CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFA
Tswett, un cientfico ruso, informo en 1906
acerca de la separacin de los componentes
de diferentes colores procedentes de hojas
al hacer pasar un extracto de estas a travs
de una columna de carbonato de calcio,
almina y sacarosa.
Acu el trmino cromatografa con las
palabras griegas que significan color y
escribir.

CROMATOGRAFA
La Unin Internacional de Qumica
Pura y Aplicada (IUPAC) ha propuesto
una definicin de cromatografa:
cromatografa es un mtodo fsico de
separacin, en el que los componentes
a separar se distribuyen entre dos
fases,
una
estacionaria
(fase
estacionaria) y otra que se mueve
(fase mvil) en una direccin definida

CROMATOGRAFA
Los
dos
tipos
principales
de
cromatografa son la cromatografa de
gases (GC) y la cromatografa de
lquidos (LC).
En la cromatografa de gases se
separan sustancias gaseosas con base
en su adsorcin o particin en una fase
estacionaria a partir de una fase
gaseosa.

CROMATOGRAFA
La cromatografa de lquidos comprende
tcnicas como:
La de exclusin de tamao (separacin
basada en el tamao molecular).
Intercambio inico (separacin basada en
cargas elctricas) y
Cromatografa de lquidos de alta eficiencia
(HPLC,
high-performance
liquid
chromatography), basada en la adsorcin o
separacin de una fase lquida.

PRINCIPIOS DE LAS SEPARACIONES

CROMATOGRFICAS

Si bien los mecanismos de retencin

en los diversos tipos de cromatografa
difieren, todos se basan en establecer
un
equilibrio
entre
una
fase
estacionaria
y una
mvil.entre una
Un soluto est
en fase
equilibrio
fase mvil y una estacionaria. Cuanto
ms
interacte
con
la
fase
estacionaria,
ms
lentamente
se
mover a travs de una columna.

PRINCIPIOS DE LAS SEPARACIONES

CROMATOGRFICAS

En la Figura se ilustra la separacin de

esos componentes en una columna
cromatogrfica.

PRINCIPIOS DE LAS SEPARACIONES

CROMATOGRFICAS
Se coloca un pequeo volumen de la
muestra en la parte superior de la
columna,
llena
con
partculas
cromatogrficas (fase estacionaria) y
disolvente. Se agrega la fase mvil de
disolvente a la columna y se deja que
salga lentamente por su parte inferior.
Los
componentes
individuales
interactan con la fase estacionaria con
diversas intensidades,

PRINCIPIOS DE LAS SEPARACIONES

CROMATOGRFICAS

El equilibrio de distribucin se define

con la constante de distribucin

donde [X]s es la concentracin del

componente X sobre o en la fase
estacionaria,
y
[X]m
es
su
concentracin en la fase mvil.

PRINCIPIOS DE LAS SEPARACIONES

CROMATOGRFICAS

Esta constante de equilibrio est

gobernada por la temperatura, la clase
de compuesto y las fases estacionaria
y mvil. Tambin se llama coeficiente
de distribucin o coeficiente de
particin en la cromatografa de
particin.

PRINCIPIOS DE LAS SEPARACIONES

CROMATOGRFICAS
Los solutos con un valor grande de Kc sern retenidos
con mayor fuerza por la fase estacionaria que los que
tienen un valor pequeo. Como resultado, estos ltimos
avanzaran por la columna (sern eluidos) con mayor
rapidez.

EJEMPLO
La cromatografa en columna es una
tcnica para separar una mezcla de
dos o mas compuestos de polaridad
diferente por distribucin del soluto
entre 2 fases:
ESTACIONARIA : Adsorbente
MVIL : Eluyente

EJEMPLO
Por la naturaleza de las fases
involucradas la cromatografa en
columna es del tipo slido lquido y es
una tcnica basada en la adsorcin y
la solubilidad constituyendo ambas
un equilibrio.

EJEMPLO
En la adsorcin existen diferentes
interacciones que originan a que las
molculas orgnicas se unan a la
superficie del adsorbente con mayor o
menor fuerza, dependiendo de la
naturaleza polar o no polar de los
compuestos.

EJEMPLO
Las molculas no polares interaccionan
dbilmente con el adsorbente mediante
fuerzas de Van der Waals.
Mientras que las interacciones mas fuertes
se manifiestan con molculas polares que
van desde fuerzas de tipo dipolo dipolo
hasta interacciones mas directas como
enlace
de
coordinacin,
puentes
de
hidrgeno o formacin de sales

EJEMPLO
Un compuesto no polar puede ser muy soluble
en el eluyente por fuerzas de Van der Waals y
dbilmente adsorbido por lo tanto se mover
rpidamente a travs de la columna.
Por el contrario un compuesto polar es
fuertemente atrado por el adsorbente y por
consecuencia se mover mas lento a travs de la
columna, debido a esta diferencia de velocidad
de migracin en la columna de adsorbente

EJEMPLO
Los compuestos de la mezcla se
separan en bandas, cada compuesto
forma su propia banda y se mueve a
su propia velocidad.

Cromatografa de lquidos de
alta eficiencia (HPLC)
Component
es bsicos
de
un
cromatgraf
o
de
lquidos de
alta
eficiencia.

Cromatgrafo
de lquidos de
alta eficiencia.

Columnas de
HPLC.