTO
Al bajar la temperatura hasta el punto de congelacin o por
debajo de ste se reduce el metabolismo drsticamente
hasta el caso de prcticamente anularlo con nitrgeno lquido
(-196C).

Existen una serie de problemas que debemos tener

en cuenta en la congelacion:
La formacin de cristales de hielo pueden
romper las clulas, adems al eliminar el agua
lquida por convertirse en hielo existe una
concentracin de sales que puede ser perjudicial.
Para evitar estos problemas se deben utilizar
suspensiones que contengan el mnimo de sales
posibles as como utilizar agentes protectores
como el glicerol (25%) o dimetilsulfxido (DMSO
10%) que neutralizan el efecto de las sales.
El realizar el proceso de congelacin de una
forma rpida o gradualmente no est claro.
Algunos recomiendan una bajada gradual
(1C/min) hasta -20C para posteriormente enfriar
rpidamente. Sin embargo, la descongelacin debe
ser rpida.

Congelamiento:
Una baja drstica de T disminuye o
anula el metabolismo.
Cultivo en fase estacionaria (alta
resistencia a daos).
Densidad Celular Elevada.
Agentes crioprotectores. (glicerol
10%, dimetilsulfxido (DMSO)
10%).
Ampollas de plstico en Nitrgeno
lquido.

Desventajas
Velocidades de congelamiento y
descongelamiento.
Como criterio general, es el
enfriamiento a 1 C min-1 (ya que una
rpida congelacin causa ruptura de
membranas) hasta -20 C y luego un
rpido descenso.

-30C: congelador de frigorfico. No se recomienda debido a

la formacin de eutcticos (suspensin con distintos puntos
de congelacin debido a los solutos que pueden daar a las
clulas).
-70C: nieve carbnica (CO2 slido) o ultracongeladores. Es
el mtodo ms utilizado en los laboratorios de microbiologa.
-196C: nitrgeno lquido. Se utiliza para la conservacin de
bacterias, virus y lneas celulares. Existen varios problemas
prcticos: el nitrgeno se evapora continuamente por lo que
se debe rellenar regularmente; se deben utilizar recipientes
que resistan bien estas temperaturas y que estn bien
cerrados para evitar la entrada de nitrgeno lquido.

Liofilizacin:
- Es el mtodo ms utilizado por las
colecciones internacionales de cultivos tipo para
la conservacin de los microorganismos.
-Consiste en congelar rpidamente una
suspensin de microorganismos y eliminar el
agua como vapor de agua directamente del hielo
sin pasar por el estado intermedio lquido. Por lo
tanto, combina la congelacion y la desecacin
por sublimacin.
-El sistema requiere tres componentes:
mecanismo de congelacin, bomba de vaco y
una trampa de agua.

Los lifilos se conservan entre 0 y 5C

durante muchos aos. Para su
recuperacin se resuspende el lifilo
en el medio de cultivo adecuado y se
incuban a la temperatura adecuada.
No obstante, hay que estudiar, como
en los casos anteriores (desecacin y
congelacin), las condiciones ptimas
de supervivencia de nuestro
microorganismo.

Subcultivo seriado
Consiste en resembrar el
microorganismo cada cierto tiempo
en un medio adecuado;
generalmente se utiliza agar
inclinado ya que en medio slido se
detectan mejor los contaminantes
que en medio lquido y el hacerlo
inclinado tiene por objeto el evitar
la desecacin rpida del medio.

DESVENTAJAS
1.- Este mtodo es vlido para cortos perodos de

tiempo (semana - 15 das) por lo que deben ser resembrados

con frecuencia lo que incrementa el riesgo de contaminacin .
2.- Adems, al mantenerlos a temperatura ambiente,
pueden crecer y espontneamente cambiar sus caractersticas
genticas (mutacin, prdida de plsmidos, etc.) que pueden
afectar al carcter por el que fueron seleccionados.
Estos dos inconvenientes pueden subsanarse en parte en
lenteciendo el metabolismo de los microorganismos al
mantenerlos a 4C con lo que su crecimiento es inferior y la
necesidad de hacer subcultivos se prolonga a 1 - 3 meses. En
microbiologa industrial hay que pensar en mantener las
colecciones durante perodos de aos y no de meses, por lo
tanto se utilizan otras tcnicas que nos ahorran trabajo y
disminuyen los riesgos.

Desecacin
La eliminacin del agua (deshidratacin) es un
mtodo de conservacin que reduce drsticamente
el metabolismo. Sin embargo, no todos los
microorganismos sobreviven a estos mtodos de
secado, por lo que se hace necesario aadir
agentes protectores (leche descremada, glutamato
sdico al 10%). Una vez secos es importante
mantener el producto sellado (tapn de rosca,
ampolla) para evitar el contacto con el aire ya que
son
higroscpicos.

Estos mtodos de secado son particularmente

tiles para conservar microorganismos
productores de esporas, p.j. actinomicetos
Los soportes que se suelen utilizar son arena, suelo,
slica gel previamente secados y esterilizados por
calentamiento con aire caliente (no utilizar autoclave y
s calor seco).
Sobre estos soportes se aade la suspensin de los
microorganismos y se deja secar a temperatura
ambiente.
Tambin se pueden utilizar como soportes discos o
tiras de papel, agar , discos de gelatina donde se aade
la suspensin de microorganismos y posteriormente se
seca al vaco evitando la congelacin, lo que se
denomina
L-secado
(L-drying).

De los mtodos de conservacin de

microorganismos proponga el mejor para cada
uno:
1. Bacterias
2.- Cianobacterias y cianobacterias
3.- Virus
4.- Hongos filamentosos
5.- Hongos levaduriformes

CONSERVACION DE DIFERENTES GRUPOS DE MICROORGANISMOS

Debido a la gran variedad que presentan los microorganismos no existe ningn mtodo ptimo
para todos e incluso para un grupo particular de microorganismos ya que lo que funciona bien
para algunos no es til para otros. No obstante, en lneas generales podemos asumir lo siguiente:
1.- Algas y cianobacterias
La mayor parte de los cultivos se han mantenido como subcultivos seriados a temperaturas entre
10 y 15C. Para crecer estos cultivos se necesita luz (fotosintticos). Algunas cianobacterias
pueden conservarse bien desecadas ya que presentan formas de resistencia (akinetos). En
general, las algas no aguantan bien la liofilizacin ni la desecacin. En cuanto a la congelacin los
mejores resultados se obtienen con nitrgeno lquido.
2.- Bacterias
Prcticamente se han usado todos los mtodos conocidos con buenos y malos resultados, aunque
en lneas generales el mejor mtodo es la liofilizacin debido a su facilidad de transporte.
3.- Virus
Se han utilizado todos los mtodos obteniendo en lneas generales baja supervivencia. Se
recomienda para su conservacin durante largos perodos de tiempo el nitrgeno lquido.
4.- Hongos
La mayora de los hongos pueden conservarse por desecacin en suelo. Aunque, al igual que las
bacterias, presentan una gran diversidad encontrndonos de todo.

PRUEBAS DE INDENTIFICACION DE
MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Morfologia microscopica
Morfologia macroscopica
Pruebas bioqumicas
prueba de produccin del
metabolito de inters
PCR

PRUEBAS DE ACEPTACION O RECHAZO

Se toma un inoculo del vial o

ampolleta y se hace crecer en un medio
mnimo luego se hacen diluciones y se
siembra, se observa la viabilidad en
placa y su morfologa colonial
pruebas de capacidad de produccin

Bacterias
Entre las especies bacterianas de inters industrial
estn las bacterias del cido actico, Gluconobacter y
Acetobacter que pueden convertir el etanol en cido
actico.
El gnero Bacillus es productor de antibiticos
(gramicidina, bacitracina, polimixina),
proteasas e insecticidas. Del gnero Clostridium cabe
destacar Clostridium acetobutylicum que puede
fermentar los azcares originando acetona y butanol.
Las bacterias del cido lctico incluyen, entre otras, las
especies de los gneros Streptococcus y Lactobacillus
que producen yogur. Corynebacterium glutamicum es
una importante fuente industrial de lisina.
Streptomyces su principal importancia radica en la
produccin de antibiticos como anfotericina B,
kanamicina, neomicina, estreptomicina, tetraciclina, etc.

Levaduras
Las levaduras se vienen utilizando desde hace miles de
aos para la fabricacin de pan y bebidas alcohlicas.
La levadura que sin duda fu la primera y an hoy en
da sigue siendo la ms utilizada por el hombre es
Saccharomyces cerevisiae de la que se emplean
diferentes cepas para la fabricacin de cerveza, vino,
sake, pan y alcoholes industriales.
Kluyveromyces fragilis es una especie fermentadora de
la lactosa que se explota en pequea escala para la
produccin de alcohol a partir del suero de la leche.
Yarrowia lipolytica es una fuente industrial de cido
ctrico. Trichosporum cutaneum desempea un
importante papel en los sistemas de digestin aerbica
de aguas residuales debido a su enorme capacidad de
oxidacin de compuestos orgnicos, includos algunos
que son txicos para otras levaduras y hongos, como
los derivados fenlicos.

Hongos filamentosos

Los hongos son la base de muchas fermentaciones

como la combinacin de soja, habichuelas, arroz y
cebada que dan lugar a los alimentos orientales miso,
shoyu y tempeh. Los hongos son tambin la fuente de
muchos enzimas comerciales (amilasas, proteasas,
pectinasas), cidos orgnicos (ctrico, lctico),
antibiticos (penicilina), quesos especiales
(Camembert, Roquefort) y, evidentemente, de las
setas.

Antibitico
Organismo productor
Organismos blanco
Sitio o modo de accin
Penicilina
Penicillium chrysogenum (H)
Bacterias Gram +
Sntesis de la pared
Cefalosporina
Cephalosporium acremonium (H)
Bacterias Gram + y Sntesis de la pared
Bacitracina
Bacillus subtilis (B)
Bacterias Gram +
Sntesis de la pared
Polimixina B
Bacillus polymyxa (B)
Bacterias Gram +
Membrana celular
Anfotericina B
Streptomyces nodosus (B)
Hongos
Membrana celular
Eritromicina
Streptomyces erythreus (B)
Bacterias Gram +
Sntesis proteica
Neomicina
Streptomyces fradiae (B)
Bacterias Gram + y Sntesis proteica
Streptomycin
Streptomyces griseus (B)
Bacterias Gram Sntesis proteica
Tetraciclina
Streptomyces rimosus (B)
Bacterias Gram + y Sntesis proteica
Vancomicina
Streptomyces orientalis (B)
Bacterias Gram +
Sntesis proteica
Gentamicina
Micromonospora purpurea (B)
Bacterias Gram + y Sntesis proteica
Rifampicina
Streptomyces mediterranei (B)
M. tuberculosis
Sntesis proteica
Griseofulvina
Penicillium griseofulvum (H)
Hongos dermatfitos
Microtbulos
Tabla: Principales antibiticos obtenidos de microorganism

Organismo
productor

Organismos
blanco

Penicilina

Penicillium
chrysogenum
(H)

Bacterias Gram Sntesis de la

+
pared

Cefalosporina

Cephalosporiu
m acremonium Bacterias Gram Sntesis de la
(H)
+ypared

Bacitracina

Bacillus subtilis Bacterias Gram Sntesis de la

(B)
+
pared

Polimixina B

Bacillus
polymyxa (B)

Bacterias Gram Membrana

+
celular

Streptomyces
Anfotericina B nodosus (B)

Membrana
celular

Antibitico

Eritromicina

Streptomyces
erythreus (B)

Hongos

Sitio o modo
de accin

Bacterias Gram Sntesis

+
proteica

Neomicina

Streptomyces
fradiae (B)

Bacterias Gram Sntesis

+yproteica

Streptomycin

Streptomyces
griseus (B)

Bacterias Gram Sntesis

proteica

Tetraciclina

Streptomyces
rimosus (B)

Bacterias Gram Sntesis

+yproteica

Vancomicina

Streptomyces
orientalis (B)

Bacterias Gram Sntesis

+
proteica

Gentamicina

Micromonospor Bacterias Gram Sntesis

a purpurea (B) + y proteica

Rifampicina

Streptomyces
mediterranei
(B)

Sntesis
M. tuberculosis proteica

Griseofulvina

Penicillium
griseofulvum
(H)

Hongos
dermatfitos

Microtbulos

SINCRONA DE CULTIVOS
Mitosis en clulas de
un cultivo
sincronizado

SINCRONA DE CULTIVOS
Se considera a un cultivo en sincrona cuando
todas las clulas se encuentran en la misma fase
de la curva de crecimiento
Tener clulas
sincronizadas permite
medir el parmetro
deseado en todas las
clulas en lugar de
tener un promedio
Streptococcus

MTODOS DE SINCRONIZACIN:

Alteracin fisiolgica
Ciclo de crecimiento
Gradiente de sacarosa
Gradiente de polietilnglicol
Filtros en membrana

ALTERACIN FISIOLGICA
En el medio de cultivo se limita la cantidad de
aminocidos y timina lo que afecta la sntesis
de protenas y DNA
Estas condiciones obligan a las clulas a
disminuir algunas funciones vitales
Al regresar a las clulas a un medio de cultivo
normal, casi todas reinician al mismo tiempo
sus funciones normales

CICLO DE CRECIMIENTO
Conociendo

de

forma

aproximada

el

tiempo de generacin de la clula se

hacen pases sucesivos a medios de cultivo
fresco

GRADIENTES
De sacarosa
4%

Paquete
celular en fase
log

12
%

Sobrenadan
te
a emplear

5000 6000g
30 40 minutos

El gradiente con Polietilnglicol contiene:

Sacarosa
Polietilnglicol (PM 8000 a 15000)
Percoll
Con este gradiente se logran mejores
resultados

contando

mantienen

la

generaciones

con

sincrona

clulas
hasta

que

por

FILTRACIN CON MEMBRANAS

(NITROCELULOSA)

Se coloca en un vaso y agrega

medio de cultivo, las clulas se
desprenden a medida que se
reproducen

En dependencia del uso que se les de al cultivo

se elige el mtodo y el nmero inicial de
clulas
El grado de sincrona (F) se calcula de acuerdo a la
siguiente ecuacin

Nt

F
2
No

No = Nmero de clulas iniciales

Nt = Nmero de clulas despus de un ciclo
Tiempo de generacin promedio
= Tiempo en que se estabiliza el nmero de
clulas

Sincrona
perfecta:

0
Nt = 2No
F=1
Si F: 0.6 0.8 la
sincrona es
buena