CROMATOGRAF

A
EQUIPO 4

INTRODUCCIN
La caracterstica que distingue a la
cromatografa de la mayora de los
mtodos fsicos y qumicos de
separacin, es que se ponen en
contacto dos fases mutuamente
inmiscibles. La fase estacionaria y la
mvil.

Una muestra que se introduce en la fase mvil es transportada a lo

largo de la columna que contiene una fase estacionaria distribuida. Las
especies de la muestra experimentan interacciones repetidas (repartos)
entre la fase mvil y la fase estacionaria. Cuando ambas fases se han
escogido en forma apropiada los componentes de la muestra se
separan gradualmente en bandas en la fase mvil.

Al
final
del
proceso
los
componentes separados emergen
en orden creciente de interaccin
con la fase estacionaria. El
componente menos retardado
emerge primero, el retenido ms
fuertemente eluye al ltimo.

TIPOS DE CROMATOGRAFA
La cromatografa puede clasificarse
de acuerdo al tipo de equilibrio
involucrado, mismo que es
gobernado por el tipo de fase
estacionaria utilizada. As la
cromatografa puede ser de:

*Adsorcin.
*Particin.
*Intercambio.
*Inico exclusin.
*Afinidad.

CROMATOGRAFA DE ADSORCIN
La fase estacionaria es un slido en el que
los componentes de la muestra son
adsorbidos. La fase mvil puede ser un
lquido (cromatografa lquido-slido) o un
gas (cromatografa gas-slido); los
componentes se distribuyen entre dos
fases a travs de la combinacin de los
procesos de adsorcin y desorcin. La
cromatografa de capa fina (TLC) es un
ejemplo especial de cromatografa por
adsorcin en la cual la fase estacionaria es
un plano, en la forma de un soporte slido
en un plato inerte.

CROMATOGRAFA DE PARTICIN
La fase estacionaria de la
cromatografa de particin es un
lquido soportado en un slido
inerte. Otra vez, la fase mvil puede
ser un lquido (cromatografa de
particin lquido-lquido) o un gas
(cromatografa de particin gaslquido, GLC). La cromatografa en
papel es un tipo de cromatografa de
particin en la cual la fase
estacionaria es una capa de agua
adsorbida en una hoja de papel.

CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO

La separacin en la cromatografa de intercambio inico depende la
adsorcin reversible de molculas de soluto cargadas, a una resina con
grupos inicos de carga opuesta.
El mecanismo de separacin se basa en un equilibrio de intercambio
inico. Muchos de los experimento de intercambio inico se llevan a
cabo en cinco etapas.

La primera etapa es un equilibrio en el cual el intercambiador inico se

encuentra en las condiciones apropiadas de pH y fuerza inica, lo que
permitir la unin de las molculas de soluto.

En una segunda etapa se encuentra la aplicacin de la muestra y su

adsorcin, en la cual las molculas del soluto llevan a cabo el apropiado
desplazamiento de carga de los contra-iones y se unen reversiblemente
al gel. Las substancias que no se unen son eludas de la cama del
intercambiador usando el buffer inicial.

En la tercera etapa, se lleva a cabo la desorcin de la muestra

cambiando las condiciones de elusin, al desfavorecer la formacin del
enlace inico de las molculas de la muestra y la cama del
intercambiador. Esto normalmente se logra aumentando la fuerza inica
del buffer de elusin o cambiando su pH.

En las cuarta y quinta etapas corresponden a la remocin de sustancia

no eludas bajo las condiciones experimentales previas y regresar al
equilibrio de las condiciones iniciales para la siguiente purificacin. La
separacin de diferentes sustancias se lleva a cabo porque stas tienen
diferentes grados interaccin con el intercambiador inico debido a
diferencias en sus cargas, densidades de carga y distribuciones de
carga en su superficie.

CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN
En la cromatografa de exclusin puede separarse molculas solvatadas
de acuerdo a su tamao y habilidad a penetrar en una estructura tamiz
(la fase estacionaria). La separacin en cromatografa de particin y en
cromatografa de intercambio inico se logra de diferentes interacciones
de solutos con la fase mvil y la fase estacionaria. En contraste, las
separacin en cromatografa de exclusin por tamao se lleva a cabo
por diferencias en tamao molecular y la habilidad de diferentes
molculas para penetrar los poros de la fase estacionaria a diferentes
tamaos o magnitudes. La cromatografa de exclusin por tamao se
usa extensivamente para las separaciones preparativas de
macromolculas de origen biolgico, as como para la purificacin de
polmeros orgnicos sintticos.

CROMATOGRAFA DE AFINIDAD
Este tipo de cromatografa utiliza interacciones altamente especficas
entre un tipo de molculas de soluto y una segunda molcula unida
covalentemente (inmovilizada) a la fase estacionaria. Por ejemplo, la
molcula inmovilizada podra ser un anticuerpo especfico para un
protena particular. Cuando una mezcla cruda que contiene miles de
protenas se pasa a travs de una columna, slo una protena reacciona
con el anticuerpo que est unido a la columna. Despus de lavar todos
los otros solutos de la columna, la protena deseada es desplazada del
anticuerpo cambiando el pH , la fuerza inica o la polaridad. Las
interacciones entre las molculas del ligando y blanco pueden ser el
resultado de interacciones hidrofbicas o interacciones electrostticas,
fuerzas de van der Waals y/o puentes de hidrgeno.

REFERENCIA
*Romero Garca Aida Susana, (2002). CROMATOGRAFA. Curso de
Mtodos, pp. 3 17. [En lnea] Disponible en:
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/Cromatografia.pdf