PINA MAGNTICA

Para Molcula nica

Luciano Dias

RESUMO
No ambiente molecular, devido ao movimento
Browniano, existem muitas flutuaes. Para uma
enzima ligada a uma molcula de DNA, por
exemplo, todo o conjunto se move rapidamente
devido a colises com molculas de gua. Uma
caracterizao mais precisa a nvel singular
dessas macromolculas envolve a imobilizao
parcial das mesmas.
A aplicao de uma fora a uma molcula de
protena, DNA ou RNA, restringe os graus de
liberdade acessveis a ela, pois a confina na
configurao linearizada, e com isso pode-se
monitorar a ao de molculas individuais, em
tempo real.

Pinas magnticas utilizam o gradiente de campo

magntico produzido por pequenos ms ou
eletromagnetos para, por exemplo, puxar
verticalmente microesferas magnticas ancoradas
a uma superfcie por uma dupla fita de DNA ou
RNA, ou ainda esferas ancoradas na superfcie de
clulas.
A fora medida partir de medidas da
amplitude das flutuaes Brownianas da
microesfera, e a distncia calculada atravs da
anlise das imagens das esferas .

FUNCIONAMENTO BSICO

Nas experincias, a molcula de interesse ligada a uma

microparticula magntica.A pina magntica est equipada
com ms que so usadas para manipular as partculas
magnticas cuja posio medida com a ajuda de
microscopia de vdeo.

PARTCULAS MAGNTICAS

Partculas magnticas para a operao em pinas

magnticas vm com uma vasta gama de
propriedades e tm de ser escolhidos de acordo com a
aplicao pretendida.
Dois tipos bsicos de partculas magnticas

GRNULOS SUPER-PARAMAGNTICOS

Esto comercialmente disponveis com uma srie

de caractersticas diferentes.O mais comum a
utilizao de partculas esfricas de um dimetro
na gama do micrmetro.Eles consistem de uma
matriz porosa de ltex em que nanopartculas
magnticas foram incorporados.O ltex autofluorescente,e, portanto, pode ser vantajoso para
a imagiologia da sua posio.

NANOFIOS FERROMAGNTICOS
O uso de nanofios ferromagnticos para a operao
de uma pina magntica amplia a sua variedade
de aplicao experimental.O comprimento destes
fios tipicamente na ordem de dezenas de
nanmetros at dezenas de micrmetros, que
permitem a aplicao de foras e campos muito
maiores.
Alm disso, eles apresentam um momento
magntico remanescente.Isto permite a operao
em fracas foras do campo magntico.

DETERMINAO DA FORA

A foraexperimentada por uma microesfera pode ser

derivada a partir do potencial

O Potencial

E o momento magntico

TIPOS DE IMS

ms permanentes
ms permanentes de pinas magnticas so
geralmente a partir de matria rara, como
neodmioe pode atingir a intensidade de campo
superior a 1,3 Tesla.A fora sobre os grnulos
pode ser controlada movendo-se os ms ao longo
do eixo vertical

Eletroms
O uso de eletroms nas pinas magnticas
tem a vantagem de que a intensidade do campo e
direo podem ser alteradas ajustando apenas a
amplitude e a fase da corrente para os ms.Por
esta razo, os ms no precisa de ser movido,
que permite um controlo mais rpido do sistema
e reduz o rudo mecnico.

SISTEMA DE RASTREAMENTO DO GRNULO

Numa configurao tpica, o volume experimental

iluminado a partir da parte superior de modo
que as esferas possa produzir anis de difrao no
plano focal de uma objetiva que colocado sob a
superfcie da tethering (Tethering um termo
em ingls que corresponde prtica de utilizar-se
de um dispositivo mvel)

IMAGEM DE ANIS DE DIFRAO

O padro de difrao ento gravado por uma

cmara CCD (Dispositivo de carga
acopladaouCCD(charge-coupled device) um
sensor semicondutor para captao de
imagensformado por um circuito integradoque
contm uma matriz de capacitoresacoplados.)
A imagem pode ser analisada em tempo real por
um computador.

A deteo da posio no plano da superfcie de

amarrao no complicada, uma vez que
corresponde ao centro dos anis de difrao.

CALIBRAO DA FORA APLICADA

Um dos mtodo usar o arrastamento viscoso das

microesferas: Por conseguinte, as microesferas so puxadas
atravs do meio viscoso durante a gravao da sua
posio.Uma vez que o nmero de Reynolds para o sistema
muito baixo, possvel aplicar a lei de Stokes para
calcular a fora de atrito que est em equilbrio com a fora
exercida pelos ims:

A velocidade pode ser determinada usando os valores de

velocidade gravados.A fora obtida atravs desta frmula
pode ento ser relacionado a uma determinada configurao
dos ms, o que pode servir como uma calibrao.

PARNTESE

O coeficiente, nmero ou mdulo

deReynolds(abreviado comoRe) umnmero
adimensionalusado emmecnica dos fluidos
para o clculo do regime de escoamento de
determinadofluidosobre uma superfcie.

ESQUEMA COMPLETO DO APARATO

COMPARAO COM OUTRAS TCNICAS

A interao magntica altamente especfica

para as microesfras magnticas.
O campo magntico praticamente no afeta a
amostra.

ENQUANTO...

As pinas pticas tm o problema de que o feixe de

laser pode tambm interagir com outras partculas
da amostra biolgica devido contrastes no ndice
de refrao.Alm disso, o laser pode causar
fotodano e aquecimento da amostra.
No caso de microscopia de fora atmica, pode ser
difcil discriminar o tipo de interao com a
molcula estudada a partir de outras interaes
no especficas (Vibraes podem atrapalhar o
funcionamento do microscpio de fora atmica, ou
seja, o som ambiente, vibraes mecnicas).

APLICAES
Monitoramento das interaes do DNA-protena
Controlar e monitorar o funcionamento mecnico
do DNA, RNA e Protenas.
Entre outros...

EXEMPLO: DINMICA RPIDA DE DNA SUPERENROLADO

REVELADAS POR EXPERINCIAS DE MOLCULA NICA
AURELIEN CRUT*, DANIEL A. KOSTER*, RALF SEIDEL*, CHRIS H. WIGGINS, AND NYNKE H.
DEKKER*

A dinmica de DNA super-enrolado desempenha

um papel importante em diversos processos
celulares tais como replicao e transcrio que
envolvem super-enrolamento de DNA. Ns
apresentamos experincias que melhoram a nossa
compreenso dessas dinmicas atravs da
medio da resposta intrnseca de molculas
individuais de DNA para mudanas bruscas de
tenso ou toro.
Os dinmica observada pode ser descrito com
preciso por modelos quase-esttico,
independentes do grau de super-enrolamento
inicialmente presentes nas molculas

O primeiro conjunto de experimentos fornece

uma linha de base, abordando a dinmica de
alongamento de molculas de DNA e o
relaxamento do mesmo aps a aplicao sbita de
uma fora externa.
Esta experincia facilitada pela combinao de
duas tcnicas amplamente utilizadas, pinas
pticas e magnticas.
Uma vantagem significativa desta configurao
experimental combinada a possibilidade de
controlar a taxa de alongamento do DNA.

BIBLIOGRAFIA

I. D. Vilfan, J. Lipfer t, D. A . Koster, S. G. Lemay, and N . H. Dekker. Magnetic Tweezers

for Single-Molecule Experiments
Aurlien Crut, Daniel A. Koster, Ralf Seidel, Chris H. Wiggins, and Nynke H. Dekker. Fast
dynamics of supercoiled DNA revealed by single-molecule experiments