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Cromatografia Lquida de Alta Eficincia

(HPLC)

Breve introduo
Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) o tipo mais verstil e mais amplamente empregado de
cromatografia por eluio.

Na cromatografia lquida, a fase mvel um solvente lquido, o qual contm a amostra na forma de uma
mistura de solutos.
O tipo de cromatografia lquida de alta eficincia geralmente definido pelo mecanismo de separao ou
pelo tipo de fase estacionria:
(1) partio ou cromatografia lquido-lquido;
(2) adsoro ou cromatografia lquido-slido;
(3) troca inica ou cromatografia de ons;
(4) cromatografia por excluso;
(5) cromatografia por afinidade;
(6) cromatografia quiral.
A cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) tornou-se uma ferramenta analtica indispensvel. Os
laboratrios criminais e os programas de televiso policiais e forenses, como CSI, CSI Miami, Crossing Jordan
e Law and Order, frequentemente empregam a CLAE no processo de obteno de evidncias criminais.

Historia
Nos anos de 1960 que se desenvolveu a tecnologia para
produzir e utilizar recheios com dimetros de partculas
to pequenos como 3 a 10 m.
O termo cromatografia lquida de alta eficincia
sempre empregado para distinguir essa tecnologia dos
procedimentos cromatogrficos realizados em colunas
simples que os precederam.
A cromatografia de coluna simples, contudo, ainda
encontra considervel uso para propsitos preparativos.

Como funciona?
um tipo de cromatografia lquida que emprega
pequenas colunas, recheadas de materiais
especialmente preparados e uma fase mvel (solvente)
que eluda sobre altas presses.

Qumica Forense (metablitos


de drogas)
Bioqumica (protenas,
aminocidos, esteroides)

APLICAES

Cincias ambientais
Alimentos (corantes artificiais,
aflatoxicinas, aditivos,
antioxidantes)
Farmacologia (frmacos)
Toxicologia (pesticidas)

Bombas de alta presso


Permitem vencer a resistncia passagem da F.M. exercida pelas
partculas da F.E.
Funo: proporcionar fluxo constante e reprodutvel de F.M. a todo o
sistema.

Solventes (Fase mvel)

Sistemas de Introduo de Amostras


(INJETORES)
O mtodo mais empregado de introduo da amostra em
cromatografia lquida baseado em um sistema com ala de
amostragem.
Frequentemente as alas intercambiveis esto disponveis
para permitir a escolha do volume da amostra de 5 a 500 L.

vlvula de 6 prticos (orifcios)

Detectores

Funo do detector: identificar a presena de substncias de interesse


que estejam eluindo da coluna cromatogrfica, proporcionando uma
identificao e quantificao continua dos componentes da amostra.
-Detectores baseados na absoro de luz UV/VIS (mais
amplamente empregados - radiao ultravioleta (190 400 nm) ou visvel (400 - 800 nm);
O detector deve ser
-Detector no UV/VIS com arranjo de fotodiodos (DAD)
pequeno e
(a bsorbncia de uma amostra pode ser determinada em
compatvel com a
todos os de modo Simultneo)
vazo de lquido.
O detector a ser
-Detectores baseados na fluorescncia (> sensibilidade
empregado vai
UV )
depender da
natureza da
-Detectores baseados no espalhamento da luz
amostra.
-Detectores baseados no ndice de refrao
-Detectores eletroqumicos (+utilizado para fludos

Vantagens x Desvantagens

F.E. utilizada vrias vezes


Versatilidade

Alto Custo do equipamento

Tempo reduzido de anlise

Alto custo de manuteno

Alta resoluo

do equipamento

Anlise qualitativa

Necessita de experincia do

Resultados quantitativos

operador

Detectabilidade
Automao