PLASMIDOS

M PM

11,000 pb
7,600 pb
6,900 pb
5,200 pb
2,400 pb
520 pb

Circular relajado
Lineal de longitud completa

Sper enrollado

PLSMIDO
S

Transformacin gnica y
Manipulacin gentica de
procariotas y eucariotas

vectore
s
Son muy tiles para promover la sntesis en
grandes cantidades de protenas u otros
metabolitos de inters, como la insulina o los
antibiticos, mediante un procedimiento
conocido como transformacin.

Se encuentran en una
amplia variedad de
especies de bacterias y
se mantienen slo en
un conjunto de especies
estrechamente
relacionadas

Son dispensables, su
manipulacin no
tiene consecuencias
adversas en el
hospedero

Fcilmente
aislables y
manipulables in
vitro

Organizacin gentica
simple, estn
involucradas en varios
mecanismos para
mantener estable el
no. de copias en el
hospedero
Son molculas de
ADN extracromosomal de 1 a
ms de 200 kpb

CARACTERSTICAS

Se replican de una
manera autnoma autocontrolada, con el uso
de la maquinaria de
replicacin (enzimas) de
su hospedero

Contienen genes
que codifican para
enzimas que dan
ventajas al
hospedero

El nmero de copias est definido por el replic

Replicn
Unidad gentica que consiste en un origen de replicacin de
ADN y sus elementos de control asociados. Es la pieza ms
pequea del ADN plasmdico capaz de replicarse
autnomamente y de mantener un no. de copias normal.
Origen de
replicacin
Segmento de ADN de varios cientos de pb de longitud
que contiene en sitios de accin cis, un conjunto de
elementos de control para difusin del plsmido y
elementos codificados por el hospedero para el inicio
de la sntesis de ADN.

Plsmido

Replicn

No. copias

pBR322

pMB1

15-20

pUC

pMB1
modificad
o

500-700

pMOB45

pKN402

15-118

pACYC

pI5A

18-22

pSC101

pSC101

~5

colE1

colE1

15-20

Referencias
Bolivar et al. (1997)
Vieira and Messing
(1982;1987); Messing
(1983); Lin Chao et al.
(1992)
Bittner and Vapnek (1981)
Chang and Cohen (1978)
Stoker et al. (1982)
Kanh et al. (1979)

PLSMIDOS COMO VECTORES

Vectores de
clonacin
Sirven para amplificar
los fragmentos de ADN
exgenos que se
desean utilizar en un
estudio.

Vectores de expresin
Poseen secuencias
reguladoras en su
construccin para permitir la
transcripcin del gen
exgeno, en clulas
transformadas in vivo.
La efectividad ptima suele
encontrarse en
construcciones entre 10 y 15
Kpb

Para que un plsmido funcione como vector:

Marcado
r de
seleccin

Replic
n

VECTO
R

Tamao
de 3 a
15 Kpb

Sitios de
restriccin
(naturales
o
artificiales
)

MARCADORES DE SELECCIN

1) Seleccin por resistencia.

Se hace uso de la resistencia a antibiticos principalmente y
puede ser a) simple o b) doble marcacin.

2) Seleccin por complementacin

Se hace uso de la reaccin colorida que emite la galactosidasa con la galactosa en presencia de un cromforo
IPTG.

3) Seleccin positiva
El vector posee un gen letal-Know-out y slo cuando el inserto
interrumpe su secuencia las bacterias son viables.

1a)

ADN FORNEO
+

LB ampicilina

ADN FORNEO

1b)
-

ADN FORNEO

LB ampicilina + tetraciclin

+
ADN FORNEO
LB ampicilina
Entre gen de resistencia a Tetr

LB tetraciclina

Transformantes con insert

Lesin en gen lac Z

2)

+ Inserto de inters

LB + IPTG + X-Gal

LB + IPTG + X-Gal

3)
Envenenad
as por la
protena de
ccdB

+
ADN forneo

LB +
kanamicina